鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗对SPF鸡和商品肉鸡的免疫效果观察

詹先强　福州大北农生物技术有限公司福州350014



鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗对SPF鸡和商品肉鸡的免疫效果观察

詹先强福州大北农生物技术有限公司福州350014

用鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗（La Sota+HQ株）分别免疫1、7、14日龄SPF雏鸡，1日龄免疫组于25日龄采血，法氏囊病中和抗体几何平均值为15.5log2，攻毒保护10/10；7日龄免疫组于30日龄采血，法氏囊病中和抗体几何平均值为14.8log2，攻毒保护10/10；14日龄免疫组于35日龄采血，法氏囊病中和抗体几何平均值为15.4log2，攻毒保护10/10。3组在50日龄时法氏囊病中和抗体几何平均值依次为16log2、16.1log2、15.9log2，攻毒保护均为10/10。用鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗（La Sota+HQ株）免疫带有母源抗体的1、7、14日龄商品肉鸡，免后25 d血清法氏囊病中和抗体几何平均值分别为12.4log2、15log2、14.2log2，攻毒保护分别为8/10、10/10、9/10；3组在50日龄时法氏囊病中和抗体几何平均值依次为16.2log2、15.7log2、15.5log2，攻毒保护均为10/10。

关健词免疫中和抗体攻毒保护

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是雏鸡的一种急性、接触性传染病。防控该病通常采用灭活疫苗（种鸡被动免疫）和活毒疫苗。雏鸡免疫活毒苗，常受母源抗体干扰而导致免疫失败，或因毒力过强造成免疫抑制。近年来，河南农业大学禽病研究所对IBD病毒液培养工艺进行了大量研究［1］，改用传代细胞和生物反应器培养病毒（均已获发明专利），使灭活疫苗中抗原含量大大提高。福州大北农生物技术有限公司购买河南农业大学技术后，采用上述专利技术制备出鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗（La Sota+HQ株，商品名新法宝，以下简称新法宝），本试验目的在于探讨1、7、14日龄SPF鸡和商品肉鸡免疫新法宝后鸡传染性法氏囊病的抗体动态和攻毒保护，为新法宝的推广和应用提供科学依据。

1　材料及方法

1.1试验用疫苗新法宝，福州大北农生物技术有限公司（以下简称福州大北农）生产，生产批号2014001，有效期至20150603。

1.2试验用鸡

1.2.1SPF鸡试验组SPF种蛋购自北京梅里亚维通试验动物有限公司，自行孵化出雏后置隔离器内饲养至所需日龄。小鸡出壳后随机分组，3组免疫组，每组20羽，另设40羽作为对照组。分组完成后将每羽雏鸡用翅标进行编号。第1组20羽于1日龄免疫，第2组20羽于7日龄免疫，第3组20羽于14日龄免疫。3组免疫组每羽鸡均颈部皮下注射新法宝0.2 mL；另40羽不免疫，作为对照。上述各组鸡按组别在不同隔离器内喂养，除免前采血外，1日龄免疫组25日龄时采血测抗体和攻毒，7日龄免疫组30日龄时采血测抗体和攻毒，14日龄免疫组35日龄时采血测抗体和攻毒。3组均于50日龄时再次采血测抗体和攻毒。

1.2.2商品白羽肉鸡试验组1日龄商品白羽肉鸡100羽，购自福建森宝鸡场，购回后在隔离器中饲养。将雏鸡随机分组，3组免疫组每组20羽，另设40羽作为对照组。分组完成后将每羽雏鸡用翅标进行编号。其中第1组20羽于1日龄免疫；第2组20羽于7日龄免疫；第3组20羽于14日龄免疫。3组免疫组每羽鸡均颈部皮下注射新法宝0.2 mL；另40羽不免疫，作为对照。上述各组鸡按组别在不同隔离器内喂养，除免前采血外，第1组（1日龄免疫组）25日龄时采血测抗体和攻毒，第2组（7日龄免疫组）30日龄时采血测抗体和攻毒，第3组（14日龄免疫组）35日龄时采血测抗体和攻毒，3组均于50日龄时再次采血测抗体和攻毒。

1.3检验用材料鸡传染性法氏囊病ELISA抗体试剂盒，生产厂家IDEXX，批号：MAR-2014；鸡传染性法氏囊病（HQ株）抗原，基础种子由河南农业大学禽病研究所提供，福州大北农生产，批号为BS2015001；攻毒用强毒为法氏囊病病毒BC6-85株，购自中国兽医药品监察所，批号为200208。

1.4抗体测定方法法氏囊病中和抗体（以下中和抗体均指法氏囊病中和抗体）检测方法为法氏囊病微量中和试验，按2010版《中华人民共和国兽药典》附录中和试验进行［2］，在96孔微量细胞培养板上操作，采用固定抗原稀释血清的β微量法，抗原用200个TCID50；鸡传染性法氏囊病ELISA抗体按试剂盒说明书要求操作。

1.5攻毒试验按中华人民共和国农业部公告第326号效力检验鸡传染性法氏囊病部分的攻毒法进行。第1组在25日龄，第2组在25日龄，第3组在30日龄及第1、2、3组在第50日龄时进行攻毒；攻毒时各免疫组随机选取10羽，连同挑对照组鸡10羽，经口接种鸡传染性法氏囊病病毒BC6-85强毒株，每羽0.2 mL（含2×104BID50），72 h后全部剖杀，检查各组法氏囊病的病变，在对照组鸡至少9/10有病变的情况下判定各免疫组的保护率。每组在攻毒前采血。

表1　 SPF鸡与商品肉鸡免疫新法宝后的抗体动态

2　结果

2.1SPF鸡试验组抗体动态与攻毒保护4组鸡免前中和抗体均为0。第1组（1日龄免疫组）25日龄时中和抗体几何平均值为15.5 log2，对照组（第4组）中和抗体为0；免疫组攻毒保护10/10，对照组攻毒保护0/10。第2组（7日龄免疫组）30日龄时中和抗体几何平均值为14.8 log2，对照组中和抗体为0；免疫组攻毒保护10/10，对照组攻毒保护0/10。第3组（14日龄免疫组）35日龄时中和抗体几何平均值为15.4 log2，对照组中和抗体为0；免疫组攻毒保护10/10，对照组攻毒保护0/10。50日龄时3个免疫组中和抗体几何平均值依次为16.0 log2、16.1 log2、15.9 log2，对照组中和抗体为0；攻毒保护3个免疫组均为10/10，对照组攻毒保护均为0/10。结果见表1-表2。

2.2商品肉鸡试验组抗体动态与攻毒保护白羽肉鸡免疫前带有较高的母源抗体，4组鸡免前中和抗体几何平均值为11.0 log2～12.6 log2。第1组（1日龄免疫组）25日龄时中和抗体几何平均值为12.4 log2，对照组中和抗体几何平均值为5.5log2；免疫组攻毒保护8/10，对照组攻毒保护0/10。第2组（7日龄免疫组）30日龄时中和抗体几何平均值为15.0 log2，对照组中和抗体几何平均值为3.7log2；免疫组攻毒保护10/10，对照组攻毒保护1/10。第3组（14日龄免疫组）35日龄时中和抗体几何平均值为14.2 log2，对照组中和抗体几何平均值为4.1log2；免疫组攻毒保护9/10，对照组攻毒保护1/9。50日龄时3个免疫组中和抗体几何平均值依次为16.2 log2、15.7 log2、15.5 log2，3个免疫组攻毒保护均为10/ 10，对照组攻毒保护为1/10。结果见表1-表2。

表2　 SPF鸡与商品肉鸡免疫新法宝后的攻毒保护

3　讨论

1）试验结果表明，SPF鸡试验组在1、7、14日龄免疫新法宝后抗体迅速上升，免后25 d中和抗体几何平均值分别为15.5 log2、14.8 log2、15.4 log2，攻毒保护均为10/10，而未免疫的SPF对照鸡攻毒保护为0/10；免疫组50日龄时中和抗体几何平均值更高（15.9 log2～16.1 log2），攻毒全部10/10保护，对照组攻毒保护为0/10。带有母源抗体的商品肉仔鸡在1、7、14日龄免疫新法宝后25日龄中和抗体几何平均值分别为12.4 log2、15.0 log2、14.2 log2，攻毒保护依次为8/10、10/10、9/10，而未免疫的对照鸡中和抗体几何平均值下降至5.5 log2～3.7 log2，攻毒保护为0/10～1/9。3组免疫鸡在50日龄时中和抗体几何平均值更高（16.2 log2～15.5 log2），攻毒全部10/10保护。试验结果显示，新法宝对无母源抗体的雏鸡很快产生法氏囊病的主动免疫，对带有母源抗体的商品肉鸡能迅速突破母源抗体干扰，两者均可在免疫后3～4周产生主动免疫抗体，抵抗法氏囊病强毒感染。

2）活毒疫苗免疫受母源抗体干扰，因病毒抗原与母源抗体结合影响病毒复制，可不产生抗体反应，导致免疫失败。如采用高毒力的法氏囊病活苗，则虽可突破母源抗体，但往往引起法氏囊的损伤，造成免疫抑制，且污染养殖环境。试验显示用新法宝免疫SPF鸡后，抗体持续上升，而免疫有母源抗体的商品肉鸡，抗体先稍下降而后持续上升，显示灭活苗免疫也受母源抗体干扰［3-5］。新法宝是采用新的工艺制备法氏囊病抗原病毒液，改原代细胞培养为传代细胞培养，改转瓶培养为生物反应器培养，疫苗中的鸡传染性法氏囊病病毒抗原含量由法定标准规定的106.8TCID50/0.1mL提高至108.5TCID50/0.1mL。抗原效价提高使免疫效力大大提高，从而可克服母源抗体干扰，在免疫后3～4周迅速产生有效的免疫保护。

3）缩短免疫空白期，产生更快、更高、更持久的有效免疫是防控疫病的关键。用法氏囊病灭活疫苗或联苗代替活毒疫苗（或复合疫苗）主动免疫雏鸡可避免因活毒苗受母源抗体干扰造成的免疫失败或因毒力过强造成的免疫抑制，亦可减少环境中法氏囊病病毒污染和频繁免疫对鸡群的应激。因此，宣传和推广新型、高效灭活疫苗有很大的实用价值，有望逐步控制和消灭鸡传染性法氏囊病。

［1］王泽霖,王川庆,赵军,等.用新型、高效灭活疫苗控制和消灭鸡传染性法氏囊病［C］.中国畜牧兽医学会2014年学术年会暨中国畜牧兽医学会禽病学分会第九次全国会员代表大会论文集（广州）,2014：25-26.

［2］中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2010版：第三部［S］.北京：中国农业出版社,2010.

［3］王泽霖李永涛.母源抗体对H 9灭活疫苗免疫的干扰［C］.中国畜牧兽医学会2014年学术年会暨中国畜牧兽医学会禽病学分会第九次全国会员代表大会论文集（广州）, 2014：159.

［4］张评浒,唐应华,赵永忠,等.H 5N 2与H 5N 1禽流感油乳剂灭活疫苗免疫鹅对H5N 1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰［J］.中国兽医学报,2005,26（3）：268-274.

［5］Riks Maas,Sigrid Rosema,Diana Van Zoelen,et al.Maternal immunity against avian influenza H5N 1in chickens：limited protection and interference with vaccine efficacy［J］.Avian Pathology,2011,40（1）：87-92.

The immune effect of duplex inactivated vaccines of new castle disease and in fectious bursal disease on SPF chicken and commercial broiler

Zhan Xianqiang
（Fuzhou Dabeinong Biotech Co.Ltd.，Fuzhou 350014）

1，7，14 days of age SPF chicken are respectively vaccinated with a new，efficient inactivated vaccine of infectious bursal disease，and group 1 of chicken immune at 1 day-age，blood collecting at 25 days-age，the neutralizing antibody is up to15.5log2，poison attack protection reaches 10/10；group 2 of chicken immune at 7 days-age，blood collecting at 30 days-age，the neutralizing antibody is up to 14.8log2，poison attack protection reaches 10/10；group 3 of chicken immune at14 days-age，blood collecting at 35 days-age，the neutralizing antibody is up to 15.4log2，poison attack protection reaches 10/10.At 50 days-age of three groups chicken's neutralizing antibody are respectively up to16log2，16.1log2 and15.9log2，and poison attack protection all reaches 10/10.A new，efficient inactivated vaccine immune 1，7，14 days old commercial broilers with maternal antibody，after 25 days，sera-neutralizing antibodies are respectively up to 12.4log2，15log2 and 14.2log2，poison attack protection respectively reach 8/10，10/10 and 9/10；Three groups commercial broilers at the age of 50 days，their neutralizing antibody titers are respectively up to16.2log2，15.7log2，15.5log2，and poison attack protection reaches all 10/10。

Immune Neutralizing antibody Protective efficiency

A

1003-4331（2016）03-0017-03

国家星火计划项目“鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗产业化示范”（S2015C400020）资助。

詹先强（1980-），男，本科，兽医师。从事兽用生物

制品质量控制与管理工作。