血管内皮生长因子单核苷酸多态性与动脉硬化性脑梗死的相关性研究

应涛，方晶晶，陶静，黄丽

血管内皮生长因子单核苷酸多态性与动脉硬化性脑梗死的相关性研究

应涛，方晶晶，陶静，黄丽

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）单核苷酸多态性（SNP）与动脉硬化性脑梗死（ACI）的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，分析 100例 ACI患者与 100例健康对照组VEGF-460T/C、+405G/C与+936C/T基因的多态性。结果ACI组的三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆同醇（LDLC）、血压均高于对照组（均P＜0.05）；两组VEGF+936C/T的基因型和等位基因频率差异均有统计学意义（均P＜0.05），-460T/C与+405G/C基因型和等位基因频率差异均无统计学意义（均P＞0.05）；携带有936T的人群患ACI的机会与非携带者差异有统计学意义（P＜0.05），而ACI发病机会在携带有-460C和405C基因患者与非携带者差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论VEGF+936C/T核苷酸多态性与ACI相关，其基因型是ACI易感基因型，VEGF-460T/C、+405G/C与ACI无关。

血管内皮生长因子；脑梗塞，动脉硬化性；单核苷酸多态性

动脉硬化性脑梗死（ACI），是脑部动脉粥样硬化和血栓形成，使脑血管管腔狭窄或闭塞，导致急性脑供血不足，引起局部脑组织缺血性坏死。患者可出现偏瘫、失语等脑局灶性损害症状，是影响中老年人生活质量和生存率下降的重要原因［1］。然而，目前ACI发病的分子生物学机制仍不明确，遗传的易感性被认为是 ACI发病的一个重要环节。血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知的作用最强的促血管生成因子，可增加血管通透性，保护血管。已发现ACI患者血浆中VEGF水平较正常人群高，VEGF基因的单核苷酸多态性（SNP）位点的不同基因型可显著影响VEGF的表达［2-3］。因此，本研究应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PC-RFLP）技术，对ACI患者 VEGF基因+936C/T、-460T/C 与+405G/C的多态性进行分析，探讨ACI发病机制。报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2015年1月至2016年1月宁波大学医学院附属医院收治的ACI患者100例，符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的ACI的诊断标准。其中男55例，女45例；年龄50～80岁，平均（65±10）岁。另选同期健康体检者100例为对照组，其中男60例，女40例；年龄5～80岁，平均（63±9）岁。两组一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法所有受检者均禁食12～14h，晨起空腹抽取静脉血5 ml，常规分离血清，其中20l用作DNA提取，其余行三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定，并且测量血压。

1.2.1试剂和仪器基因组抽提试剂盒和引物均购自上海生工生物工程服务有限公司，Roche 480实时荧光PCR仪和上海天能科技有限公司电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统等。

1.2.2基因分型取血清 200l，按UNIQ-10柱式临床样品基因组抽提试剂盒说明书提取基因组DNA。用PC-RFLP方法分析 VEGF-460T/C、+405G/C与+936C/T的多态性。引物序列见表1。扩增条件为94℃5 min 1个循环，94℃，30 s→58℃（VEGF-460T/C）62℃，30 s→72℃，30 s 30个循环，72℃5 min 1个循环，其中VEGF-460T/C退火温度为62℃。1.3统计方法用SPSS 14.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差表示，各组比较用 检验；基因型的Hardy-Weinberg平衡采用X2检验；研究不同基因型与ACI间的关系用多元Logistic回归分析；调整的危险因素关联程度用相对危险度（CR）及其95%可信区间（CI）表示。P＜0.05为差异有统计学意义。

表1VEGF-460T/C、+405G/C与+936C/T引物序列

2　结果

2.1ACI组与对照组临床资料分析

ACI组的TG、LDL-C、血压均高于对照组（均P＜0.05），见表2。2.2Hardy-Weinberg平衡验ACI组的VEGF+936C/T、-460T/C与+405G/C 3个位点基因分型理论频数合和观察频数差异无统计学意义（P＞0.05），符合Hardy-Weinberg平衡，具有群体代表性。见表3。

表2　脑梗死组与对照组一般临床资料比较

表3ACI组基因型分布Hardy-Weinberg检验

2.3VEGF+936C/T、-460T/C与+405G/ C位点的等位基因频率和基因型分析两组VEGF+936C/T的基因型和等位基因频率差异有统计学意义（X2=9.70、6.88，均P＜0.05），见表4。VEGF-460C等、VEGF+405C等位点基因型和等位基因频率分布情况差异均无统计学意义（X2≤2.56，均P＞0.05）。见表5、6。

2.4VEGF SNP与ACI的关系带有936T的人群患ACI的机会与非携带者差异有统计学意义（P＜0.05），而ACI发病机会在携带有-460C和405C基因患者与非携带者差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表7。

表4　两组中VEGF+936C/T位点等位基因频率和基因型分析

表5　两组中VEGF-460T/C位点等位基因频率和基因型分析

表6　两组中VEGF+405G/C位点等位基因频率和基因型分析

3　讨论

VEGF是胱氨酸生长因子超家族的一员，具有促进血管内皮细胞分裂、诱导血管生成的作用［4］，其 SNP位点以VEGF+936C/T、-460T/C与+405G/C最重要［5］，这些 SNP位点可能通过影响VEGF的转录或表达而影响疾病的发生、发展和预后［6-7］。

ACI发病是一个较复杂病理生理过程，环境因素和遗传因素被认为是ACI发病的重要环节。本研究中，ACI组的TG、LDL-C、血压均高于对照组（均P＜0.05），表明环境因素中高脂血症和高血压等都是 ACI发生的重要危险因素。Hardy-Weinberg平衡法则是群体遗传学中的一个基本定律，它是进行人群基因多态性研究的前提和基础，本实验结果显示，ACI组的VEGF+936C/T、-460T/C 与+405G/C 3个位点基因分型结果符合Hardy-Weinberg平衡，表明结果具有群体代表性；VEGF+936C/T在ACI组中的分布频率高于对照组（P＜0.05），携带VEGF936T者患ACI的危险性是不携带者的2.181倍（?2.18，95%?1.22 ～3.93），可见VEGF+936C/T是ACI的易感基因型，VEGF+936C/T SNP与ACI有关系。有学者也报道中国汉族人群中VEGF+936C/T基因型可能与脑梗死发病有关［8-9］。Hugo等［10］研究表明VEGF+ 936C/T SNP可通过影响VEGF的表达，从而影响血管的修复能力，使携带者对ACI易感，具体机制有待于进一步研究。两组VEGF-460T/C和VEGF+405G/C的基因型和等位基因分布频率差异均无统计学意义（均P＞0.05），提示VEGF-460T/C和 VEGF+405G/C SNP 与ACI可能没有关联，与李天炼等［9］研究结果相符。

表7 两组中VEGF936C/T、-460T/C、405G/ C基因多态性位点与ACI的关系

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.07.017

R743.33

A

1671-0800（2016）07-0876-03

宁波大学 2015校级课题（XYY15003）

315020宁波，宁波大学医学院附属医院

应涛，Email：nbyingtao@foxmail.com

2016-03-15