丹参酮ⅡA对病毒性心肌炎小鼠血清炎性因子水平的影响*

王德坤　魏汉维　彭　戬（湖北省武汉市东湖医院，湖北 武汉 430074）



丹参酮ⅡA对病毒性心肌炎小鼠血清炎性因子水平的影响*

王德坤魏汉维彭戬
（湖北省武汉市东湖医院，湖北 武汉 430074）

目的 观察丹参酮ⅡA对病毒性心肌炎小鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平的影响。方法 80只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组（对照组）20例、病毒性心肌炎模型组（模型组）30例、丹参酮ⅡA治疗组（治疗组）30例。模型组、治疗组腹腔接种柯萨奇病毒B3（CVB3）建立病毒性心肌炎模型，对照组腹腔注射不含病毒的 Eagle's液。治疗组于病毒接种0.5 h后腹腔注射丹参酮ⅡA注射液，连续14 d。观察记录小鼠一般情况、记录死亡数，计算小鼠生存率；取血测定小鼠血清IL-6、TNF-α水平；取心脏，计算心脏指数，HE染色，计算病理评分。结果 与对照组小鼠比较，模型组小鼠血清IL-6和TNF-α水平、心脏指数、心脏病理评分均升高（P＜0.05）；与模型组比较，治疗组小鼠心脏指数、TNF-α、IL-6水平、心脏病理评分均降低（P＜0.05）。结论 丹参酮ⅡA可通过降低TNF-α、IL-6发挥减轻心肌损伤、治疗病毒性心肌炎作用。

病毒性心肌炎丹参酮ⅡA肿瘤坏死因子-α白介素-6

【Abstract】Objective：To study the effect of sodium tanshinoneⅡA sulfonate on tumor necrosis factor-α（TNF-α）and interleukine-6（IL-6）in mice with coxsackie B3 viral myocarditis.Methods：Eighty male BALB/c mice were randomly divided into three groups：the control group（n=20），viral myocarditis model group（n=30）and sodium tanshinoneⅡA sulfonate-treated group（n=30）.The first two groups were intraperitoneally inoculated with CVB3 to induce myocarditis，the control group with virus-free Eagle′s medium instead.Sodium tanshinoneⅡA sulfonate-treated group was given andrographis injection through intraperitoneal injection 0.5 hours after injecting virus every day for 14 days.The control group and myocarditis group used normal saline instead.The general state of the mice was observed；deaths were recorded and the survival rate of mice was calculated；the content of TNF-α and IL-6 was tested.Hearts were taken；the cardiac index was calculated；HE staining was adopted；the pathological integral was calculated.Results：Compared with the control group，cardiac index，TNF-α and IL-6 level and the pathological integral in the model group increased（P＜0.05）；compared with the model group，cardiac index，TNF-α and IL-6 level and the pathological integral in sodium tanshinoneⅡA sulfonate-treated group were decreased（P＜0.05）.Conclusion：Sodium tanshinoneⅡA sulfonate can decrease TNF-α and IL-6 serum level of mice and has obvious effects on prevention and treatment.

【Key words】Viral Myocarditis；Sodium tanshinoneⅡA sulfonate；TNF-α；IL-6

病毒性心肌炎（VMC）是心血管常见的疾病之一，肠道病毒尤其是柯萨奇B3病毒（CVB3）是引起VMC的最常见原因［1］。严重者可导致血流动力学异常，伴发心功能不全、休克等严重并发症［2］，甚至导致死亡，如何有效治疗VMC已经成为当前研究的重要内容。丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）是从天然植物丹参中提取的水溶性物质，有研究表明，STS有消炎抗菌、抗病毒、调节免疫、抗肿瘤及抗氧化的作用［3］。已有研究表明丹参对病毒性心肌炎也有治疗作用［4］，但该药的作用机制目前还不清楚。本实验通过观察STS对病毒性心肌炎小鼠血清炎性因子水平的影响，探讨其治疗病毒性心肌炎的具体机制。

1　材料与方法

1.1动物动物健康雄性BALB/c小鼠购自苏州大学实验动物中心［合格证号SCXK（苏）2008-0005］，4周龄，体质量13～16 g，共80只。

1.2试药与仪器CVB3 Nancy株购自武汉大学典藏中心病毒原液有效价为102TCID 50/0.1 mL。STS（上海第一生化药业有限公司，国药准字Z20026249）。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒，白细胞介素-6（IL-6）试剂盒由上海科敏生物科技公司提供。

1.3造模与给药将小鼠随机分为3组：空白对照组（对照组）20例、病毒性心肌炎模型组（模型组）30例和丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组（治疗组）30例。对照组给予不含病毒的Eagle's液0.1 mL腹腔注射。模型组和治疗组给予同体积的CVB3浓度为102TCID 50/0.1 mL的病毒液腹腔注射。于病毒接种0.5 h后治疗组腹腔注射STS 0.1 mL/只，每日1次，连续14 d。对照组及模型组注射同体积的0.9%氯化钠溶液。

1.4标本采集与检测1）小鼠一般情况：每天观察小鼠生命体征、饮食及活动情况等，记录存活率。2）心脏指数：接种病毒2周处死小鼠开胸取出心脏，用滤纸吸干心脏表面血液后称质量，计算心脏指数（心质量/体质量）。3）血清炎症因子水平测定：小鼠接种病毒2周，摘眼球取血，离心10 min（4℃，3000 r/min），取上清，严格按照ELISA试剂盒说明书检测血清TNF-α及IL-6水平。4）心肌组织病理学观察：小鼠心肌组织依次给予10%甲醛固定、乙醇脱水、石蜡包埋、切片、HE染色，置光学显微镜下观察心肌组织病理变化。病理积分计算，无病变计0分，病变面积＜25%计1分，病变面积25%～50%计2分，病变面积50%～75%计3分，病变面积＞75%计4分。

1.5统计学处理应用SPSS16.0统计软件分析。计量资料以（±s）表示，采用单因素方差分析，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1各组小鼠一般情况对照组小鼠活动、饮食等一般状况良好，皮毛光滑，14 d未死亡，存活率100%。模型组小鼠2 d出现活动减少，饮食下降，皮毛无光泽，蜷缩等症状，4 d开始出现死亡，7～10 d达到死亡高峰，14 d共死亡9只，存活率为70.00%。治疗组小鼠临床症状比模型组小鼠轻，5 d开始出现死亡，14 d共死亡4只，存活率为86.67%。各组存活率差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2各组心脏指数及心肌病理光镜观察结果见表1和图1。与对照组比较，模型组和治疗组小鼠心脏指数均明显上升（P＜0.05）；治疗组心脏指数明显低于模型组（P＜0.05）。光镜下见对照组心肌细胞的结构正常，心肌纤维排列整齐，横纹清晰，间质无充血水肿；模型组心外膜充血水肿，心肌细胞周围有炎症细胞浸润，主要为淋巴细胞以及单核细胞，邻近心肌细胞出现玻璃样或空泡，肌纤维排列紊乱、出现肿胀、断裂；治疗组小鼠心肌组织病理学改变较模型组明显减轻。

表1　各组小鼠心脏指数及炎症病理积分比较（±s）

表1　各组小鼠心脏指数及炎症病理积分比较（±s）

与模型组比较，*P＜0.05；与对照组比较，△P＜0.05。下同。

组别　n　心脏指数　病理评分对照组　20　4.11±0.07　0模型组　30　4.86±0.15△　2.82±0.41△治疗组　30　4.43±.011*△　1.24±.032*△

图1　小鼠心肌组织病理切片（HE染色，400倍）

2.3各组小鼠血清炎性因子水平比较见表2。与对照组比较，模型组和治疗组的血清IL-6及TNF-α水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，治疗组血清IL-6、TNF-α水平降低（P＜0.05）。

表2　各组小鼠血清IL-6、TNF-α水平比较（pg/mL，±s）

表2　各组小鼠血清IL-6、TNF-α水平比较（pg/mL，±s）

组别　n　IL-6　TNF-α对照组　20　10.46±2.48　82.72±12.46模型组　30　29.51±4.23△　176.51±41.57△治疗组　30　20.11±4.12*△　138.62±30.81*△

3　讨　论

VMC最具特征性的病理特征是心肌细胞的坏死以及心肌炎性细胞浸润，现认为其主要的发病机制是病毒的直接损害和机体的炎症免疫损伤［5］。TNF-α是机体炎性反应与免疫系统重要调节因子，已有研究表明CVB3所致心肌的心肌炎症病变程度与TNF-α的水平有密切的相关性，TNF-α表达水平上升可导致心肌细胞的坏死和炎性细胞的浸润，使心肌组织的炎性反应加重，此外，持续高水平的TNF-α可改变肌膜蛋白，导致心肌细胞被破坏从而损伤心肌［6］。IL-6是由单核巨噬细胞、T淋巴细胞（Th2）产生的炎性细胞因子，可介导细胞毒性损伤［5］。有研究［5，7-8］发现VMC患者血清IL-6和TNF-α水平明显升高，提示炎症反应的过度增强，可导致心肌细胞的凋亡，同时IL-6和TNF-α二者具有协同作用，进一步加重心肌细胞的炎性损伤和坏死。

目前临床上对于VMC的治疗主要以抗炎、心肌保护等对症治疗为主，疗效欠佳，有报道指出中药丹参在病毒性心肌炎的治疗有一定优势，可从多途径多靶点发挥抗炎、抗氧化、调节免疫等作用，从而改善心肌缺血［4］，但该药的作用机制目前还不清楚。《吴普本草》有记载丹参味辛、性凉，具有活血化瘀、理气止痛、凉血消痈及活血通经之效，被广泛用于临床心脑血管疾病的治疗［9］。丹参酮ⅡA是丹参的有效成分，有消炎抗菌、抗病毒、调节免疫、抗肿瘤及抗氧化等作用，可减轻巨噬细胞产生的炎症因子NO、TNF-α和IL-6的表达，阻碍NF-κB与DNA相结合，抑制NF-κB下游基因的转录［10-13］。国内研究发现丹参酮ⅡA对细胞具有显著的保护作用，能明显抑制病毒的繁殖，具有直接杀灭病毒的作用，随着其药物浓度的提高，病毒抑制率明显升高［14-15］。

本研究采用丹参的主要成分丹参酮ⅡA对VMC模型小鼠进行干预，结果发现VMC小鼠的TNF-α、IL-6水平较对照组有显著性升高（P＜0.05），给予丹参酮ⅡA干预后其炎性因子TNF-α和IL-6水平较模型组明显降低 （P＜0.05），提示丹参酮ⅡA可降低VMC小鼠的炎症反应。进一步观察小鼠的形态学变化，我们发现与对照组比较，模型组小鼠心脏指数明显上升、心肌出现明显病理学改变（P＜0.05），丹参酮ⅡA干预后小鼠心脏指数明显低于模型组（P＜0.05），小鼠心肌组织病理改变较模型组减轻，其存活率（86.67%）较模型组（70.00%）有明显的提高（P＜0.05）。研究结果表明，丹参酮ⅡA能减轻VMC心肌损伤，提高小鼠生存率，对病毒性心肌炎有治疗作用，其机制可能与丹参酮ⅡA可下调TNF-α、IL-6的表达有关。

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Effect of Sodium TanshinoneⅡA Sulfonate on TNF-α and IL-6 in Mice with Coxsackie B3 Viral Myocarditis

WANG Dekun，WEI Hanwei，PENG Jian.Cardiovascular Internal Medicine Department of Donghu Hospital，Hubei，Wuhan 430074，China.

R285.5

A

1004-745X（2016）05-0766-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.05.005

国家自然科学基金项目（30500657）；湖北省自然科学基金项目（211CDB196）

2016-01-07）