四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠实验研究*

蔺晓源　邓　娜　李　霞　刘富林△（1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地，湖南 长沙 410208；.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）



四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠实验研究*

蔺晓源1，2邓娜3李霞3刘富林3△
（1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

目的 观察四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的影响。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特组和四神丸组各10只；除正常组外，其余各组均采用灌服大黄水煎液和肌内注射氢化可的松复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型，灌胃14 d后观察各组大鼠的一般状态、腹泻指数和脏器指数。结果 模型组大鼠的体质量减轻，腹泻指数增加，胸腺、脾、肾、睾丸各脏器指数均出现不同程度的降低或升高，与正常组比较差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；而四神丸组大鼠的体质量增加、腹泻指数降低，各脏器指数也明显改善，与模型组比较有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）；但四神丸组上述指标与得舒特组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 四神丸能有效缓解脾肾阳虚泄泻模型大鼠症状，具有良好的止泻作用。

四神丸泄泻脾肾阳虚大鼠

【Abstract】Objective：To investigate the effect of Sishenwan on model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang.Methods：40 SD rats were randomly divided into the normal group，the model group，Dicetel group and Sishenwan group with 10 rats in each.Except the normal group，the other groups were treated with intragastric administration of rhubarb decoction and intramuscular injection of hydrocortisone to replicate model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang.The general state，diarrhea index and organ index of rats were observed 14d after intragastric administration.Results：In the model group，the weight dropped；diarrhea index increased；indexes of thymus，spleen，kidney and testis organ reduced or increased to different degree.Compared with the normal group，the differences were statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.In Sishenwan group，the weight gained；diarrhea index decreased；Viscera indexes were also significantly improved.Compared with the model group，there were significant differences（P＜0.05 or P＜0.01）.However，compared with Dicetel group，the above indexes of Sishenwan group had no significant difference（P＞0.05）.Conclusion：Sishenwan can effectively alleviate the symptoms of model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang，and has a good anti diarrhea effect.

【Key words】Sishenwan；Diarrhea；Asdthenic splenonephro-yang；Rats

腹泻型肠易激综合征（IBS-D）是临床常见的功能性胃肠病，其发病率和复发率高，治愈难度大，严重危害了人们的身心健康。四神丸是治疗脾肾阳虚型泄泻的经典方剂，临床用于治疗IBS-D等多种肠道疾病疗效显著［1-2］，其治病机理研究已逐渐成为当前的研究热点，但目前使用病证结合的动物模型研究仍然少见。为了深入开展四神丸的作用机制研究，笔者先期观察了四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的影响。现将结果报告如下。

1　材料与方法

1.1动物SPF级SD大鼠40只，雄性，体质量180～ 220 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK（相）2011-0003。

1.2药物四神丸 （北京同仁堂天然药物有限公司，国药准字Z13020656，规格：27 g/瓶），研碎后过筛，用蒸馏水配制成 0.183 g/mL的混悬液放入4℃冰箱备用。得舒特（匹维溴铵片，法国苏威制药公司，批准文号20120519，规格：50mg/片），研碎后过筛，配制成1.523 mg/mL的药液备用。

1.3试剂与仪器氢化可的松注射液（天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12020887，规格20 mL∶100 mg）；AUW120D精密电子天平（日本岛津）；Pureloab Classic UVF超纯水仪（法国ELGA Labwater）。

1.4造模与分组将40只大鼠适应性喂养3 d后，根据随机数字表法选取10只为正常组，其余大鼠参考文献［3］造模：第1阶段灌服大黄水煎液50 g/（kg·d），14 d，第2阶段肌内注射氢化可的松25 mg/（kg·d），11 d。后将造模大鼠又随机分为模型组、得舒特组和四神丸组，每组10只。

1.5给药方法造模结束后开始灌胃给药。四神丸组大鼠每日按1.83 g/kg剂量灌胃（按60 kg成人每日18 g剂量换算），模型组给予等容量蒸馏水，得舒特组按15.23 mg/kg剂量给予得舒特水溶液（按60 kg成人每日150 mg剂量换算），正常组常规喂养。给药14 d。

1.6标本采集与检测1）一般状态：自造模后每日观察各组大鼠的精神、活动、毛发、饮食量、二便等一般情况，并记录各组大鼠给药前后的体质量。2）腹泻指数：给药前后观察各组大鼠的腹泻情况并计算腹泻指数。腹泻指数=稀便率×平均稀便级。稀便率指每只大鼠所排稀便数与总便数之比；稀便级是以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小分4级，标准如下：污迹直径＜1 cm 为1级，1～2 cm为2级，2～3 cm为3级，＞3 cm为4级，平均稀便级=稀便级数总和/稀便次数。3）脏器指数：给药结束后处死大鼠，迅速摘取脾、胸腺、肾、睾丸称质量，计算脏器指数。脏器指数=脏器质量/体质量× 100%。

1.7统计学处理应用SPSS18.0统计软件分析。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1各组大鼠一般状态变化见表1。正常组大鼠活动自如、毛发光泽、饮食、肛温和大便均正常，体质量也保持一定的增长。模型组大鼠从造模第2周起出现反应迟钝、活动也明显减少、毛发逐渐枯萎，大便稀软；第3周起饮食减少、爪甲色淡、尾巴变凉、肛温下降、大便清稀、肛周污秽；模型组大鼠上述部分症状虽然在灌胃开始后有轻微好转，但大便清稀一直存在；另外模型组1只大鼠因极度消瘦死亡。四神丸组和得舒特组大鼠经灌胃给药1周后，上述症状均有不同程度的缓解，主要表现在活动和饮食增多，粪便次数减少且成形；四神丸组1只大鼠因灌胃不当死亡。给药结束后，模型组体质量增长值明显低于正常组，差异有统计学意义（P＜0.01）；四神丸组和得舒特组的体质量增长值均高于模型组（P＜0.01）。

表1　各组大鼠体质量比较（g，±s）

表1　各组大鼠体质量比较（g，±s）

与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组别n　增长值正常组　10　70.37±9.86模型组　9　26.31±4.62**得舒特组　10　78.04±12.05△△给药前　给药后326.29±27.06　398.28±34.04 231.34±21.77　256.07±23.15 227.05±24.96　307.43±25.36四神丸组　9　229.52±19.43　335.30±28.39 103.18±15.29△△

2.2各组大鼠腹泻指数比较见表2。给药前四神丸组、得舒特组与模型组的腹泻指数比较差异不显著（P＞0.05）。给药后四神丸组和得舒特组的腹泻指数均明显低于模型组（P＜0.05）。

表2　各组大鼠腹泻指数比较（±s）

表2　各组大鼠腹泻指数比较（±s）

组别　n正常组　10模型组　9得舒特组　10给药前　给药后0 0 1.33±0.16　1.30±0.15 1.32±0.13　1.05±0.11△四神丸组　9　1.34±0.15　0.97±0.12△

2.3各组大鼠脏器指数比较见表3。模型组大鼠的胸腺脏器指数降低，脾、肾、睾丸的脏器指数升高，与正常组比较差异均有统计学意义 （P＜0.05或P＜0.01）。四神丸组的胸腺脏器指数较模型组升高（P＜0.05），其脾、肾、睾丸的脏器指数较模型组降低（P＜0.05或P＜0.01），与得舒特组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3　各组大鼠脏器指数比较（%，±s）

表3　各组大鼠脏器指数比较（%，±s）

组别　n正常组　10模型组　9得舒特组　10胸腺　脾0.156±0.025　0.217±0.031 0.123±0.019**0.235±0.033*0.146±0.021△　0.223±0.028四神丸组　9　0.145±0.020△　0.220±0.032△睾丸0.316±0.042　0.533±0.076 0.428±0.050**0.652±0.091**0.357±0.046△△0.628±0.105△0.349±0.049△△0.617±0.083△△肾

3　讨　论

IBS-D属于中医“泄泻”范畴。目前西医对症治疗IBS-D缺乏特效药物及方法，且有明显副作用；而中医药通过辨证论治疗效可靠，且副作用小，在本病的防治中发挥了显著优势［4］。泄泻病位在肠，脾失健运是其关键，同时与肾脏密切相关。如《灵枢·邪气脏腑病形》曰“肾脉小甚为洞泄”。在此认识的基础上，后世明确提出了脾肾阳虚的五更泄泻，基于“脾肾相关”理论，治当益火补土。赵献可在《医贯》中也指出“命门之火旺，火能生土，而脾亦强”。《内科摘要》所载四神丸由《普济本事方》的二神丸与五味子散组合而成，为治疗肾泄的名方。方中重用补骨脂为君，温肾助阳，壮火益土，暖脾止泻；臣以肉豆蔻温中涩肠；佐以吴茱萸助阳止泻，五味子收敛固涩。本方配伍精，药味少，药力专，应用广，自问世以来，经历代临床实践证实其疗效卓越。文献报道，四神丸临床用于治疗IBS-D效果显著［1-2］。

目前四神丸治疗泄泻的药理机制研究主要集中在脾虚泄泻和脾肾阳虚泄泻两大方面。研究发现，四神丸给药组大鼠血浆胃动素、胃泌素含量均较模型组升高，并能抑制正常和脾虚小鼠的炭末推进率［5］。此外，四神丸还可升高脾虚泄泻大鼠十二指肠黏膜分泌型IgA分泌量和IL-2含量，共同恢复细胞免疫和体液免疫功能而起作用［6］。笔者前期研究采用灌服大黄水煎液和肌内注射氢化可的松已成功复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型，目前的氢化可的松模型是较为经典的肾阳虚证动物模型，研究表明，使用25 mg/kg剂量的氢化可的松腹腔注射可成功复制肾阳虚小鼠模型［7］；而使用大黄水煎液灌服也可成功制备脾阳虚小鼠腹泻模型［8］。因此，本研究动物模型的复制是基于“病证结合”研究中医经典方剂的关键，这不仅直接影响到药物疗效的研判，也是对中医理论或治法研究的有益阐释。研究发现，四神丸汤剂对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的作用可能与调节细胞因子TNF-α、IL-2、IL-4和外周血T细胞亚群水平有关［9-10］。

本研究中模型大鼠肾、睾丸脏器指数的降低说明其性腺轴水平降低，而现代研究认为，下丘脑-垂体-靶腺轴（肾上腺轴、性腺轴）的功能障碍和低下是肾阳虚的病理基础，这说明模型大鼠符合肾阳虚证的表现。模型大鼠出现的爪甲色淡、行动迟缓、尾巴变凉、大便稀溏、体质量减轻则是脾阳虚的表现。现代研究表明，脾肾均与免疫功能有关，脾肾阳虚可导致机体免疫功能低下，模型大鼠血清细胞因子和外周血T细胞亚群的变化［2-3］，以及胸腺和脾脏器指数的降低，说明其脾肾功能下降。而且模型大鼠出现毛发枯萎、肛温下降等症状和体征，均符合脾肾阳虚的辨证要点。经灌胃给药后，四神丸组大鼠的体质量增加（P＜0.01），胸腺、脾、肾、睾丸各脏器指数均明显改善（P＜0.05或P＜0.01），再结合大鼠一般状态的显著改变，表明四神丸能有效缓解脾肾阳虚泄泻模型大鼠症状。同时，四神丸组的腹泻指数较模型组降低（P＜0.05），与得舒特组比较无统计学差异 （P＞0.05），表明四神丸有良好的止泻作用。此外，研究表明，IBS诸多发病因素皆与脑-肠互动理论密切相关［11-12］，脑肠轴在IBS-D的发病中被证实占据重要地位，上述发病因素均可整合到脑-肠互动框架中进行阐述，使得脑肠肽在IBS-D发病环节中起关键作用［13-15］。但四神丸治疗IBS-D与脑肠轴调节机制的具体关系，仍有待下一步的研究。

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Experimental Study of Sishenwan on Model Rats with Diarrhea of Asdthenic Splenonephro-yang

LIN Xiaoyuan，DENG Na，LI Xia，et al.The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Hunan，Changsha 410007，China.

R285.5

A

1004-745X（2016）05-0756-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.05.002

国家自然科学基金项目（81403380）；湖南省教育厅科研优秀青年项目（15B178）
△

（电子邮箱：lfl1038@163.com）

2016-01-14）