肥胖相关基因rs9939609多态性与妇科肿瘤的相关性研究

舒龙　张泽　袁超燕　李素萍　武玉莲



·基础与临床·

肥胖相关基因rs9939609多态性与妇科肿瘤的相关性研究

舒龙张泽袁超燕李素萍武玉莲

经研究者发现,肿瘤与细胞增殖周期的失调相关,尤其是G1期启动的失调与肿瘤的发生密切相关。肥胖相关基因(fat mass and obesity associated,FTO)是全基因组关联研究中发现的与体质量指数(BMI)显著关联的基因,正常人群中,携带单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP)rs9939609风险等位基因可使BMI增加,肥胖发生风险增加[1]。李建新等[2]发现,女性更年期肥胖的发病率增高,且其肿瘤的发病率亦增加。到目前为止,许多流行病学研究发现,肥胖会提高一些肿瘤疾病的发病率[3],如乳腺癌、食管癌、肝癌等。有报道显示,在美国新确诊的肿瘤病例中有3.2%要归咎于肥胖[4]。

2012年2月至2015年1月,我们利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,分析了妇科肿瘤患者FTO基因rs9939609多态性位点的基因型,探讨其与妇科肿瘤发病风险的关系。

1　资料与方法

1.1临床资料无血缘关系的妇科肿瘤患者80例(肿瘤组),年龄45～76岁,平均(51.2±3.8)岁，其中宫颈癌35例,子宫内膜癌17例,卵巢癌9例,其他肿瘤19例。另选健康妇女90例作对照(对照组),年龄44～75岁,平均(50.8±4.1)岁，其年龄与肿瘤组具有可比性。

1.2纳入和排除标准(1)纳入标准:根据《实用妇产科学》诊断标准[5],确诊为妇科肿瘤。(2)排除标准:不符合肿瘤诊断标准的患者;确诊为妇科良性囊肿的患者;转移性肿瘤的患者以及患有其他疾病的妊娠妇女。

1.3rs9939609基因型检测所有受试者抽取外周血3～5 ml,分置于EDTA抗凝管中,保存于4 ℃冰箱,1周内采用Qiagen公司的小量血液基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA,-70 ℃冰箱保存待用[6]。

PCR扩增引物序列:上游5′-TGGTGGTACGCTGCTATG-3,下游5′-ACGCTGCTGCCCTAGAAAT-3′,25 μl的PCR扩增反应体系:10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3),50 mmol/L氯化钾,1.5 mmol/L氯化镁,200 pmol/L dNTPs,0.4 μmol/L引物,30～50 ng基因组DNA,1单位Taq DNA聚合酶。PCR扩增反应条件为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,55～59 ℃退热30 s,72 ℃延伸1 min,共37个循环,最后72 ℃后延伸10 min。取20 μl的PCR产物经PE Biosystem公司生产的含AmpliTaqDNA聚合酶荧光标记测序试剂盒纯化,内引物扩增,采用Applied Biosystem公司生产的ABI PRISM 377-96 DNA测序仪检测,采用Chro-mas软件读取基因型。

1.4统计学方法采用SPSS 16.0统计软件,频率计数法计算肿瘤组和对照组基因型和等位基因频率,并用Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检验。各组间基因型和等位基因频率分布分析采用

χ2检验;计量资料比较采用成组t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1一般情况肿瘤组和对照组年龄、血压和BMI比较差异均无统计学意义(均P>0.05),见表1。

2.2rs9939609基因型分布利用PCR-RFLP方法确定该SNP位点的基因型,经检验各组均符合Hardy-Weinberg 遗传平衡定律。SNP位点的3种基因型(AA、AT、TT)在肿瘤组和对照组间差异有统计学意义(P=0.031),T和A等位基因在肿瘤组和对照组中的频率分布不同,肿瘤组A等位基因的频率低于对照组,T等位基因的频率高于对照组,T为易感等位基因(OR=1.433,95%CI:1.029～1.996,P=0.033),见表2。

3　讨论

随着人口老年化进程的加快,妇科肿瘤患者的数量呈明显上升趋势,其发病率已经远远超过同期其他肿瘤的发病情况[7]。妇科肿瘤所带来的危害有目共睹。肥胖是糖尿病和心脑血管疾病的高危因素。有研究显示,通过减肥可以降低癌症的发病率和死亡率,这也充分说明肥胖和癌症之间存在一定的因果关系[8]。肿瘤细胞中的能量代谢方式有它的特殊性,主要以“有氧糖酵

表1　2组的一般临床资料比较±s)

表2　对照组和肿瘤组rs9939609基因型分布(n,%)

解”为主,肥胖相关基因能否影响肿瘤细胞的代谢及生存情况至今仍无法定论。而且关于肥胖与妇科肿瘤之间关系的研究较少,为进一步降低妇科肿瘤的发病率及死亡率,提高患者患病后的生存质量,本文特设计了此临床研究。

妇科肿瘤的发生与激素分泌失衡和基因遗传相关。本研究通过比较对照组和肿瘤组妇女的FTO基因rs9939609位点的基因分型,结果发现,2组等位基因分布及基因型差异均有统计学意义;在肿瘤组中TT基因型患者的发病情况明显高于AA基因型。因此推测在妇科肿瘤的发病中,该基因参与疾病的发病,调控的机制可能为:rs9939609基因位点的变异可能会引起氨基酸序列的改变,推测该位点是通过直接影响基因的表达量或与其他SNP位点连锁间接影响基因的表达量,从而对激素分泌产生影响,此推测需要进一步实验验证。

综上所述,TT+AT基因型的围绝经期妇女更易发生妇科肿瘤疾病。这个结果提高了对围绝经期妇女妇科肿瘤疾病发病机制的认识,有助于尽早做好围绝经期妇女妇科肿瘤疾病的预防。rs9939609基因多态性分析可作为预测妇科肿瘤易感性的分子指标。

由于本研究样本数量较少,缺乏大规模多中心随机对照研究,结论有待进一步完善。

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[5]刘新民.妇产科手术学 [M].3 版.北京: 人民卫生出版社,2010:31-34.

[6]王芳,宓为峰,卢天兰,等.肥胖相关基因rs9939609多态性与利培酮4周治疗所致体质量增加的关联分析[J].中国心理卫生杂志,2013,27(2):157-160.

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443000 湖北省宜昌市，三峡大学仁和医院神经内科(舒龙)；445000 湖北省恩施市，湖北民族学院民大医院妇产科(张泽，袁超燕，李素萍，武玉莲)

武玉莲，Email:33874979@qq.com

R 737.3

Bdoi:10.3969/j.issn.1003-9198.2016.04.026

2015-05-12)