血清miR-208a在急性心肌梗死早期及急诊PCI前后表达的研究

刘新秀，葛智儒，赵汉君

·论著·

血清miR-208a在急性心肌梗死早期及急诊PCI前后表达的研究

刘新秀1，葛智儒2，赵汉君1

目的 探讨血清微小核糖核酸miR-208a在急性心肌梗死（AMI）早期及急诊经皮冠状动脉介入（PCI）治疗前后表达的变化。方法 选择急性心肌梗死患者30例作为AMI组，选择同期健康体检者20例（均无心脏疾病）作为对照组。AMI患者分别在入院即刻和入院后12 h（PCI术后6 h内）采集血液，健康对照组于清晨空腹采血，观察AMI患者发病早期血清miR-208a的表达水平，将miR-208a与肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶表达水平进行相关性分析，并比较AMI患者冠脉介入治疗前后血清miR-208a的表达变化。结果 AMI患者血清miR-208a水平显著高于对照组（P＜0.05），急性心梗患者血清miR-208a水平与肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶含量呈正相关（r1=0.356，P=0.045；r2=0.456，P=0.011），AMI患者冠脉介入治疗后血清miR-208a水平较入院即刻显著降低（P＜0.05）。结论 血清miR-208a在AMI患者早期表达显著升高，PCI后miR-208a表达显著降低。

miR-208a；心肌梗死；肌钙蛋白I；肌酸激酶同工酶

急性心肌梗死（AMI）具有较高的发病率和病死率。及时、正确诊断AMI有助于再灌注治疗、挽救患者生命及改善预后。随着科技的发展，越来越多的生化标志物用于反映心肌损伤，如肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CKMB）等。目前临床上通用的生化标志物是cTnI。但人们仍试图找到其他有意义的标志物，确保AMI的早期诊断。microRNA（miRNA）是一类由21～25个核苷酸组成的在进化上高度保守的内源性非编码小分子RNA，主要通过与靶mRNA 的 3'-非编码区（3'-UTR）特异性结合，降解靶mRNA或者抑制其表达，从而调控基因的表达［1］。研究发现，microRNA与心血管系统疾病密切相关，目前人们已在心肌梗死、心力衰竭、冠状动脉粥样硬化等患者中检测到了其外周血相应microRNA的改变［2］。其中，微小核糖核酸RNA-208a（microRNA-208a，miR-208a）具有明显的组织特异性，在心肌组织中特异性表达［3］。本研究通过检测AMI患者早期血清miR-208a的表达水平， 将miR-208a与cTnI、CK-MB表达水平进行相关性分析，并比较AMI患者经皮冠状动脉介入（PCI）治疗前后血清miR-208a的表达变化，初步探讨miR-208a在AMI早期诊断中的价值。

1　资料与方法

1.1研究对象与分组 选择2015年4～9月于上海市第二军医大学附属公利医院心血管内科收治的急性心肌梗死患者30例作为AMI组，选择同期健康体检者20例（均无心脏疾病）作为对照组。AMI的入选标准：典型的胸痛持续时间超过30 min；血清肌钙蛋白升高超过正常两倍以上；ST段抬高至少0.1 mm；胸痛出现3 h内来我院就诊。所有患者均排除严重肝肾功能不全、恶性肿瘤、急慢性感染、自身免疫性疾病、血液系统疾病、脑血管疾病。本研究经上海第二军医大学附属公利医院医学伦理委员会批准，取得了所有受试者知情同意并签署知情同意书。

1.2主要试剂 血清总RNA的提取采用TIANGEN公司的TIANampVirus RNA试剂盒，RNA反转录采用TOYOBO公司的ReverTra Ace qPCR RT Master Mix试剂盒，血清miRNA-208a的检测采用TOYOBO公司的SYBR Green Realtime PCR Master Mix检测试剂盒。

1.3血液标本的采集 AMI组于入院即刻和入院后12 h（PCI术后的6 h内）用肝素抗凝管采集血液，健康对照组于清晨空腹采血。所有标本均室温下静置15min，然后1000rpm/m- in离心5min，取上清液（血清）置于微量离心管，存储于-80℃冰箱备用。

1.4血清miR-208a的检测 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）的方法进行miR-208a的检测。采用TIANGEN公司的TIANampVirus RNA试剂盒提取血清总RNA，然后用TOYOBO公司的ReverTra Ace qPCR RT Master Mix试剂盒进行反转录，最后以TOYOBO公司的SYBR Green Realtime PCR Master Mix检测试剂盒检测血清miRNA-208a。每个样本均进行三次检测，应用2（-△△CT）法计算血清miRNA-208的相对表达水平。

1.5cTnI和CK-MB的检测 血清CK-MB和cTnI采用OLYMPUS AU5421全自动生化分析仪检测。实验严格按CK-MB和cTnI检测试剂盒（电化学发光法）说明进行操作。

1.6统计学处理 采用 SPSS17.0 软件分析实验数据，计数资料之间的比较采用卡方检验；计量资料以均值±标准差（±s）的形式表示，采用t检验；采用Pearson相关分析miR-208a与cTnI、CKMB的相关性。P＜0.05认为差异有统计学意义。

2　结果

2.1研究对象的一般临床资料 研究表明，AMI组与对照组三酰甘油表达水平差异有统计学意义（P＜0.05），在性别、年龄、吸烟史、糖尿病、高血压发病率等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

2.2AMI患者血清 miR-208a表达水平 AMI组miR-208a表达水平（0.00696±0.00109）显著高于对照组（0.00014±0.00003），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3血清miR-208a表达水平与cTnI、CK-MB的相关性分析 person相关性分析，血清miR-208a表达水平与cTnI、CK-MB水平呈正相关（r1=0.356， P=0.045；r2=0.456，P=0.011） 。

2.4AMI患者PCI 治疗前后血清miR-208a 水平变化 AMI患者经 PCI治疗后miR-208a表达水平（0.00107±0.00177）较入院时（0.00696± 0.00109）相比呈显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1　两组人群临床特点比较

3　讨论

AMI是临床常见的危重心血管疾病，是在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动脉血供急剧减少或中断，使相应的心肌严重而持久地急性缺血导致心肌坏死。AMI具有较高的发病率和病死率，及早诊治是关键。1954年Ladue等发现了第一个可用于诊断AMI的生化标志物：天冬氨酸转氨酶（AST）；1955年Wroblwski等发现AMI患者血液中乳酸脱氢酶（LDH） 的浓度也有变化［4］。

研究发现，microRNA参与和调控发育、增殖、细胞分化和细胞凋亡等多种生理功能［5］。内源性microRNA可在血液中稳定存在，甚至在血清样本经反复冷冻后仍很稳定［6］。microRNA首先应用于某些肿瘤生物学标志物的研究，近年来一些动物实验结果证明，microRNA 在转录或转录后修饰水平调节着心肌生长发育、纤维化和重构等［7］。miR-208a具有心肌细胞特异性，是反应心肌损伤的一种潜在标志物，研究逐渐发现miR-208a 对AMI的诊断有一定的价值。但有关这方面的研究结论尚不完全一致，故有待于进一步的研究。多个动物及临床研究结果表明，血中miR-208a水平在心肌坏死后1 h即可出现升高［8］，3 h达到高峰。Kaplan-Meier生存分析［9］显示miR-208a高表达组的年生存率明显低于低表达组。这说明miR-208a与AMI患者的临床特征和生存密切相关，可作为AMI早期诊断和判断预后的重要标志。一些研究则持相反的意见，miR-208a在心肌中低表达［10］，只有少数 AMI患者miR-208a表达升高，而健康对照者几乎检测不出［11］。

本研究发现入院时AMI患者血清 miRNA-208a水平相对于对照组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。这与以往的研究是一致的［8］。本研究还发现，AMI患者PCI治疗后血清miR-208a水平较入院即刻显著降低，且两者比较具有明显统计学差异（P＜0.05）。可能是由于PCI手术后冠脉血供重建，血管内皮细胞功能恢复，心肌缺血得到改善，从而抑制miR-208a的表达受抑制，尚需进一步研究证实。本研究显示，AMI患者血清miR-208a水平与cTnI、CK-MB含量呈正相关（r1=0.356，P=0.045；r2=0.456，P=0.011）。由于蛋白标志物的成分复杂、不易分离，导致其检测繁琐且多出现误差，而miRNA主要用PCR仪分析，比蛋白标志物的检测更方便且临床实用价值更高。如果能将miR-208a和传统的心肌损伤标志物（cTNI、CK-MB等）联合起来检测，对AMI的临床诊断和治疗等具有十分重要的意义。

通过以上研究结果，初步判断miR-208a在AMI的诊断方面具有较高的参考价值，PCI可降低AMI患者miR-208a表达。但是本研究样本规模较小，研究具有局限性，还需大样本的规范化研究。我们的研究结果仅提示血清miR-208a可能是急性心肌梗死患者新的血清学标志，若要明确血清miR-208a能否用于AMI的诊断，尚需检测不同时段AMI患者血清miR-208a的表达水平，同时需确定miR-208a表达水平具有临床诊断价值的临界值。在今后的研究仍需要进一步探讨。

［1］ Ambros V. The functions of animal microRNAs［J］. Nature，2004，431 （7006）：350-5.

［2］ 陈炳伟. 微小RNA与心血管病血生化标志物［J］. 中华高血压杂志，2014， 22（4）：328-33.

［3］ van Rooij E，Sutherland LB，Qi X，et al. Control of stress-dependent cardiac growth and gene expression by a microRNA［J］. Science，2007，316（5824）：575-9.

［4］ 沈健. 急性心肌梗死生化标志物的研究进展［J］. 心血管病学进展，2012，33（1）：106-10.

［5］ Esteller M. Non-coding RNAs in human disease［J］. Nature reviews Genetics，2011，12（12）：861-74.

［6］ Gilad S，Meiri E，Yogev Y，et al. Serum microRNAs are promising novel biomarkers［J］. PLoS One，2008，3（9）：e3148.

［7］ 裴颖皓，宫剑滨. miRNA在急性心肌梗死诊断中的研究进展［J］. 医学综述，2014，20，（4）：616-8.

［8］ Wang GK，Zhu JQ，Zhang JT，et al. Circulating microRNA：a novel potential biomarker for early diagnosis of acute myocardial in farction in humans［J］. Eur Heart J，2010，31（6）：659-66.

［9］ Bi SJ，Wang CY，Jin YW，et al. Correlation between serum exosome derived miR-208a and acute coronary syndrome［J］. Int J Clin Exp Med，2015，8（3）：4275-80.

［10］ Adachi T，Nakanishi M，Otsuka Y，et al. Plasma microRNA 499 as a biomarker of acute myocardial infarction［J］. Clin Chem，2010，56（7）：1183-5.

［11］ Kuwabara Y，Ono K，Horie T，et al. Increased microRNA-1 and microRNA-133a levels in serum of patients with cardiovascular disease indicate myocardial damage［J］. Circ Cardiovasc Genet，2011，4（4）：446-54.

责任编辑：芦洁，田国祥

Study of serum miR-208a expression in early stage of acute myocardial infarction and before and after PCI therapy

LIU Xin-xiu*， GE Zhi-ru， ZHAO Han-jun. *Clinical Medicine College of Ningxia Medical University， Yinchuan， 750004， China.

GE Zhi-ru， E-mail： drzrg@sohu.com

Objective To investigate the change of serum miR-208a in early stage of acute myocardial infarction （AMI）， before and after emergency percutaneous coronary intervention （PCI）. Methods 30 AMI patients were selected as AMI group，20 healthy control from physical examination were selected as control group. Blood sample of AMI group were collected as the time of admission and 12hours after admission （in 6 hours after PCI），fasting blood sample of control group were collected in the morning. Expression of miR-208a were measured in the early stage of AMI， correlation analysis were conducted between miR-208a and expression level of cardiac troponin I and creatine kinase isoenzyme， and compared the change of miR-208a expression before and after PCI in AMI patients. Results Serum miR-208a level in AMI group was significantly higher than control group （P＜0.05）. Serum miR-208a level was positively associated with troponin I and creatine kinase isoenzyme （r1=0.356，P=0.045；r2=0.456，P=0.011）. Serum miR-208a level was significantly reduced after PCI treatment （P＜0.05）. Conclusion Serum miR-208a level was significantly increased in early stage of AMI， but reduced after PCI treatment.

miR-208a； Myocardial infarction； Troponin I； Creatine kinase isoenzyme

R541.4

A

1674-4055（2016）06-0718-03

1750004 银川，宁夏医科大学临床医学院；2200135 上海，上海第二军医大学附属公利医院心内科

葛智儒，E-mail：drzrg@sohu.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2016.06.22