薄层扫描法测定补阳还五胶囊黄芪甲苷的含量*

刘世军，赵海峰，唐志书，崔春利，刘红波，梁艳妮陕西中医药大学陕西中药资源产业化协同创新中心，陕西 咸阳 712083



薄层扫描法测定补阳还五胶囊黄芪甲苷的含量*

刘世军，赵海峰，唐志书，崔春利，刘红波，梁艳妮
陕西中医药大学陕西中药资源产业化协同创新中心，陕西 咸阳 712083

目的：建立薄层扫描法测定补阳还五胶囊黄芪甲苷含量的方法。方法：硅胶G薄层板，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）10℃以下放置过夜的下层溶液展开，λS=530 nm，λR=700 nm。结果：线性范围为0.980～6.860 μg，平均回收率为99.49%，精密度RSD为0.846%。结论：该方法简便，灵敏度高，重复性好，回收率高，可用于补阳还五胶囊中黄芪甲苷的含量测定。

补阳还五胶囊；黄芪甲苷；质量标准；薄层扫描法

补阳还五汤出自王清任《医林改错》，本方有补气、活血、祛瘀通络之功效，生用黄芪大剂量则力专而行走，周行全身，大补元气而起痿废；配当归尾、赤芍、川芎、红花、桃仁、地龙6味，活血、祛瘀之药不在于逐瘀，而在于活血通络，所以，用大剂量黄芪为主药的目的是补气以行血通络，此方治半身不遂，口眼歪斜，语言蹇涩，口角流涎，大便干燥，小便频数，遗尿不禁［1］。王智华等［2］、张星等［3］分别对补阳还五冲剂、补阳还五汤质量标准进行了研究，本研究通过对补阳还五汤临床应用的调研，自制补阳还五胶囊，采用薄层扫描法对补阳还五胶囊君药黄芪中所含的活性成分黄芪甲苷进行含量测定，规定其下限作为制剂的质量控制指标，以保证临床用药的合理性、安全性及有效性，为有效控制补阳还五胶囊提供更加可靠的依据。

1 仪器与试药

CS-9301型薄层扫描仪(日本岛津)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所分发，批号：781-200210)；D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm)；水为纯化水，其余试剂均为分析纯；M erck公司生产的预制板(10×20cm)，展开剂：氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液，饱和15分钟展开。显色剂：10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘5分钟。双波长反射法锯齿扫描：λS=530nm，λR=700nm。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 m L含0.5 m g的溶液，作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备 取本品适量，研细，精密称取细粉0.5g，加具塞三角烧瓶中，加入25 m L甲醇，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10m L，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，20 m L/次，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，20 m L/次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水3～5 m L使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长12 cm)，以水50 m L洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 m L洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继用70%乙醇50 m L洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2 m L量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 m L含0.5 m g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)［4］精密吸取供试品溶液2 μL、6 μL，对照品溶液2 μL、4 μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB薄层扫描法)进行扫描，波长：λS=530 nm，λR=700 nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。

2.3 空白溶液制备 按处方比例分别称取除黄芪以外的其余药味，按照制备工艺制成缺黄芪的阴性样品，按“2.2”项供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液。

2.4 专属性实验 分别取供试品溶液及阴性供试品溶液，氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液，饱和15分钟展开，10%硫酸乙醇溶液显色，105℃烘5分钟，双波长反射法锯齿扫描：λs=530 nm，λR=700 nm。按上述条件分析，阴性样品在指标成分黄芪甲苷的色谱峰位置上无吸收，表明该方法的专属性良好。

2.5 标准曲线及线性范围 分别精密吸取对照品溶液(C=0.49 m g/m L)2、4、6、8、10、12、14 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积A为纵坐标，黄芪甲苷含量C(μg)为横坐标计算回归方程为：A=1111.84C+300.27，相关系数r=0.9999，线性范围0.980～6.860μg，结果见表1、图1。

表1 标准曲线实验结果

图1 黄芪甲苷标准曲线

2.6 精密度实验

2.6.1 同板精密度 精密吸取样品(批号：061001)溶液5μL，连续进样5次，记录峰面积，并计算出RSD为1.25%，表明同板精密度良好。

2.6.2 异板精密度 精密吸取样品(批号：061001)溶液5μL，异板点样5次，记录峰面积，并计算出RSD为1.60%，表明异板精密度良好。

2.7 重复性实验 称取本品 (批号：061001)5份，依供试品制备方法制取样品，依法测定含量，并计算出RSD为2.14%，表明本方法重复性良好。

2.8 稳定性实验 取样品(批号：061001)0.5g，按供试品制备方法制备样品，分别在0、0.5、1、1.5、2小时记录峰面积并计算出RSD为1.04%。表明供试品在2小时内稳定。

2.9 回收率实验 采取加样回收法，取一定量已知含量的样品(批号：061001)，加适量对照品依法制备供试品溶液，测定含量以下式计算回收率，结果表明本方法回收率良好，见表2。

表2 回收率实验结果

2.10 样品测定 取本品3批，按供试品制备方法 制备样品，依上述色谱条件测定，见表3。

表3 样品测定结果

经过质量标准含量测定及3批样品的测定结果，3批样品以黄芪甲苷(C41H 68O 14)含量在1.493～1.532 m g/g范围内，考虑到药材来源以及制剂生产，贮藏等其他因素影响，暂定本品每粒含黄芪以黄芪甲苷(C41H 68O 14)计，不得少于1.1m g。

3 讨论

采用薄层扫描法测定自制补阳还五胶囊中黄芪甲苷，开展方法学研究，结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，可有效控制补阳还五胶囊的质量，也为含有黄芪的中成药增加黄芪甲苷的测定提供了新思路。

［1］ 邓中甲.方剂学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：240.

［2］ 王智华，陆履雯，王海英，等.补阳还五汤冲剂的质量标准研究［J］.中成药，1996，18（7）：12-14.

［3］ 张星，陆兔林，毛春芹，等.补阳还五汤质量标准研究［J］.中成药，2013，35（3）：529-533.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

Determination of AstragalosideⅣin BuYang HuanWu Capsules by TLC

LIU Shijun，ZHAO Haifeng，TANG Zhishu，CUI Chunli，LIU Hongbo，LIANG Yanni
Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resource Industrialization of Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712083，China

Objective：To establish the determination method of astragalosideⅣin BuYang HuanWu capsules by thin layer scanning（TLC）.Methods：Silica gel G TLC-scanner，loroform-methanol-water（13：6：2），placed below 10℃and stayed overnight，the lower solution was taken out and spread，λS=530 nm，λR=700 nm.Results：Linearity range was between 0.980 and 6.860 μg，average recovery rate was 99.49%，precision RSD was 0.846%.Conclusion：The method，simple，sensible，reproducible and with high recovery rate，could be used to content determination of astragalosideⅣin BuYang HuanWu capsules.

BuYang HuanWu capsules；astragalosideⅣ；quality standard；thin layer scanning

刘世军（1974—），男，博士学位，高级工程师。研究方向：天然产物研究及中药制剂与质量标准研究。

R917

A

1004-6852（2016）01-0030-03

2014-11-20

陕西省重点创新团队计划（编号2012K CT-20）。