亚麻子大孔树脂纯化物急性毒性实验研究*

钱梦茹，刘效栓，刘军刚，李喜香，李季文，毕映燕，张亚会甘肃中医药大学药学院，甘肃 兰州 730000；甘肃省中医院药学部



亚麻子大孔树脂纯化物急性毒性实验研究*

钱梦茹1，刘效栓2△，刘军刚2，李喜香2，李季文2，毕映燕2，张亚会1
1甘肃中医药大学药学院，甘肃 兰州 730000；2甘肃省中医院药学部

目的：考察亚麻子大孔树脂纯化物（M REF）的急性毒性，为拟定临床用量提供参考。方法：将昆明种小鼠随机分为对照组（N S溶液）和M REF溶液低剂量组（0.000 253 g/m L）、中剂量组（0.002 53 g/m L）、高剂量组（0.025 3 g/m L），每组10只进行实验，根据实验结果测定LD50或进一步实验测定最大给药量。结果：干预7天内对照组，M REF溶液高、中、低剂量组小鼠皮肤、毛发、眼和黏膜、呼吸、中枢神经系统、四肢活动及体质量均无明显变化，无动物死亡；LD50未测出，受试动物灌胃M REF溶液（0.025 3 g/m L）的24小时内最大给药量为33.7 g/kg，相当于成人每天服用M REF0.12 g/kg（按60 kg体质量计算）的505.5倍，未见毒性反应。结论：低、中、高剂量的M REF溶液与生理盐水对照组比较未出现任何急性毒性反应，由其最大给药量可知该药口服安全，属无毒级。

亚麻子；大孔树脂纯化物；急性毒性实验

亚麻子(Semen lini)是亚麻科亚麻属植物亚麻(Linum usitatissimum L.)的种子。研究发现亚麻子具有多种生物活性，如抗癌、防治心血管疾病、减缓更年期症状、预防骨质疏松症等，对预防膳食模式依赖性的疾病和改善患者预后有重要意义。但其也含有毒性成分如抗营养因子植酸、生氰糖苷、抗吡多醇因子(抗维生素B)和致甲状腺肿素等物质［1］，目前未见有关亚麻子大孔树脂纯化物(M REF)毒性的报道。故本研究考察大剂量M REF溶液对小鼠所产生的急性毒性反应及24小时内灌胃的最大给药量，以确定其临床应用安全性，为拟定临床用量提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，中国农业科学院兰州兽医研究所提供，动物质量合格证号：SCXK(甘)-2010-0001。

1.2 M REF制备 称取亚麻子适量，在60～70℃水浴条件下，以料液比为37倍，氯化钠用量为2 g，浸提120分钟脱胶，用60℃水洗至无咸味，自然干燥，粉碎成粗粉，称取适量粗粉加8倍量70%乙醇在60～70℃提取2次，2 h/次，滤过，收集滤液，减压浓缩至原料重量的2倍，加40%氢氧化钠至浓缩液中使氢氧化钠浓度为4%，60℃水解35分钟，放置室温用浓盐酸调至pH=4，放置40分钟，过滤，收集滤液，浓缩，将浓缩液配制成相当于1.5 BV的药液，以1.2 m L/m i n流速上样，上样结束后，静置4小时，用5BV的蒸馏水以1.5 m L/m i n流出速度洗脱，弃洗脱液，以3 BV 10%乙醇洗脱，弃洗脱液，再用3 BV 20%乙醇、4 BV 30%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25(60℃)的浸膏，微波干燥(温度＜60℃，5分钟)，粉碎，即得。

1.3 M REF溶液制备 将制备所得M REF(纯度61%，甘肃省中医院药学部提供)配制成溶液(含M REF0.0253g/m L)，用时分别稀释成原浓度的0.1倍、0.01倍。取原溶液、0.1倍溶液、0.01倍溶液供小鼠灌胃给药。

1.4 方法 将小鼠随机分为4组，即对照组(N S)及 M REF溶液低剂量组(0.000253g/m L)、中剂量组(0.00253g/m L)、高剂量组(0.025 3 g/m L)，每组10只。小鼠适应性喂养3天，实验前将全部实验动物编号并称重。

1.4.1 LD50测定 根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》［2］，对M REF溶液灌胃给药小鼠的LD50进行测定。预实验：将以上分组后小鼠禁食16小时，各组均按0.02 m L/g体质量灌胃M REF溶液，灌胃后4小时严密观察，此后每日观察1次并记录各组小鼠体质量、皮肤毛发、眼和黏膜、呼吸、中枢神经系统、四肢变化及死亡情况。

1.4.2 最大给药量实验［3-4］取雌小鼠30只，禁食不禁水，16小时后称重，随机分为对照组和给药组各15只。给药组以0.02 m L/g体质量灌胃M REF溶液2次，间隔6小时，对照组按0.02 m L/g体质量给予生理盐水。给药后4小时内密切观察其反应，此后继续观察7天。

2 结果

2.1 LD50测定 LD50测定实验中，M REF溶液高、中、低各剂量组小鼠灌胃给予M REF溶液后，高剂量组小鼠出现呼吸频快、一过性兴奋、继而短暂静卧的反应，大约1小时后恢复正常；第2天各剂量组动物无死亡、无异常反应，毛色光泽，大、小便颜色正常。连续观察7天，分别于给药后第1天、第3天及第7天同一时间称量各组小鼠的体质量。各剂量组小鼠体质量与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；给药后7天各组小鼠无死亡、无异常反应；处死小鼠，观察心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、大脑、小脑、胃、胰腺、大肠、小肠、睾丸、卵巢等主要脏器体积、颜色、质地均无明显改变，故无法测得LD50，见表1。

表1 M REF小鼠LD50实验不同时间动物体质量变化情况

2.2 最大给药量实验 因LD50实验中未见小鼠死亡，无法测得最大致死剂量，无法进行药物LD50测定，故进行最大给药量实验。最大给药量实验中24小时累积给药量为33.7g/kg。给药后4小时内高剂量组小鼠出现短暂兴奋，而后活动明显减少，卧伏，4小时后动物活动状态恢复正常，体质量观察发现动物增长良好，呼吸、活动正常，饮食、饮水、排便均正常，口、眼、鼻，无异常分泌物。7天内动物无死亡、无异常反应，毛色光泽，大、小便颜色正常。于给药后第1天、第3天及第7天同一时间称量每只小鼠体质量。结果显示高剂量组小鼠体质量与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。第7天处死小鼠，观察心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、大脑、小脑、胃、胰腺、大肠、小肠、睾丸、卵巢等主要脏器体积、颜色、质地均无明显改变。M REF溶液的成人(按60kg体质量计算)日用剂量为0.12 g/kg。故本实验给予小鼠日累积剂量为临床成人拟推荐日用剂量的505.5倍。表明M REF溶液临床应用具有安全性，见表2。

表2 M REF小鼠M TD实验不同时间动物体质量变化情况

3 讨论

实验结果表明，M REF溶液高、中、低剂量组均未对小鼠引起急性毒性反应，且给药后小鼠体质量增长正常，最大给药量为33.7 g/kg，相当于成人每日服用M REF 0.12 g/kg(按60 kg体质量计算)的505.5倍，说明其临床应用安全可靠。

［1］ 张文斌.亚麻木酚素的提取纯化与生物活性研究［D］.无锡：江南大学，2007.

［2］ 国家食品药品监督管理总局药品评审中心.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则［EB/O L］.2005［2014-04］.ht t p：//w w w.cde.org.cn/zdyz.dom et hod=l arge Page&i d=2086.

［3］ 徐淑云，卞如濂，陈修.药理学实验方法［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2002：227-228.

［4］ 戚志华，张松，党学良，等.归辛胶囊急性毒性实验研究［J］.现代生物医学进展，2013，13（28）：5418-5421.

Acute Toxicity Test of Macroporous Resin Extract from Flaxseed

QIAN Mengru1，LIU Xiaoshuan2△，LIU Jungang2，LI Xixiang2，LI Jiwen2，BI Yingyan2，ZHANG Yahui1
1 Pharmacy College of Gansu University of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China；2 Pharmacy Department of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective：To provide the reference of working out clinical dosage by investigating acute toxicity test of macroporous resin extract from flaxseed（MREF）.Methods：The mice were randomly allocated to the control group（NS solution），low （0.000 253 g/mL），moderate（0.002 53 g/mL）and high（0.025 3 g/mL）doses groups of MREF solutions，ten mice each group，maximum dosage was detected by further test or LD50 detected according to the results of the test.Results：There was no obvious change in skin，hair，eye and mucous membrane，respiratory system，central nervous system，limb activities and body weight of the mice in the control group，high，moderate and lowdosesgroupsofMREFsolutionswithinsevendaysafterintervention，andnoanimaldeath；LD50wasn'tdetected，maximum dosage of MREF solutions（0.025 3 g/mL）for the tested animals were 33.7g/kg within 24 hours，equivalent to 505.5 times of the adults taking MREF in the concentrations of 0.12 g/kg（calculated by adult body weight 60kg）each day，no toxicity has been seen.Conclusion：No acute toxicity test has been seen when low，moderate and high doses groups of MREF solutions were compared with the control group of physiological saline，the drug is safe for oral administration and of non-toxic grade according to the maximum dose of MREF solution.

flaxseed；macroporous resin extract；acute toxicity test

R284

A

1004-6852（2016）01-0017-02

2015-03-25

2011年甘肃省第四批科技支撑计划（编号1104FK CA 121）。

钱梦茹（1990—），女，硕士研究生。研究方向：中药炮制与制剂工艺。