黄芫花特征图谱研究

郝晶晶，甄会贤，史正文，郭云，张府君

（山西药科职业学院，山西太原030031）

黄芫花特征图谱研究

郝晶晶，甄会贤，史正文，郭云，张府君

（山西药科职业学院，山西太原030031）

●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

目的：建立黄芫花药材及制剂的HPLC特征图谱对照测定法，为黄芫花质量控制提供参考。方法：采用Agilent高效液相色谱仪、岛津2010高效液相色谱仪，甲醇-水为流动相梯度洗脱，测定黄芫花药材的HPLC特征图谱，分别从化学成分对不同产地黄芫花的HPLC特征图谱进行定性与定量相似性评价。结果：建立黄芫花药材及制剂的HPLC特征图谱测定条件分离良好、专属性强、可用于黄芫花质量的比较与控制。结论：以特征对照品为参照进行黄芫花药材及制剂特征图谱相似性评价，重复性和耐用性良好。因此，黄芫花药材的质量和安全性亟待提高。

黄芫花；特征图谱；木犀草素

1 仪器与试药

Agilent高效液相色谱仪，岛津2010高效液相色谱仪，紫外检测器。对照品木犀草素（供含量检测用；批号为：MUST-11051001），购于北京恒元启天化工技术研究院。黄芫花样品来自采集和采购共计10批。甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸及其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，密塞，称定重量，超声处理1 h（250W，33 KHz），放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 对照品溶液的制备

黄芫花经HPLC分析出现多个色谱峰，木犀草素可以通过对照品确认，且相对稳定，因此选用木犀草素峰作为参照物峰中的S峰。

取木犀草素对照品，精密称取10.22 mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每毫升含木犀草素0.05mg的对照品溶液［2］。

2.3 检测方法

依照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VID），结合指纹图谱要求测定。

2.3.1 流动相的确定在进行流动相考察时用水代替0.1%磷酸溶液，无论分离度还是色谱峰的峰形均比较差，故选择0.1%磷酸溶液为流动相的成分之一。

实验过程中共选择了以下流动相系统，结果见表1。

表1 流动相系统的选择

通过该流动相系统对供试品溶液进行出峰的筛查，可大致判断出峰时的流动相比例，通过该系统可知在流动相比例为（30∶70）时才有色谱峰的出现，而在比例变为甲醇100%时也再未出现其他色谱峰［4］，故采用表2进行梯度洗脱。

表2 梯度洗脱程序

结果表明，以表2进行梯度洗脱为最佳，谱图上各个色谱峰的分离度较好，保留时间适中，因此选此流动相作为黄莞花的HPLC指纹图谱检测的流动相。

2.3.2 检测波长的选择文献中木犀草素的测定波长有260 nm、328 nm、340 nm、349 nm、355 nm等，对木犀草素的甲醇溶液进行紫外光谱扫描，在254 nm和350 nm有最大吸收，且350 nm处吸收强度大于254 nm处，故选择350 nm为检测波长。

2.3.3 色谱柱的选择实验过程中选择了迪马色谱柱进行考察：DM C18（5μm，4.6mm×250mm），从结果看，多个色谱峰且分离效果较好。综合考虑，选定DM C18（5u m，4.6mm×250mm）为色谱柱。

通过选择，选定如下色谱条件为黄莞花特征图谱的测定色谱条件。

色谱柱：DM C18（5u m，4.6 mm×250 mm）色谱分析柱；甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70）为流动相，依表2进行梯度洗脱，检测波长：350 nm，流速：1 mL/min；检测方法：分别精密吸取参照物溶液10 μL、供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪。按中药色谱特征图谱操作要求，供试品色谱中以木樨草苷为参比标准峰，另外两个色谱峰的保留时间与参比峰保留时间进行比值，算出其相对保留时间，作为判断依据。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验取同一供试品（批号：H-JX）溶液，同一进样量，连续进样6次，按实验条件依法测定，计算其相对保留时间，结果见表3。

表3 精密度试验结果（min）

结果显示，黄莞花的制备样品通过HPLC分析结果稳定，精密度RSD分别为0.61%，0.46%。结果表明，精密度良好。

2.4.2 稳定性试验取同一供试品（批号：H-JX）溶液，在24 h内不同时间进样5次，按实验条件依法测定，并按计算相对保留时间，供试品相对保留时间与参比对照保留时间比值，结果见表4。

表4 稳定性试验结果（min）

以上结果显示，黄莞花的制备样品在24 h内通过HPLC分析结果稳定，稳定性的RSD分别为0.76%，0.57%。结果表明，样品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.3 重现性试验取同一批号的供试品（批号：H-JX）6份，按上述方法进行制备并进行检测，并进行计算，图谱及相似度结果见图1及表5。

图1 S木犀草苷参比峰

表5 黄芫花指纹图谱重复性的相似度（min）

以上结果显示，6份供试品中相对保留时间的RSD均为0.24。结果表明其重现性良好。

3 结论

通过对12批不同产地药材的考察，选用保留时间为19 min和21 min附近的色谱峰作为共有峰，而已知的木犀草素保留时间为37 min作为参照峰，用相对保留时间计算，得出黄芫花的特征图谱的相对保留时间的区间，结果见表6。

表6 不同药品指标峰保留时间考察（min）

通过相对保留时间的评价得出，分别在0.511 min、0.570min相对保留时间为特征图谱，并设定（0.511±5）%、（0.570±5）%作为一个相对保留时间的判定区间。即相对保留时间比例在0.485～0.537min，0.542～0.598min范围内即可。标准特征图谱见图1。

［1］秦永祺.黄芫花有效成分的研究［J］.植物学报，1982（6）：558-561.

［2］国家药典委员会.中国药典［M］.北京：化学工业出版社，1977：514-516.

［3］山西省卫生厅.山西省中药材标准［M］.太原：山西省卫生厅，1987：47-49.

［4］王成瑞.抗生育有效成分河朔荛花素的分离与鉴定［J］.中草药，1981（12）：2-4.

［5］谢宗万，余友芩.全国中草药名鉴（上）［M］.北京：人民卫生出版社，1996：302-303.

［6］《中国植物志》编辑委员会.中国植物志52（1）［M］.北京：中国科学技术出版社，2004：322-324.

［7］《山西植物志》编辑委员会.山西植物志4［M］.北京：中国科学技术出版社，2004：264-266.

［8］南京中医药大学.中药大词典（下）［M］.上海：上海科学技术出版社，2006：2 843-2 845.

［9］康少文，于永芳，李丽华，等.黄芫花中期引产有效成分的研究［J］.承德医学院学报，1984（1）：5-6.

［10］董倩.芫花及其炮制品的质量评价［D］.沈阳：辽宁中医药大学，2010.

［11］鱼爱和.黄芫花乙醇液的毒性及质量标准研究［J］.中成药，1999（3）：119-121.

［12］冉先德.中华药海（上册）［M］.哈尔滨：哈尔滨出版社，1993：567-569.

［13］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（5）［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：420-422.

（编辑：张世霞）

Study on specific chromatogram of flower of Lowdaphne stringbush

Hao Jingjing，Zhen Huixian，Shi Zhengwen，Guo Yun，Zhang Fujun
（Shanxi Pharmaceutical Vocational College，Taiyuan Shanxi030031）

Objective：To establish HPLC specific chromatogram control determination method to provide the reference on quality control of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Methods：Qualitative and quantitative similarity were evaluated by both qualitative and quantitative aspects of chemical composition of HPLC specific chromatogram of different origin of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Result：The establishment of HPLC specific chromatogram of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf and preparation conditions for determination of separation，good specificity can be used to compare and control quality of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Conclusion：The features were used as reference for Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf medicinal materials and preparations of feature similarity evaluation，good repeatability and durability.Therefore，the quality and safety of Lowdaphne Stringbush Flower and Leafneeds to be improved.

Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf；specific chromatogram；luteolin

R285

A

1671-0258（2016）06-0016-03

郝晶晶，E-mail：94581403@qq.com