秩边透水道技术对催产素致痛经大鼠下丘脑5-羟色胺调控机制的实验研究

郝裕峰，温进中，金晓飞

（山西中医学院，山西太原030024）

秩边透水道技术对催产素致痛经大鼠下丘脑5-羟色胺调控机制的实验研究

郝裕峰，温进中，金晓飞

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：观察传统针刺与针刺秩边透水道对催产素致痛经大鼠下丘脑5-羟色胺（5-HT）含量的影响。方法：20只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、关元组、秩边透水道组，制备催产素痛经大鼠模型，观察各组大鼠的扭体次数，通过放射免疫分析检测大鼠下丘脑5-HT含量。结果：秩边透水道组大鼠扭体发生率明显低于模型组，下丘脑5-HT含量显著高于模型组（P＜0.05），与对照组、关元组比较差异无统计学意义。结论：秩边透水道技术能提高大鼠中枢5-HT的合成率与利用率，加强抑制性神经递质的释放，起到中枢镇痛作用，从而有效缓解痛经。

原发性痛经；秩边透水道技术；5-HT

秩边透水道技术作为传统中医学针灸的一种疗法，在临床治疗原发性痛经方面疗效显著、经济、简便，但其作用机制尚不明确。为深入探讨秩边透水道技术的治疗机制，本实验以传统针刺作为对照疗法，各设对照组与模型组，通过观察大鼠的扭体发生率及测量下丘脑5-HT的含量，探讨其治疗痛经的调控机制，从而提供临床秩边透水道技术治疗原发性痛经的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

健康雌性SD大鼠20只，体质量（230±15）g，由北京动物研究院动物室提供。苯甲酸雌二醇注射液（批号110202511），缩宫素注射液（批号H3402474），一次性针灸针，低速离心机，免疫分析试剂盒（由北京海科瑞生物生物技术中心提供），其余实验器材均由山西医科大学实验室提供。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模采用随机数字表法将动物随机分为4组：对照组、模型组、关元组、秩边透水道组，每组5只。采用缩宫素致大鼠子宫剧烈收缩模拟痛经。模型组、关元组、秩边透水道组大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇连续10 d，第1天、第10天0.5mg/只，第2天～第9天0.2mg/只，末次给药1 h后，腹腔注射缩宫素2 U/只。对照组大鼠每日股部皮下注射同等剂量的生理盐水。

1.2.2 干预方法从造模开始第1天即给予干预治疗，对照组、模型组仅抓取固定5min，连续3 d；关元组于每天造模后针刺关元穴，深度为8～10mm，行平补平泻手法，留针5min，每日1次，连续3 d；秩边透水道组于每天造模后即进行秩边透水道干预，俯卧位固定大鼠，用针灸针迅速刺入秩边穴，针尖朝同侧水道穴方向，深度为8～10 mm，行平补平泻手法，留针5min，每日1次，连续3 d。

1.2.3 指标检测大鼠一般情况的观察、在实验过程中观察各实验组大鼠的毛发色泽、动作行为、精神状态、体质量等，并做好相关记录。

大鼠扭体次数：第10天腹腔注射缩宫素，诱发扭体反应为子宫收缩（痛经）的指标，观察并记录30min内每只大鼠的扭体次数。

大鼠下丘脑及血浆5-HT测定：各组大鼠的扭体记录完成后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉后快速断头，在无菌工作台冰盘上取大鼠下丘脑组织，立即用预冷生理盐水冲洗1～2次，用滤纸拭干后用分析天平称重，处理后匀浆、离心取上清夜，-70℃保存备用。由于匀浆（提取）过程中会产生一定的系统误差，需对其进行较正，可根据测其上清液中蛋白浓度进行较正。之后按照ELISA试剂盒的说明书进行试剂的准备、加样、保温、洗涤、显色和比色等正确操作，最后进行结果的判定。

2 结果

2.1 一般状态

对照组大鼠一般状况良好，毛色顺滑，动作灵敏，精神良好，体质量增长，未见明显异常。模型组大鼠毛色暗淡萎黄，精神变差，动作迟缓，体质量下降。关元组与秩边透水道组大鼠毛色略暗淡萎黄，精神尚可，体质量稍下降。

2.2 各组大鼠扭体反应比较

对照组大鼠未出现扭体反应，模型组、关元组及秩边透水道组大鼠全部发生扭体反应。模型组大鼠扭体反应较明显，大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋。与对照组比较，其余各组大鼠扭体次数增加，差异有统计学意义（P＜0.01），说明痛经模型造模成功。与模型组比较，关元组及秩边透水道组大鼠30min内扭体反应次数明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表1。

表1 各组大鼠扭体次数比较

2.3 各组大鼠下丘脑5-HT含量比较

结果见表2。

表2 各组大鼠5-HT含量比较（ng/g，±s）

表2 各组大鼠5-HT含量比较（ng/g，±s）

注：与对照组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05

组别n下丘脑5-HT对照组5 63.53±8.33模型组5 50.62±5.561）关元组5 61.86±6.312）秩边透水道组5 63.35±4.082）

与对照组比较，模型组大鼠下丘脑5-HT含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），说明造模后大鼠中枢5-HT含量降低；关元组、秩边透水道组与模型组相比，大鼠下丘脑组织5-HT含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；且关元组、秩边透水道组与对照组比较，大鼠下丘脑组织5-HT含量差异无统计学意义。说明针刺关元治疗或是秩边透水道治疗能够提高下丘脑组织中5-HT含量，对痛经均有一定的缓解镇痛效果。

3 讨论

据研究发现针灸镇痛主要通过调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质神经体液系统来实现，而神经体液调节系统是通过复杂的化学递质活动来完成的。下丘脑5-HT是人体内重要的神经递质和调节生理功能的物质，与多方面的生理功能有关，是实现针刺镇痛效应的重要环节。实验证明，电针可促使大鼠全脑5-HT的合成率增加43%，利用率增加26%，以致全脑、脑干或下丘脑的5-HT含量增高。使用5，6-双羟色胺选择性损毁5-HT能神经纤维，随着有关脑内的5-HT含量下降，针刺镇痛效应也明显减弱。与此相反，给动物注射5-HT的前体5-HT酸或应用优降宁等单胶氧化酶抑制剂阻断5-HT的降解，均可使脑内5-HT含量增高，同时针刺镇痛效应也显著增强［1-2］。

疼痛与其他感觉一样，是由一定的刺激作用于外周感受器，伤害性感受器经换能后转变成神经冲动（伤害性信息），循相应的感觉传入通路（伤害性传入通路）进入中枢神经系统，经脊髓、丘脑中继后到大脑皮质，通过三级中枢整合后产生疼痛感觉和疼痛反应，其形成机制包括外周神经机制和中枢神经机制两个方面。5-HT是脑干下行抑制系统参与镇痛作用的主要神经活性物质，许多研究表明中枢5-HT受体的激活可以产生痛觉抑制作用，引起抑制性神经递质的释放，起到镇痛的作用。实验研究表明动物体内分布于中枢神经系统与痛及镇痛有关的脑区的吗啡样物质与疼痛关系密切，穴位针刺可促使吗啡样物质的释放，并作用于阿片受体而产生镇痛效果。吗啡样物质在针刺镇痛过程中起重要的作用，而脑内吗啡样物质的释放和利用与5-HT之间关系密切［3-4］。

本实验表明，秩边透水道技术能够明显降低催产素所致痛经大鼠的扭体次数，能提高大鼠中枢5-HT的合成率与利用率，并加强抑制性神经递质的释放，起到中枢镇痛作用，从而有效缓解痛经。本实验初步探讨了秩边透水道技术对痛经大鼠的中枢镇痛机制，今后还需要从其他方面对其镇痛机制做进一步的研究。

［1］徐崇权.电针对原发性痛经模型大鼠镇痛效应及免疫机制的研究［D］.广州：广州中医药大学，2009.

［2］冀海明.外周5-羟色胺2A受体：治疗慢性炎性痛及神经病理性痛的重要靶点［D］.福州：福建师范大学，2008.

［3］陈雪娇.外周神经组织5-羟色胺2A受体在炎性疼痛中的作用［D］.福州：福建师范大学，2007.

［4］蔡巧燕.外周组织5-羟色胺2A受体在角叉莱胶诱发的炎性痛维持过程中的作用机制［D］.福州：福建师范大学，2008.

（编辑：张世霞）

Study on Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）on 5-HT content in dysmenorrhea rats induced by oxytocin

Hao Yufeng，Wen Jinzhong，Jin Xiaofei
（ShanxiCollege of TCM，Taiyuan Shanxi030024）

Objective：To observe the change of 5-HT content in the hypothalamus of dysmenorrhea rats induced by oxytocin to exploremechanism of the treatmentmethod of Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）.Methods：20 female SD rats were randomly divided into control group，model group，Guanyuan group，Zhibian through Shuidao group.Beside the control group，the other groups′s ratswere given oxytocin tomake the dysmenorrheamodel.Guanyuan group and Zhibian through Shuidao group were given corresponding treatment.The writhing occurrence rates and the 5-HT content in the hypothalamus were observed.Results：The incidence rate of writhing in rats with Zhibian group was significantly lower than that inmodel group.The content of 5-HT in hypothalamus of Zhibian through Shuidao group was significantly higher than that inmodel group（P＜0.05）.Conclusion：The Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）can improve the synthesis rate and utilization rate of 5-HT in central nervous system，strengthen the release of inhibitory neurotransmitter and play a central analgesic effect so as to effectively relieve dysmenorrhea.

dysmenorrhea；Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）；5-HT

R285

A

1671-0258（2016）06-0011-03

国家科技支撑计划（2013BAI05B08）

郝裕峰，在读硕士，E-mail：694397180@qq.com

金晓飞，硕士研究生导师，E-mail：47355033@qq.com