血清神经特异性烯醇化酶与C反应蛋白对手足口病并发脑炎患儿的早期诊断价值*

熊　燚，王　健，魏　笛，冯　亚

(1.贵州省遵义市第二人民医院急诊科 563000；2.贵州省遵义市红花岗区疾病预防控制中心免疫规划科 563000)



血清神经特异性烯醇化酶与C反应蛋白对手足口病并发脑炎患儿的早期诊断价值*

熊燚1，王健1，魏笛1，冯亚2

(1.贵州省遵义市第二人民医院急诊科 563000；2.贵州省遵义市红花岗区疾病预防控制中心免疫规划科 563000)

目的分析手足口病(HFMD)患儿血清神经特异性烯醇化酶(NSE)与C反应蛋白(CRP)水平的变化，探讨其在HFMD并发脑炎中的早期诊断价值。方法以120例HFMD患儿及50例健康儿童(健康对照组)为研究对象，并按临床表现将HFMD患儿分为普通HFMD组(70例)与HFMD并发脑炎组(50例)，采用定量PCR法检测咽拭子肠道病毒71型(EV71)，采用酶联免疫吸附试验检测NSE及CRP水平，同时检测白细胞(WBC)计数，并分析NSE与CRP的诊断价值。结果HFMD并发脑炎组患儿血清NSE、CRP水平高于HFMD普通组及健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；EV71阳性患儿NSE及CRP水平均高于EV71阴性患儿，差异均有统计学意义(P<0.05)，但WBC计数差异无统计学意义(P>0.05)。血清NSE与CRP水平呈正相关(r=0.43，P<0.01)。NSE、CRP的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)及其95%置信区间(CI)分别为0.893(0.833～0.952)、0.867(0.799～0.934)，最佳工作点(OOP)分别为11.6 ng/mL、14.15 mg/L，此时NSE、CRP诊断HFMD并发脑炎的灵敏度分别为80.0%、86.0%，特异度分别为81.4%、78.6%；二者串联检测的诊断灵敏度与特异度分别为88.0%和85.7%，AUC及其95%CI为0.927(0.845～0.969)。结论HFMD并发脑炎患儿早期NSE及CRP水平明显升高，EV71阳性者更为显著，联合检测血清NSE及CRP水平可作为诊断HFMD并发脑炎的早期敏感指标。

手足口病；C反应蛋白；肠道病毒71型；神经元特异性烯醇化酶

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是一种常见的传染病，主要好发于5岁以下儿童，常由多种肠道病毒感染所致，其表现为手、足及口腔部位的皮疹，严重者可累及中枢神经系统，即并发脑炎，严重威胁患儿的生命[1]。研究证实，肠道病毒71型(enterovirus 71，EV71)是HFMD感染的主要病原体之一，该型肠道病毒常可累及中枢神经系统，导致病情发展迅速，病死率高[2]。因此，早期诊断危重病例，特别是HFMD并发脑炎患儿，对于其治疗具有重要的临床意义。目前，临床上，常采用血白细胞(white blood cell，WBC)计数、血糖及心肌酶谱来诊断HFMD，但不能特异地反映早期HFMD并发脑炎患儿的感染情况。本研究对120例HFMD患儿血清C反应蛋白(C reactive protein，CRP)及神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)水平进行了分析，以期找到一个早期诊断重症病例即HFMD并发脑炎的生化指标。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2013年6月至2014年12月在贵州省遵义市第二人民医院儿科住院治疗的HFMD患儿120例作为研究对象，其中男65例，女55例，平均年龄(1.65±0.85)岁。所有病例诊断均依据2010年原卫生部制订的《手足口病诊疗指南》中的诊断标准[3]。排除近3个月内有呼吸道感染者；有神经系统疾病史者；有脑外伤史者等。其中普通HFMD组患儿70例，男37例，女33例，平均年龄(1.73±0.68)岁；HFMD并发脑炎组患儿50例，男28例，女22例，平均年龄(1.61±0.72)岁，均在入院前已出现不同程度的中枢神经系统受累表现，包括精神差、嗜睡、不规则发热、恶心、呕吐、脑膜刺激征及抽搐昏迷等临床表现，脑脊液、脑电图及头颅CT异常。所有患儿均于入院后，行咽拭子定量PCR检测EV71。同时，健康对照组50例，男30例，女20例，平均年龄(1.85±0.91)岁，均选自该院体检中心体检的健康儿童。

1.2方法

1.2.1血清CRP及WBC水平的测定所有HFMD患儿入院后均给予抗感染及对症治疗。在入院时，抽取空腹静脉血2 mL，采用全自动生化分析仪测定WBC计数，采用酶联免疫吸附试验测定血清CRP水平。

1.2.2血清NSE的测定入院时清晨抽取所有患儿空腹静脉血2 mL，3 000 r/min离心15 min后，分离血清，采用酶联免疫吸附试验检测患儿血清NSE水平。整个操作过程严格按瑞士罗氏公司提供的试剂盒操作方法进行。

2　结　　果

2.13组血清CRP、WBC及NSE水平比较3组CRP及NSE水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)；而3组WBC计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照组比较，入院后普通HFMD组及HFMD并发脑炎组患儿血清CRP、WBC及NSE水平均升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；同时HFMD并发脑炎组患儿血清CRP及NSE水平均高于普通HFMD组(P<0.01)，但两组WBC计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2EV71阳性与阴性患儿血清CRP、WBC及NSE水平比较定量PCR检测患儿EV71，其中EV71阳性72例，阴性48例，HFMD并发脑炎组阳性检出率为90.0%(45/50)，普通HFMD组阳性检出率为38.0%(27/70)。EV71阳性患儿血清CRP及NSE水平均高于EV71阴性患儿，差异均有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；而EV71阳性与阴性患儿WBC计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1　　3组CRP、WBC及NSE水平比较

*：P<0.05，与健康对照组比较；#：P<0.05，与普通HFMD组比较。

表2　　EV71阳性与阴性患儿血清CRP、WBC及NSE水平比较

2.3血清CRP与NSE水平的相关性分析对HFMD并发脑炎患儿血清CRP与NSE水平进行相关性分析，结果显示二者呈正相关(r=0.43，P<0.01)，即血清CRP水平越高，脑炎程度越重，NSE水平也相应升高。见图1。

图1　　血清CRP与NSE水平的相关性分析

检测项目确诊患儿例数(n)未确诊患儿例数(n)灵敏度(%)特异度(%)阳性预测值(%)阴性预测值(%)CRP(>14.15mg/L)431586.078.674.188.7CRP(≤14.15mg/L)755NSE(>11.6ng/mL)401380.081.475.585.1NSE(≤11.6ng/mL)1057CRP(>14.15mg/L)联合NSE(>11.6ng/mL)441088.085.781.590.9CRP(≤14.15mg/L)联合NSE(≤11.6ng/mL)660

2.4血清CRP、NSE及二者联合检测的诊断价值以CRP 14.15 mg/L为截断点，诊断HFMD并发脑炎的灵敏度和特异度分别为86.0%和78.6%，AUC及其95%CI为0.867(0.799～0.934)。以NSE 11.6 ng/mL为截断点，诊断HFMD并发脑炎的灵敏度和特异度分别为80.0%和81.4%，AUC及其95%CI为0.893(0.833～0.952)。二者串联诊断HFMD并发脑炎的灵敏度和特异度分别为88.0%和85.7%，AUC及其95%CI为0.927(0.845～0.969)。见表4、图2。

图2　　血清CRP、NSE及二者联合诊断的ROC曲线

3　讨　　论

HFMD是儿童常见传染病，主要表现出发热，手、足及口腔出现皮疹等特点。目前，我国HFMD的发病率呈逐年上升趋势，特别是重症患儿如HFMD并发脑炎者明显增多，因其早期特异性诊断的缺乏及临床表现的复杂多变，常导致病情进展迅速，病死率显著增高[4]。因此，针对HFMD并发脑炎患儿的早期诊断对其临床治疗及预后具有重要的意义。

HFMD的发病主要与肠道病毒感染有关，其中，有研究表明，HFMD并发脑炎与EV71感染密切相关[2]。EV71具有嗜神经毒性，可逆行进入中枢神经系统，感染下丘脑、脑干及海马等部位，引起神经细胞的变性或坏死，导致一系列神经功能紊乱的症状[5]。NSE是神经细胞特异性分泌的可溶性蛋白，稳定存在于神经细胞内，当神经细胞受到外界各种刺激因素损伤时，NSE可从细胞内释放入血或脑脊液，引起血液或脑脊液中NSE水平明显升高。因此，检测血清或脑脊液NSE水平可作为神经元损伤的生化标志物之一。已有相关研究表明，在病毒性脑炎、脑出血及脑梗死等疾病中，神经细胞变性坏死导致患者血清及脑脊液NSE水平明显升高，并且NSE水平与神经元的损伤程度及疾病的预后呈正相关[6-8]。本研究显示，HFMD患儿血清NSE水平较健康对照组有一定的升高，通过进一步比较HFMD普通组与HFMD并发脑炎组发现，HFMD并发脑炎组患儿血清NSE水平明显升高，说明HFMD并发脑炎患儿中枢神经系统受到损伤，并且造成损伤的原因与EV71感染密切相关。

有研究显示，HFMD患儿早期血清CRP水平呈明显升高趋势，表明其机体处于全身炎性反应的状态[9]。检测HFMD患儿血清CRP水平可作为早期诊断及判断病情的有效指标之一[10]。为了进一步判断HFMD并发脑炎患儿全身炎性反应情况，排除可能出现的假阳性结果即单纯性的NSE水平增加，通过检测其血清CRP水平显示，HFMD患儿血清CRP水平较健康对照组明显升高，但HFMD并发脑炎患儿血清CRP水平较普通HFMD组更高，并且血清CRP与NSE水平呈正相关，而WBC无明显差异。上述结果提示，血清CRP水平对HFMD并发脑炎患儿的早期诊断比WBC更具有特异性。通过进一步做NSE及CRP指标的ROC曲线分析，其AUC均较大(>0.85)，可作为HFMD并发脑炎患儿早期诊断的有效指标，其中，NSE>11.6 ng/mL和CRP>14.15 mg/L时对HFMD并发脑炎患儿的诊断准确率较高。通过将NSE与CRP进行串联检测，诊断的灵敏度和特异度分别为88.0%和85.7%，AUC为0.927，其诊断的真实性及价值更高。有研究表明，脑炎时血清NSE水平与脑脊液NSE水平呈正相关[11]。在临床工作中由于不便提取患者的脑脊液，常采用静脉血作为检测标本，血清NSE水平升高，提示存在颅内感染。因此，通过联合检测血清CRP及NSE水平，可更加特异地对HFMD并发脑炎患儿进行早期诊断。

综上所述，HFMD并发脑炎患儿，大部分伴有EV71感染，且病情发展迅速，病死率高。通过本研究显示，早期联合检测血清CRP及NSE水平，对HFMD并发脑炎患儿的早期诊断具有较高的灵敏度和特异度。因此，根据早期血清CRP及NSE水平，有助于提高临床HFMD并发脑炎的早期诊断率，从而促进其早期干预，减少HFMD并发脑炎患儿的病死率。

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Early diagnosis value of serum neuron-specific enolase and CRP in hand-foot-mouth disease complicating encephalitis*

XiongYi1，WangJian1，WeiDi1，FengYa2

(1.DepartmentofEmergency,ZunyiMunicipalSecondPeople′sHospital,Zunyi,Guizhou563000,China；2.DepartmentofImmunization,HonghuagangDistrictCenterforDiseaseControlandPrevention,Zunyi,Guizhou563000,China)

ObjectiveTo analyze the change of serum levels of neuron-specific enolase (NSE) and C reactive protein(CRP) and their early diagnostic value in hand-foot-mouth disease (HFMD) complicating encephalitis.MethodsOne hundred and twenty cases of HFMD and 50 healthy children(healthy control group) served as the research subjects and the HFMD cases were divided into the common HFMD group (n=70) and HFMD complicating encephalitis group (n=50) according to the clinical manifestations.The enterovirus 71 (EV71) in throat swab was detected by quantitative PCR.The NSE and CRP levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and white blood cell (WBC) count was measured by hematology analyzer.The NSE and CRP levels were compared and their diagnostic values were analyzed.ResultsThe serum NSE and CRP levels in the HFMD complicating encephalitis group were higher than those in the HFMD common group and control group,the differences were statistically significant (P<0.05),and which in the EV71 positive group were significantly higher than those in the EV71 negative group,the differences were statistically significant (P<0.05),but WBC count had no statistically significant difference (P>0.05).The serum NSE level was positively correlated with the CRP level (r=0.43，P<0.01).The area under ROC curves (AUC) and 95%CIof NSE and CRP were 0.893(95%CI: 0.833-0.952) and 0.867(95%CI:0.799-0.934),the optimal operating points(OOP) were 11.6 ng/mL and 14.15 mg/L respectively,the sensitivity and specificity of NSE and CRP for diagnosing HFMD complicating encephalitis were 80.0%,86.00% and 81.4%,78.6% respectively,while which of their combined detection were 88.0% and 85.7%,AUC and 95%CIwas 0.927(95%CI:0.845-0.969).ConclusionThe NSE and CRP levels in children patients with early HFMD complicating encephalitis are significantly increased,especially which in the patients with EV71 positive is more significant.The combined detection of serum NSE and CRP levels can be used as the early sensitive indicators for diagnosing HFMD complicating encephalitis.

hand-foot-mouth disease；C reactive protein；enterovirus 71；neuron-specific enolase

遵义市科学技术基金项目[遵义市科合社字(2013)37号]；贵州省卫生厅科学技术基金项目(gzwkj2013-1-060)。作者简介：熊燚(1978-)，副主任医师，硕士，主要从事小儿危重疾病的临床诊治研究。

R725.1

A

1671-8348(2016)21-2926-03

2016-01-17

2016-04-04)

论著·临床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.014