浓百精简合剂质量控制方法的研究

姜清华，刘　莉，孙　箫，李　嫄，赵　铁



浓百精简合剂质量控制方法的研究

姜清华，刘莉，孙箫，李嫄，赵铁

中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳 110004

[摘要]目的建立浓百精简合剂的质量标准控制方法。方法采用薄层色谱法对浓百精简合剂中黄芩、五味子2味中药进行定性鉴别；采用RP-HPLC法测定浓百精简合剂中厚朴酚及和厚朴酚的含量，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸水(65∶35，v∶v)，流速为1.0 mL/min，检测波长294 nm。结果薄层色谱法能检测出浓百精简合剂中的黄芩、五味子，特征明显，专属性强；RP-HPLC可测定厚朴酚、和厚朴酚的含量。厚朴酚在0.050 8～0.355 6 μg范围内线性关系良好(r=0.999 3)，和厚朴酚在0.025 15～0.176 05 μg范围内线性关系良好(r=0.999 3)。厚朴酚加样回收率为98.28%，RSD=1.25%；和厚朴酚为98.62%，RSD=0.76%。结论通过制定该质量标准，确保对浓百精简合剂进行快速地定性及定量分析，实验重复性良好，结果稳定、可靠，能够控制浓百精简合剂的质量。

[关键词]浓百精简合剂；质量控制；薄层色谱法；含量

0　引言

浓百合剂为我院临床使用多年的医院制剂，具有宣肺平喘，化痰止咳之效，主治百日咳及其他咳喘症，疗效非常确切。由于浓百合剂药味繁多，几乎囊括了所有止咳、祛痰、平喘的中药，为了用更少的药味达到相同的效果，本研究对浓百合剂进行了精简。在中医理论的指导下确立浓百合剂精简方组成：蜜麻黄、苦杏仁、厚朴、石菖蒲、五味子、黄芩及甘草。功能主治：宣肺降逆，止咳平喘。用于感冒、上呼吸道感染、慢性支气管炎所见之咳嗽、喘促。方解：蜜麻黄为君，宣肺降逆，止咳平喘，苦杏仁、石菖蒲、厚朴助麻黄宣肺降逆、止咳平喘之用，共为臣药；以五味子收敛肺气，以防君臣诸品宣降太过，取黄芩清宣肺气，以除留恋之邪；甘草之用，功在三端，一是助君臣诸药祛痰止咳，二可调和众品，合取其效[1-2]。

为了验证浓百精简合剂在止咳、祛痰、平喘和抗炎的功效，本实验室进行了浓百精简合剂与浓百合剂药效学平行研究[3]。同时，为了能更好地开发浓百合剂，本研究采用TLC和RP-HPLC法，从定性和定量建立了浓百精简合剂的质量标准，为开发及临床的安全使用奠定了一定的基础。

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent 1100型液相色谱仪(安捷伦公司)，SZ-96型自动纯水蒸馏器(上海亚荣电化仪器厂)，SHZ-D循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，AS10200B型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)，B-260恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)，CPA2250电子分析天平(德国Sartorius)。

1.2试剂与药材厚朴酚(中国药品生物制品检定所，批号：110729-200411)，和厚朴酚(中国药品生物制品检定所，批号：110730-201011)，甲醇及乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2　五味子和黄芩的薄层层析

2.1五味子的鉴别取浓百精简合剂10 mL，减压浓缩至干，残渣加入三氯甲烷20 mL使溶解，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为样品溶液。取缺五味子的阴性制剂溶液，同法制成阴性样品溶液。五味子醇甲标准品，加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作为五味子醇甲对照品溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)∶甲酸乙酯∶甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与五味子醇甲对照溶液相应的位置上显相同颜色(紫色)的斑点，阴性液无干扰，结果见图1。

图1　五味子的薄层鉴别

2.2黄芩的鉴别[4]取浓百精简合剂10 mL，减压浓缩至干，加甲醇20 mL，超声处理30 min后过滤，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇使溶解，作为样品溶液。取除黄芩以外的6味药，按同法制得黄芩阴性对照溶液。取黄芩苷标准品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为黄芩苷对照品溶液。取上述溶液各5 μL，依次点在同一硅胶G板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出晾干后，喷1%三氯化铁乙醇溶液。供试品在薄层板与黄芩苷对照品相应的位置上显相同颜色(绿色)的斑点，阴性液无干扰，结果见图2。

图2　黄芩的薄层鉴别

3　厚朴酚及和厚朴酚的含量测定

3.1色谱条件色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸水(65∶35,v∶v)；流速为1 mL/min；检测波长294 nm；进样量10 μL。按厚朴酚计算理论塔板数应不低于5 000。分别吸取供试品溶液与对照品溶液进样测定，用外标法计算厚朴酚、和厚朴酚的含量[5-6]。

3.2对照品溶液的制备精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含厚朴酚50 μg、和厚朴酚25 μg的溶液。精密量取上述两种浓度对照品溶液各5 mL，放入10 mL容量瓶中，即得。

3.3供试品溶液的制备及测定取10 mL浓百精简合剂于100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，取续滤液，即得。取缺厚朴的阴性药材，按浓百精简合剂供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。结果表明阴性对照溶液无干扰。结果见图3。

3.4线性关系考察精密吸取厚朴酚对照品溶液，制成浓度为15.255、20.34、25.425、30.51、35.595、50.85 μg/mL的溶液；同法取和厚朴酚对照品溶液，制成浓度为7.245、9.66、12.075、16.905、35.595、25.15 μg/mL的溶液。分别吸取上述溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，以进样

图3　浓百精简合剂中厚朴的HLPC色谱图

量(μg)对峰面积绘制标准曲线，计算得厚朴酚回归方程y=1 206 x-4.785 7 (r=0.999 3)，和厚朴酚回归方程y=1 746.9 x-3.714 3 (r=0.999 3)。结果表明，在上述色谱条件下，厚朴酚在0.050 8～0.355 6 μg范围内，和厚朴酚在0.025 15～0.176 05 μg范围内呈良好的线性关系。

3.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，测得厚朴酚RSD=0.663%(n=6)，和厚朴酚RSD=0.567%(n=6)，结果显示仪器精密度良好。

3.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别于配制好后0、2、4、8、12、24 h进样，观察供试品溶液稳定性。经计算得24 h内厚朴酚RSD=0.61%；和厚朴酚RSD=0.96%。稳定性试验结果表明，在制备后24 h内供试品溶液稳定性良好。

3.7重复性试验按“2.1.3”项中方法制备供试品溶液5份，分别进样。求得厚朴酚含量0.271 4%，RSD=0.85%；和厚朴酚含量为0.096 6%，RSD=2.37%，表明本方法供试品溶液的重复性良好。

3.8加样回收率试验精密称取已知含量的供试品溶液5份，加入厚朴酚与和厚朴酚对照品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果厚朴酚的平均回收率为98.28%(RSD=1.25%，n=5)，和厚朴酚的平均回收率为98.62%(RSD=0.76%，n=5)。见表1。

表1　加样回收率实验结果(n=5)

3.9浓百精简合剂中厚朴酚与和厚朴酚的含量取3批样品，按“2.1.3”项下方法制成供试品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各10 μL进样，记录峰面积，计算厚朴酚和和厚朴酚含量，结果见表2。

表2　含量测定实验结果

4　结果与讨论

4.1本文在考察了浓百精简合剂药效学及临床观察等研究并取得了良好的结果后，为了建立浓百精简合剂的质量标准，采用薄层色谱法成功鉴别了五味子、黄芩，供试品色谱中在与五味子醇甲、黄芩苷对照品色谱对应位置上均显同样颜色斑点，阴性溶液无干扰。表明此方法可以用于浓百精简合剂中五味子、黄芩的定性鉴别。

4.2厚朴是一味历史悠久的中药，厚朴酚与和厚朴酚是厚朴中最主要的2个活性组分。经大量研究表明，厚朴酚能够抑制炎症反应，缓解急性疼痛，并具有抗肿瘤作用及中枢镇静作用，同时能够缓解幼年自发性高血压[7-9]，同时还可能通过改善胰岛素抵抗和保护胰岛B细胞而控制血糖，延缓2型糖尿病的发展[10]；和厚朴酚也具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗痉挛、抗抑郁等多重作用[11-15]。为了完善浓百精简合剂的质量标准，笔者参考其他制剂或中药材应用的含量测定方法对其中的重要药效成分厚朴酚与和厚朴酚进行了含量测定。笔者考察了多种溶剂系统，结果表明，流动相为甲醇-0.1%磷酸水(65∶35)时供试品溶液中厚朴酚及和厚朴酚与相邻组分分离度良好，阴性溶液无干扰，和厚朴酚保留时间约为16.378 min，厚朴酚保留时间为28.519 min。在选定的色谱条件下，方法学考察均符合有关规定。

4.3此质量标准同时对方中君药和2味臣药进行了定性、定量测定，控制了浓百精简合剂的质量，为本制剂的进一步使用推广和研究奠定了基础。为了更合理地使用浓百精简合剂，对其进行了急、慢性毒性试验，结果表明，其在使用剂量为临床用量的160倍时，未见任何毒性反应，为临床的安全使用提供了保证。

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收稿日期：2015-08-05

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201603023

Study on the quality control of simple Nongbai mixture

JIANG Qing-hua,LIU Li,SUN Xiao,LI Yuan,ZHAO Tie

(Desect1ment of Pharmacy,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

【Abstract】ObjectiveTo improve the quality criteria of simple Nongbai mixture.MethodsTLC was used to make qualitative determination of Chinese magnoliavine fruit and scutellaria baicalensis in simple Nongbai mixture and RP-HPLC was used to determine the content of its main constituents of magnolol and honokiol.For the determination of magnolol and honokiol,the chromagraphic column was Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm); the mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid water (65∶35 v∶v); the flow rate was 1 mL/min; the peaks were monitored at 294 nm.ResultsChinese magnoliavine fruit and scutellaria baicalensis in simple Nongbai mixture could be identified by TLC.The contents of the calibration curve of magnolol showed good linerity (r=0.999 3) within the range of 0.050 8～0.355 6 μg; the calibration curve of honokiol showed good linearity (r=0.999 3) within the range of 0.025 15～0.176 05 μg.The average recovery of magnolol was 98.28% and the RSD was 1.25%.The average recovery of honokiol was 98.62% and the RSD was 0.76%.ConclusionThe present method is stable,accurate and highly repetitive,which can be used for the quality control of this preparation.

Key words：Simple Nongbai mixture; Quality control; TLC; Content