HPLC测定湿毒清颗粒中苦参碱的含量

张　慧



HPLC测定湿毒清颗粒中苦参碱的含量

张慧

辽宁省沈阳市第二中医医院药剂科(沈阳 110101)

摘要：目的建立湿毒清颗粒中苦参碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱条件：流动相∶甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(38∶62)，用三乙胺调pH值为8.0；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm。结果苦参碱进样量在157.44～1416.96μg范围内，线性关系良好，r=0.9999，回收率在95.9%～100.8%之间，RSD为2.0%。结论该方法稳定，结果准确。

关键词：高效液相色谱法；湿毒清颗粒；苦参碱

湿毒清颗粒是在湿毒清胶囊[1]的基础上，由地黄、当归、丹参、蝉蜕、苦参、白鲜皮、甘草、黄芩、土茯苓等九味中药精制而成。方中含有苦参，其主要活性成分为生物碱类成分。生物碱成分中主要含有苦参碱，而且苦参碱的测定方法已较成熟，故对本制剂选择苦参碱作为定量指标，采用高效液相色谱法进行含量测定。

1　仪器与试剂

仪器：日本岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪；SPD-10AVPUV-VIS检测器；

试剂：苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所 批号：110805-200306)；甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1检测波长的确定取苦参碱对照品适量，对其在200～400nm进行扫描。结果在205nm处有最大吸收，由于205nm比较靠近末端吸收，而且样品在205nm处的响应值过低，参照相关文献[2,3]，最后确定波长为210nm。

2.2流动相的筛选参照相关文献[4,5]，并进行了改进，确定为甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(38∶62)，用三乙胺调pH值为(8.0±0.1)为流动相，苦参碱峰与其他组分峰达到基线分离，所以流动相确定为甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(38∶62)，用三乙胺调pH值为8.0。

2.3色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(38∶62)，用三乙胺调pH值为8.0；流速：1.0ml/min；检测波长为210nm。

2.4对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品19.68mg，置250ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含78.72μg的溶液。

2.5供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约4.0 g，精密称定，加氨水1ml使润湿，再加氯仿50ml，称重，超声提取30min(频率80kHz，功率250W)，放冷，称重，用氯仿补足减失的重量，滤过，滤液蒸干，用氯仿-甲醇(7∶3)少量溶解残渣，上于中性氧化铝柱上，(内径1cm，2 g，干法上柱)，用氯仿-甲醇(7∶3)20ml，洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容于50ml量瓶中，滤过，即得。

2.6苦参碱线性范围考察精密量取对照品液2μl、6μl、10μl、14μl、18 μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为Y=389.65X-188.9 R=0.9999。结果表明，苦参碱进样量在157.44～1416.96μg范围内，线性关系良好。测定结果见表1。

表1　线性范围考察结果

2.7精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，测定峰面积，结果表明，精密度良好。见表2。

表2　精密度试验考察结果

2.8稳定性试验精密吸取供试品液10μl，按0h、2h、4h、6h、8h时间间隔，分别测定样品峰面积，结果表明，样品在8小时内测定结果稳定，符合要求。测定结果见表3。

表3　稳定性试验考察结果

2.9重复性试验取本品4.0 g，精密称定，共取5份，分别按供试品溶液制备方法操作、测定，结果表明，重复性结果符合要求。测定结果见表4。

表4　重复性试验考察结果

2.10回收率试验取本品2.0 g，精密称定，共取5份，分别加入苦参碱对照品溶液(1.21mg/ml)1ml，按供试品溶液制备项下方法操作，测定色谱峰面积，计算，测定结果提示：本方法回收率在95.9%～100.8%之间，RSD为2.0%，本回收率实验符合规定。测定结果见表5。

表5　回收率试验测定结果

3　讨论

本品采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量，方法稳定，结果准确，可作为该制剂的质量控制方法。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1175.

[2]肖淼生，皮海菊，程晓莉，等. 高效液相色谱法测定妇安消疹洗液中苦参碱的含量[J]. 时珍国医国药，2006，17(12)：2460-2461.

[3]宋茹，袁继民，于连生. 高效液相色谱法测定复方狼毒注射液中苦参碱的含量[J]. 时珍国医国药，2000，11(9)：789-790.

[4]郑马庆，潘伟娜，朱延勤.高效液相色谱法测定苦参碱滴眼液中苦参碱的含量[J].江苏药学与临床研究，2002，10(4)：22-23.

[5]宁永学，王玳，张中苏，等.HPLC法测定金蒲胶囊中苦参碱的含量[J].中国药品标准，2006，7(3)：66-68.

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.08.019

文章编号：1003-8914(2016)-08-1094-02

收稿日期：(本文校对：王秀琴2015-08-03)

Determination of Matrine in Shiduqing Granules by HPLC

ZHANG Hui

(Department of Pharmacy, Shenyang Second Hospital of Traditional Chinese Medicine, Liaoning, Shenyang 110101, China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of matrine in Shiduqing granules. MethodUsing HPLC method, Chromatographic conditions: The mobile phase: methanol-0.02mol/L Sodium dihydrogen phosphate (38:62). Turning PH value was 8.0 with triethylamine. The flow rate was 1.0ml/min with the detection wavelength at 210nm. ResultThe injection volume of matrine was in the range of 157.44 ～ 1416.96 μg. The linear relationship was good, r=0.9999. The recovery was between 95.9～100.8%. RSD was 2.0%. ConclusionThe method was stable, and the result was accurate.

Key words：High performance liquid chromatography; Shiduqing granules; Matrine