奶牛布鲁菌病血清学调查及病原分离鉴定

莫合塔尔·阿布力孜，帕提古丽·托乎提，古丽呢嘎尔·麻合塔尔

（1.新疆巴州动物疾病控制与诊断中心，新疆 库尔勒 841000；2.塔里木大学生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

奶牛布鲁菌病血清学调查及病原分离鉴定

莫合塔尔·阿布力孜1，帕提古丽·托乎提1，古丽呢嘎尔·麻合塔尔2

（1.新疆巴州动物疾病控制与诊断中心，新疆 库尔勒 841000；2.塔里木大学生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

2015—2016年应用虎红平板凝集试验、试管凝集试验对新疆维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州21个奶牛场、503个奶牛养殖户所饲养的奶牛进行了布鲁菌病血清学调查，虎红平板凝集试验阳性率为1.10%，试管凝集试验阳性率为0.82%。对2013—2016年4年内在该地区收集的奶牛流产胎儿、胎衣、阴道分泌物等243份病料进行布鲁菌的分离鉴定，结果分离出2株羊种2型布鲁菌和2株牛种3型布鲁菌。血清学调查及布鲁菌分离鉴定结果佐证了在该地区存在布鲁菌病，建议奶牛养殖场（户）和有关部门切实做好布鲁菌病的检疫及防控工作。

布鲁菌；血清学调查；病原分离；菌型鉴定；奶牛

新疆维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州（以下简称巴州），下辖1个县级市、7个县和1个自治县，是一个半农半牧自治州，全州有21个奶牛场、503个奶牛养殖户。定期对该地区奶牛进行布鲁菌病的血清学调查，可掌握该地区布鲁菌病的疫情动态。

2013—2016年4年内，新疆巴州动物疾病控制与诊断中心疫病检测科在巴州地区收集奶牛流产胎儿、胎衣、阴道分泌物、强阳性奶牛的全血、公牛的精液、牛奶、脏器、胃液等病料共243份样品，分离出4株布鲁菌。并于2015—2016年应用2种试验方法进行了奶牛布鲁菌病的血清学调查。现将该地区奶牛布鲁菌病血清学调查及分离菌菌型鉴定结果报如下：

1 材料与方法

1.1 材料 平板凝集试验、虎红平板凝集试验、试管凝集试验抗原和阳性血清均由新疆维吾尔自治区动物预防控制中心提供。虎红平板凝集试验抗原，哈药集团生物疫苗有限公司生产，生产日期2016年2月，批号为20160203，有效期12个月；试管凝集试验抗原，哈药集团生物疫苗有限公司生产，批号为201501，生产日期2015年5月8日，有效期18个月。血清：2015—2016年在巴州地区21个奶牛场、503个奶牛养殖户中共采集奶牛血清19 498份。标准菌株和布鲁氏菌A、M、R因子血清均由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供；硫堇、碱性复红等试剂均由新疆维吾尔自治区动物疾病控制中心布鲁菌病实验室提供。所用生物制品、试剂均在有效期内。病料为2013—2016年4年内收集的流产胎儿、胎衣、阴道分泌物、阳性奶牛的牛奶、公牛的精液、胃液、脏器等。

1.2 方法

1.2.1 血清学调查：采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行奶牛布鲁菌病的血清学调查［1-3］。2种试验均按国家农业部颁布的《布鲁氏菌病防治技术规范》进行。

1.2.2 布鲁菌分离和鉴定：无菌操作取肝、脾、肺、心、肾、胃液、淋巴结等病料接种胰蛋白胨培养基（1式接种2份，分别置于大气环境和5%～10%CO2环境），放在37℃恒温箱培养，定期观察菌落生长情况［4-6］。取可疑菌落涂片，用革兰氏和柯兹罗夫斯基法染色，镜检。按联合国粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO）颁布的CO2需要、H2S产生、硫堇和碱性复红试验以及A、M、R因子凝集试验进行鉴定［7-8］。试验在新疆维吾尔自治区动物疾病控制中心布鲁菌病实验室进行。

2 结果

2.1 血清学调查结果 2015—2016年采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验对采集的19 498份奶牛血清进行了奶牛布鲁菌病检测。其中，216份血清虎红平板凝集试验阳性，阳性率为1.10%；160份血清试管凝集试验阳性，阳性率0.82%。

2.2 病原的分离培养 培养3～7 d后，有4份血清培养基上形成细小、湿润、闪光、隆起的菌落。取菌落涂片，用革兰氏和柯兹罗夫斯基法染色，镜检，为革兰氏阴性短小杆菌，多散在，柯兹罗夫斯基法染色为红色。采用布鲁菌病标准阳性血清、阴性血清和生理盐水，对可疑菌落作玻片直接凝集试验，4株分离菌株对布鲁菌阳性血清呈明显的凝集反应，而对布鲁菌阴性血清和生理盐水不产生凝集。

2.3 病原鉴定 将从奶牛病料中分离的4株菌移管增菌，送新疆维吾尔自治区动物疾病控制中心布鲁菌病实验室进行菌型鉴定。其中，有2株菌不需要CO2，不产生H2S，A因子血清凝集，M、R因子不凝集，1∶2.5 万硫堇中不生长，1∶5 万、1∶10 万硫堇中生长，1∶5万和1∶10万碱性复红均生长，与国际标准菌株羊种2型布鲁菌的特性完全一致；另外2株需要CO2、产生H2S，A因子血清凝集，M、R因子不凝集，硫堇（1∶2.5 万、1∶5 万、1∶10 万）和碱性复红（1∶5万和1∶10万）均生长，与国际标准菌株牛种3型布鲁菌的特性完全一致。

3 讨论

2015—2016年的血清学调查涉及巴州8个县1个市21个奶牛场、503个奶牛养殖户，血清学调查结果佐证了在该地区存在布鲁菌病。从2013—2016年收集的病料中，分离到了羊种2型和牛种3型布鲁氏菌，说明该地区布鲁菌病病原复杂，不同生物型布鲁菌在各种动物间存在转移现象，从而给预防工作带来一定的难度。

近几年来，奶牛养殖业发展较快，由于部分养殖场（户）受到利益的驱动，对布鲁菌病检疫阳性奶牛处理不彻底，导致防疫和检疫工作难度较大。建议奶牛养殖场（户）和有关部门切实做好布鲁菌病防控工作，采取“检、杀、消、管”综合防控措施，“检”即检疫监测，“杀”即扑杀净化，“消”即消毒灭源，“管”即流通监管，要有效控制当前布鲁菌病疫情蔓延扩散，一定要把好购进奶牛布鲁菌检疫关，抓好奶牛规模化养殖场和专业户的定期检疫工作，以确保奶牛养殖业健康发展，保证畜产品质量安全，为消费者的健康及生命安全提供保障。

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S851.3；S858.232.61

A文章顺序编号：1672-5190（2016）10-0104-02

2016－07－21

项目来源：新疆维吾尔自治区少数民族专业技术人员特培项目（201523110）。

莫合塔尔·阿布力孜（1960—），男，高级兽医师，主要研究方向为动物布鲁菌病和结核病防治。

（责任编辑：钱英红）