川芎嗪治疗重症急性胰腺炎的实验研究

王　琳，邢淑芳



川芎嗪治疗重症急性胰腺炎的实验研究

王琳1*，邢淑芳2

1.唐山市丰南区医院，河北 唐山 063300；2.武安市第一人民医院，河北 武安 056300

[摘要]目的探讨川芎嗪对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用及其机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、重症急性胰腺炎组(胰腺炎组)和川芎嗪治疗组(治疗组),每组10只。以L-精氨酸注射法制作大鼠重症急性胰腺炎模型，治疗组大鼠在制模成功后给予川芎嗪治疗，在实验后24 h采集标本，比较不同组大鼠胰腺组织HE染色结果，血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)、TNF-α水平及胰腺湿/干比率。结果胰腺炎组和治疗组大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平均显著高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组大鼠血清淀粉酶[(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L]、IL-6[(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L]和TNF-α[(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL]均低于胰腺炎组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组大鼠胰腺湿/干比率(9.8±0.7)低于胰腺炎组(12.5±0.8)，差异有统计学意义。结论川芎嗪可通过降低重症急性胰腺炎大鼠的血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平发挥治疗作用。

[关键词]川芎嗪；重症急性胰腺炎；淀粉酶；白介素-6；TNF-α

0　引言

急性胰腺炎是以胰腺水肿、出血坏死、炎性细胞浸润为特征的胰腺炎性疾病，常伴有全身各系统的炎症反应综合征以及多器官功能衰竭[1]，病死率高达20%～30%[2]。因此，如何有效治疗重症急性胰腺炎，防止并发症的发生是目前研究的重点。川芎嗪是一种含有多种成分的中药，具有抗氧化、清除氧自由基、改善微循环的作用[3]，广泛用于治疗心脑血管疾病。近年研究显示，川芎嗪可降低血清中TNF-α等多种炎症因子[4]，其可能在重症急性胰腺炎过程中发挥一定的保护作用，但相关研究尚较少。本研究通过在重症急性胰腺炎大鼠中应用川芎嗪进行治疗，探讨川芎嗪对重症急性胰腺炎的治疗效果及其可能机制，为合理治疗重症急性胰腺炎提供科学依据。

1　材料

1.1实验动物健康纯种雄性Sprague-Dawley大鼠[购自北京市实验动物养殖中心，许可证号：SCXK(京)2010-0010]30只，年龄3～6个月，体重300～350 g，专门实验室饲养员统一饲养，隔日换垫料，室温温度保持20～25 ℃。

1.2试剂L-精氨酸粉末由加拿大BBI公司生产，分析纯级。川芎嗪注射液由无锡市第七制药厂生产，批号：2014012606。TNF-α测定试剂盒购自上海微蒙生命科技有限公司。

2　方法与结果

2.1三组大鼠胰腺组织HE染色结果比较采用单纯随机分组方法，将实验动物随机分为假手术组、重症急性胰腺炎组(胰腺炎组)、川芎嗪治疗组(治疗组)，每组10只。假手术组大鼠打开腹腔、翻动胰腺组织后关腹，同期给予生理盐水腹腔注射。其他两组大鼠均采用L-精氨酸腹腔注射法进行重症急性胰腺炎模型制备，将L-精氨酸粉末20 g溶解于100 mL 0.9%的氯化钠溶液中，搅拌，直至温度达到30 ℃左右，以NaOH调整溶液pH值至7.0，配成20%的L-精氨酸溶液。大鼠于制模前12 h禁食水。将配制好的20% L-精氨酸溶液分2次腹腔内注射(2 000 mg/kg)，每次间隔1 h。治疗组大鼠在制备模型后5 min，将川芎嗪注射液(20 mg/kg)通过股静脉给药1次。

所有大鼠均于实验24 h处死，处死大鼠经上腹正中切口入腹，观察胰腺大体变化，取一半体、尾部胰腺组织，石蜡包埋后连续切片，厚度约5 μm，以经粘片剂处理过的载玻片捞片，晾干后置于60 ℃烤箱烘烤4 h后行HE染色，光镜下观察组织学改变。

结果显示，假手术组大鼠胰腺组织染色切片显示，胰腺组织细胞结构完整，纹理清晰，腺泡细胞排列整齐，未见炎症细胞浸润及细胞破坏。胰腺炎组大鼠大体可见胰腺腺体增大、肥厚，呈暗紫色，坏死灶散在分布，坏死较重；镜下见脂肪坏死，腺泡破坏较多，血管影较少，部分被消化，大片状出血，腺泡及小叶结构模糊不清。川芎嗪治疗组大鼠镜下见组织结构紊乱，纹理交错，腺泡细胞点状坏死，少量炎症细胞浸润(图1)。

图1　不同组大鼠胰腺组织HE染色结果(×200)

2.2三组大鼠血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)和TNF-α水平测定所有大鼠于实验24 h处死后，采集静脉血，采用人工碘比色法测定血清淀粉酶，采用平衡法测定IL-6水平。TNF-α水平测定采用ELISA法。结果显示，胰腺炎组和川芎嗪组大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平显著高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平低于胰腺炎组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　各组大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平测定

注：*与假手术组比较，P<0.05；#与胰腺炎组比较，P<0.05

2.3三组大鼠胰腺组织湿/干比率三组大鼠于24 h处死后,分别切取一半胰腺组织于电子天平上称重,为湿质量；再将切取的胰腺组织于80 ℃烘干24 h至质量不变为止,为干质量,计算胰腺的湿/干比率。结果显示，胰腺炎组(12.5±0.8)及治疗组(9.8±0.7)大鼠胰腺湿/干比率，均高于假手术组(3.5±0.4),差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组大鼠胰腺湿/干比率低于胰腺炎组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。

3　讨论

重症急性胰腺炎可引起局部和全身性的炎症反应，最后导致严重的并发症，因此，如何预防和控制重症急性胰腺炎的发生发展是目前研究的热点和重点问题。由于重症急性胰腺炎病因多样，病情易发生变化，单纯的西医治疗和手术治疗已不能有效地控制及治疗本病，中药对本病的治疗作用逐渐引起人们关注[5]。目前，临床上用于治疗该病的单味中药主要有大黄、芒硝、丹参等[6-7]，关于川芎嗪对重症急性胰腺炎的治疗作用研究尚较少。

川芎嗪的主要成分是川芎嗪多糖和皂苷,具有抗炎、抗氧化、清除自由基、抑制白细胞急骤增加、抑制血小板及血栓形成等作用[8]。乌日娜等[9]对川芎嗪治疗大鼠脑损伤的效果进行了研究，结果显示，川芎嗪可通过降低炎症因子水平发挥脑保护作用，提示川芎嗪对炎症性疾病可能有一定的治疗作用，而重症急性胰腺炎患者往往有明显的全身炎症反应。因此，本研究采用川芎嗪对重症急性胰腺炎进行治疗。

结果显示，治疗组大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平均低于同期未治疗组，差异有统计学意义。HE染色结果也显示，治疗组大鼠胰腺组织充血程度和炎症细胞浸润程度好于未治疗组。此外，治疗组大鼠胰腺湿干比率显著低于胰腺炎组，进一步证实川芎嗪治疗可有效减轻细胞炎症反应，对胰腺发挥一定的保护作用。有研究发现，川芎嗪可明显降低黏附分子的表达、降低微血管通透性、改善微循环障碍，进而减轻细胞损伤[10]。川芎嗪还可通过降低NF-κB mRNA表达水平，阻断胰腺炎过程中炎症介质的瀑布样级联反应，进而减少炎症因子的产生[11]，这可在一定程度上解释川芎嗪治疗减少血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平的原因。血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平是重症急性胰腺炎的重要诊断指标和预后指标，其升高水平与胰腺损伤程度及并发症发生率有一定的相关性[12-13]。本研究证实这些指标与重症急性胰腺炎的严重程度密切相关，降低这些指标可能有助于减少重症急性胰腺炎并发症的发生。

综上所述，川芎嗪可通过抑制大鼠重症急性胰腺炎后血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平发挥治疗作用，提示在疾病早期应及时治疗，以降低炎症反应，减少并发症，进而降低死亡率。

参考文献：

[1]Malik AM.Acute pancreatitis.A more common and severe complication of gallstones in males[J].Int J Health Sci,2015,9(2):141-145.

[2]李力,黄玲,徐萍,等.重症急性胰腺炎预后危险因素分析[J].中华胰腺病杂志,2015,15(3):150-153.

[3]刘立涛,张爱民,李广波,等.丹参川芎嗪对重症急性胰腺炎大鼠胰腺微循环及血液流变学的影响[J].中华实验外科杂志,2012,29(8):1615-1617.

[4]Tan F,Fu W,Cheng N,et al.Ligustrazine reduces blood-brain barrier permeability in a rat model of focal cerebral ischemia and reperfusion[J].Exp Ther Med,2015,9(5):1757-1762.

[5]胡丹华,靳楠楠,程永华,等.中药联合肠内营养治疗重症急性胰腺炎的疗效研究[J].中医临床研究,2015,(3):70-71.

[6]杨芳勇,王丽娜,岳小强,等.中药大黄在急性胰腺炎治疗中的临床应用[J].中华胰腺病杂志,2015,15(3):212-214.

[7]肖都,张永根,刘怡,等.鼻肠管与胃管注入生大黄治疗重症急性胰腺炎的疗效比较[J].实用医学杂志,2014,(13):2102-2104.

[8]Tan F,Fu W,Cheng N,et al.Ligustrazine reduces blood-brain barrier permeability in a rat model of focal cerebral ischemia and reperfusion[J].Exp Ther Med,2015,9(5):1757-1762.

[9]乌日娜,赵海平,胡文秀.川芎嗪对重症急性胰腺炎大鼠脑损伤保护作用的实验研究[J].中国普外基础与临床杂志,2012,19(7):761-764.

[10]Wang Q,Tang Z,Zhang W.Brain microdialysate,CSF and plasma pharmacokinetics of ligustrazine hydrochloride in rats after intranasal and intravenous administration[J].Biopharm Drug Dispos,2013,34(7):417-422.

[11]关瑞云,王永玲,邱素清,等.川芎嗪对新生儿缺氧缺血性脑病一氧化氮和肿瘤坏死因子-α及脑型肌酸激酶同工酶的影响[J].中华实用诊断与治疗杂志,2012,26(9):905-906.

[12]黄平,王波,杜治祥,等.空腹C肽、血尿淀粉酶检测对脓毒症继发胰腺功能损伤的诊断价值[J].中国临床研究,2015,28(5):659-660.

[13]郑建锋,刘龙飞,周贤.急性胰腺炎临床评分研究进展[J].实用医学杂志,2014(4):657-659.

收稿日期：2015-11-03

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201607013

Experimental study of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis

WANG Lin1*，XING Shu-fang2

(1.Fengnan District Hospital,Tangshan 063300,China;2.First People′s Hospital of Wu′an City,Wu′an 056300,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect and the mechanism of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis (SAP) in rats.MethodsThirty SD rats were randomly divided into sham operation group (n=10),SAP group (n=10),and ligustrazine treatment group (n=10).L-aginine injection method was used to manufacture SAP model in rats.Ligustrazine was used to treat SAP for 24 h in rats.The pathological change of pancreatic tissue,serum amylase level,serum interleukin-6 level,TNF-α level and wet/dry ratio among different groups in rats were compared.ResultsSerum amylase level,serum interleukin-6 level and TNF-α level in rats of SAP group and ligustrazine treatment group were significantly higher than those of sham operation group (P<0.05).Serum amylase level [(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L],serum interleukin-6 level [(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L] and TNF-α level [(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL] of ligustrazine treatment group were lower than those of SAP group,there being significant differences(P<0.05).The wet/dry ratio of ligustrazine treatment group (9.8±0.7) was less than that in SAP group (12.5±0.8),there being significant difference.ConclusionLigustrazine is effective in treating severe acute pancreatitis in rats by decreasing the level of serum amylase,interleukin-6 and TNF-α.

Key words：Ligustrazine;Severe acute pancreatitis;Amylase;Interleukin-6;TNF-α