骨痹止痛液中乌头碱的限量检查*

李喜香，李兴勇，王雪梅，包　强

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)



骨痹止痛液中乌头碱的限量检查*

李喜香，李兴勇，王雪梅，包强

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)

目的:建立骨痹止痛液中乌头碱限量检查方法。方法:采用RP-HPLC对骨痹止痛液中的乌头碱进行限量检查，色谱柱为Waters Symmetry Shield C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-5 mL/L三乙胺水溶液(70∶30)，流速1.0 mL/min，检测波长235 nm，进样体积20 μL，柱温为室温。结果：乌头碱在0.017 6～0.176 0 μg范围内进样量与峰面积积分值线性关系良好(r=0.999 6)；平均加样回收率为98.49%，RSD值为0.99%(n=6)。结论:该方法操作简便、准确可靠、重复性好，可用于骨痹止痛液中乌头碱的限量检查。

骨痹止痛液/成分分析；RP-HPLC；乌头碱

骨痹止痛液是中药酒剂，来源于甘肃省中医院骨科专家经验方(专利号：ZL201210296740.5)，由乳香、没药、木瓜、独活、羌活、小茴香、当归、续断、厚朴、川芎、白芷、制川乌、制草乌组成，具有活血止痛、祛风除湿的功效，用于跌打瘀滞、肿痛，风湿拘挛，四肢麻木，骨节酸痛等症的治疗。骨痹止痛液处方中的制川乌和制草乌具有祛风除湿、温经止痛的功效，主要含二萜类乌头碱[1]。乌头碱是其有效成分，镇痛作用强，且连续用药不易产生耐受现象[2-3]；但也是毒性成分。考虑到制川乌和制草乌均为毒性药材，使用时需对其进行严格的限量，为保证用药安全有效，笔者采用RP-HPLC法对骨痹止痛液中的乌头碱进行限量检查，为该制剂质量标准的提高提供依据。

1　药品、试剂与仪器

骨痹止痛液(批号20140305，20140421，20140513)，由甘肃省中医院提供。乌头碱对照品(批号MUST-15013008，纯度>98%)，购自成都曼斯特生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，购自天津市大茂化学试剂厂；水为娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。2695型高效液相色谱仪(配有1525四元泵，2487 紫外检测器,717自动进样器)，美国Waters公司产品；FA1004电子分析天平，上海良平仪器仪表有限公司产品；HWS-24电热恒温水浴锅，上海齐欣科学仪器有限公司产品。

2　方法与结果

2.1色谱条件

按照参考文献[4]。色谱柱为Waters Symmetry Shield C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-5 mL/L三乙胺溶液(70∶30)；检测波长235 nm，流速1.0 mL/min，柱温为室温，进样量20 μL。

2.2对照品溶液的制备

精密称定乌头碱对照品1.10 mg,置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为对照品储备液；准确量取4.00 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得0.008 8 g/L的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

准确量取骨痹止痛液35 mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，并定容至10 mL量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性对照溶液的制备

取处方中除制川乌和制草乌外的其余药材，按骨痹止痛液的工艺条件渗漉制备阴性样品，按2.3项下方法制备缺制川乌和制草乌的阴性对照溶液。按2.1项下方法测定，供试品色谱中乌头碱与其他组分达到分离，缺制川乌和制草乌的阴性样品对测定无干扰。色谱图见图1。

2.5线性关系考察

取2.2项下对照品溶液2，4，6，8，10，20 μL，按 2.1项下色谱条件，进样测定，记录色谱图。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，进样量(μg)为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程为：Y=1.00×106X-6.49×103,r=0.999 6。结果表明：乌头碱在0.017 6～0.176 0 μg内线性关系良好。

2.6精密度试验

精密量取2.2项下对照品溶液，连续进样6次，进样量20 μL，测定乌头碱的峰面积值，计算得RSD值为1.24%。结果表明：该方法精密度良好。

A.乌头碱对照品；B.供试品；C.缺制川乌和制草乌阴性对照品

2.7重复性试验

取同一批次骨痹止痛液6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，测得乌头碱的平均含量为1.96 mg/L，RSD值为1.63%。结果表明：该方法重复性良好。

2.8稳定性试验

取2.3项下供试品溶液，室温放置，分别在0，2，4，6，8，10，12，24 h进样测定，记录峰面积。结果：乌头碱峰面积的RSD值为1.58%。结果表明：24 h内供试品溶液基本稳定。

2.9加样回收率试验

精密量取已知含量为1.97 mg/L的骨痹止痛液(批号20140305)6份，每份20 mL，置于蒸发皿中，分别精密加入2.2项下对照品溶液4.50 mL，按2.3项下方法制备加样供试品溶液，精密量取20 μL进样分析，记录色谱峰峰面积，计算其回收率。结果见表1。

表1　骨痹止痛液中乌头碱加样回收率试验

2.10样品限量检查

取3批骨痹止痛液，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行限量检查，结果见表2。此3批骨痹止痛液中的乌头碱含量与文献报道[5-9]的临床用药中乌头碱限量检查结果相近。

表2　骨痹止痛液中乌头碱限量检查结果

3　讨　论

制川乌和制草乌是临床常用药，常用于治疗风湿性关节炎、关节痛、腰腿疼、神经痛等[10-11]，但其所含双酯型生物碱毒性剧烈，且治疗量和中毒量相近，主要对神经和心血管系统造成严重伤害，在临床上用之不慎会引起中毒[12-14]。乌头碱是其主要毒性成分，口服乌头碱0.2 mg即可引起中毒。鉴于市场上制川乌和制草乌饮片有较为严重的充伪和掺伪现象，为保证骨痹止痛液的安全有效性，有必要对乌头碱的含量进行限量检查。

根据文献报道[15]，含乌头碱酒剂与水煎剂、其他非酒剂对比，几乎没有水煎等降毒过程，而且乙醇对脂溶性有毒乌头碱的成分提取以及对体内吸收程度和速度均起促进作用，增大其生物利用度和最高血药浓度，更容易引起中毒；因此，本实验通过建立RP-HPLC法测定该制剂中乌头碱的含量，为制定其乌头碱的限量标准提供试验基础，从而保证骨痹止痛液临床用药的安全。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010:36-37.

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[14]凌珊，龚千锋.草乌的研究进展[J].江西中医学院学报，2011，23(3)：90-94.

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(编辑陶珠)

2016-01-28；修回日期：2016-04-08

1001-6910(2016)07-0065-03

R284

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.07.31

李喜香(1968-)，女(汉族)，甘肃秦安人，主任中药师，硕士研究生导师，主要从事中药制剂工艺研究。

甘肃省中医药管理局科研项目(GZK-2012-45)

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