诱骗受体3在类风湿关节炎及系统性红斑狼疮患者血清中的检测及临床意义

王　信， 王　健， 江　超， 李季青， 郭文静， 陈琳洁， 李志军，潘少君

(蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科， 蚌埠　233004；*通讯作者，E-mail：181577518@qq.com)



诱骗受体3在类风湿关节炎及系统性红斑狼疮患者血清中的检测及临床意义

王信， 王健*， 江超， 李季青， 郭文静， 陈琳洁， 李志军，潘少君

(蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科， 蚌埠233004；*通讯作者，E-mail：181577518@qq.com)

摘要：目的检测类风湿关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中诱骗受体3(DcR3)的水平，分析其在RA、SLE中的临床意义。方法收集RA患者血清33例，SLE患者血清35例，健康对照者30名，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中DcR3水平，并分析血清DcR3水平与IFN-γ的相关性，各组均数的比较采用ANOVA检验；相关性分析用Spearman相关性分析。结果RA患者血清DcR3水平(4 630.03±3 182.24)pg/ml显著高于健康对照组[(480.53±150.06)pg/ml，P=0.002]及SLE患者组[(1 068.77±881.86)pg/ml，P=0.011]，RA患者血清DcR3水平与IFN-γ水平呈正相关(rs=0.775，P﹤0.05)。SLE患者血清DcR3水平高于健康对照组，但差异无统计学意义(P=0.167)。结论DcR3在RA患者血清中表达增高，且与血清IFN-γ水平变化呈正相关；DcR3在SLE患者血清中表达增高但不具统计学意义。

关键词：类风湿关节炎；系统性红斑狼疮；诱骗受体3；γ-干扰素

诱骗受体3(decoy receptor 3，DcR3)是一种新近发现的肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor，TNFR)超家庭成员[1]，是一种特殊的细胞凋亡抑制剂，其配体包括：FasL，TL1A，LIGHT。有研究显示，DcR3可以通过竞争性结合FasL，TL1A，LIGHT抑制炎症反应和细胞凋亡[2]，也可通过诱导树突状细胞凋亡、促进单核细胞分化等直接调节免疫细胞的活性[3,4]。有研究表明，在类风湿关节炎和系统性红斑狼疮的血清中DcR3 的表达都有明显上升, 并促进疾病发展[5，6]。本研究通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RA及SLE患者血清中DcR3、IFN-γ的表达，分析RA、SLE血清DcR3水平与IFN-γ水平之间的相关性，探讨DcR3在RA及SLE中表达的临床意义。

1资料与方法

1.1临床资料

RA及SLE患者血清来源于2014-07～2015-10就诊于蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科门诊及住院的RA患者33例及SLE患者35例，RA入选患者均符合2010年美国风湿病学会(ACR)修订的RA分类标准，其中男性13例，女性20例，年龄18-76岁，平均(50±13)岁。SLE患者的入选标准为美国风湿病学会(ACR)1997年修订的SLE分类诊断标准，男性2例，女性33例，年龄2l-45岁，平均(30±6)岁。RA及SLE均排除伴有其他自身免疫性疾病、超敏反应性疾病和肿瘤、移植、感染等免疫相关疾病的患者。

健康对照组来自蚌埠医学院第一附属医院职工体检者，健康对照组的入选标准：肝肾功能、血脂、血常规、尿常规、影像学检查均正常，并排除有自身免疫性疾病、超敏反应性疾病及近期感染史者。其中男性15名，女性15名，年龄23-48岁，平均(36±22)岁。

1.2试剂与仪器

Human DcR3 ELISA Kit(批号：081415 0005)试剂盒、Human IFN-gamma ELISA Kit试剂盒(批号：082815 0131)均购自美国RayBiotech 公司。全自动酶标仪IMarK 购自日本BIO-RAD公司。

1.3研究方法

1.3.1标本采集清晨空腹采集RA、SLE患者和对照组静脉全血2 ml，4 ℃放置自然凝固后1 500 r/min离心10 min，分离血清，分装后置于-20 ℃低温冰箱保存备用。

1.3.2血清DcR3和IFN-γ测定采用ELISA双抗体夹心法，按试剂盒说明书操作。

1.4统计学处理

2结果

2.1RA及SLE患者血清DcR3水平

33例RA患者血清DcR3水平为(4 630.03±3 182.24)pg/ml，显著高于健康对照组[(480.53±150.06)pg/ml，P=0.002]及SLE患者组[(1 068.77±881.86)pg/ml，P=0.011]，差异均有统计学意义； 35例SLE患者血清DcR3水平高于健康对照组，差异无统计学意义(P=0.167，见表1)。

2.2RA及SLE患者血清IFN-γ水平

33例RA患者血清IFN-γ水平为(1 342.21±481.92)pg/ml，显著高于健康对照组[(248.97±62.61)pg/ml，P﹤0.001]及SLE患者组[(425.65±362.07)pg/ml，P﹤0.001]，差异均有统计学意义； 35例SLE患者血清IFN-γ水平高于健康对照组，差异无统计学意义(P=0.411，见表1)。

组别nIFN-γDcR3RA组331342.21±481.92*4630.03±3182.24**SLE组35425.65±362.07*1068.77±881.86**健康对照组30248.97±62.61480.53±150.06

与健康对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.001

2.3RA及SLE患者血清DcR3水平与IFN-γ水平的相关性分析

RA患者血清DcR3水平与IFN-γ水平呈正相关(rs=0.775，P﹤0.05，见图1)。SLE患者血清DcR3水平与IFN-γ水平相比较，两者间无相关性(rs=0.290，P=0.092，见图2)。

图1　RA患者DcR3浓度与IFN-γ浓度相关性散点图Figure 1　Correlation between serum DcR3 and IFN-γ levels in RA patients

图2　SLE患者DcR3浓度与IFN-γ浓度相关性散点图Figure 2　Correlation analysis between serum DcR3 and IFN-γ levels in SLE patients

3讨论

诱骗受体3(decoy receptor 3，DcR3)是近年发现的新型免疫分子，为可溶性肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员，目前已知的DcR3配体主要有：FasL，TL1A，LIGHT。DcR3与上述3种配体的亲和力依次为:TL1A>FasL>LIGHT[7],DcR3可通过竞争性结合LIGHT、FasL和TL1A，抑制活化T淋巴细胞凋亡，或抑制T淋巴细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)，诱导其向Th2细胞(Th2)分化，或直接调节免疫细胞的活性，比如促进单核细胞分化为M2型巨噬细胞和破骨细胞，诱导树突状细胞凋亡等，从而抑制正常功能受体介导的生物学功能[8-10]，与多种疾病的发生和发展等密切相关[11]。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病，可以导致包括外周关节在内的多系统受累，大量研究显示在RA的发病过程中细胞因子是引起滑膜炎症与关节损伤的重要介质，在RA致病中可能起着关键作用。

目前的研究显示,RA患者体内DcR3水平明显升高，并与IFN-γ、IL-4的表达呈正相关。Takahashi等[12]用ELISA的方法检测RA、骨关节炎患者血清及关节液中DcR3的表达情况，结果发现RA患者血清及关节液中DcR3的浓度较骨关节炎组明显升高，但与病情程度未发现有相关性。另有研究人员测定了骨关节炎患者和类风湿关节炎患者滑膜细胞中DcR3的 mRNA和蛋白的表达，结果表明两种患者的滑膜细胞中均有DcR3的表达，且表达量基本一致,并发现将DcR3融合蛋白与滑膜细胞共孵育可以诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡[13,14]。周玉秀等[15]分别使用ELISA试剂盒检测血清DcR3的含量，荧光定量PCR检测DcR3在外周单核细胞中mRNA水平，发现DcR3在类风湿关节炎患者体内会表达增加，而且随着病情的加重表达量会增加。在本实验中，应用ELISA方法检测了DcR3在RA血清中的表达，结果发现RA患者血清DcR3水平较健康人和系统性红斑狼疮患者显著升高，且与血清IFN-γ水平显著相关，本结果与周玉秀等[15]及孙可歆等[16]的研究结果相符。

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种常见而复杂的自身免疫性疾病(AID)，大量资料表明，SLE患者体内T淋巴细胞识别自身抗原，参与疾病发生发展的各个环节。Otsuki等[17]首先在 SLE 患者的外周血单个核细胞(PBMC)中发现DcR3 mRNA高表达。2007年Lee等[18]研究首次证明在系统性红斑狼疮患者血清中DcR3浓度增加, 发现DcR3在SLE的发病机制中的作用可能通过增强T细胞应答,减少已激活T细胞凋亡。2008年Han等[19]研究发现淋巴细胞起源的DcR3可以导致狼疮小鼠的发病，提示血清DcR3检测可以作为系统性红斑狼疮的辅助诊断指标。但现有的研究中，SLE患者血清DcR3水平有异议。本研究应用ELISA方法检测DcR3在SLE血清中的表达，发现SLE患者血清DcR3水平较健康人升高(P>0.05)，但明显低于RA血清DcR3水平(P﹤0.05)，且与血清IFN-γ水平无相关性。与Chokdeemeeboon等[20]研究的结果相符，但与国内某些研究[21，22]结果不一致。Chokdeemeeboon等[20]研究证明DcR3水平与患者的病情活动度相关，SLEDAI≥10 的患者组血清中DcR3水平明显高于病情不活跃组(SLEDAI ≤10)),该研究中有30例标本检测不到DcR3，其中有29例来自病情不活跃组[20]。本研究中SLE患者血清标本DcR3水平普遍较低，可能与患者病情活动度不高有关，另一方面，DcR3参与SLE发病的机制可能是多方面的。它可通过抑制LIGHT功能、调控免疫细胞数目和前述的凋亡调控来影响SLE的发病，其具体机制有待进一步深入探讨。

综上所述，RA患者血清中DcR 3水平显著高于正常人群，且与IFN-γ的表达呈正相关，DcR3在RA发病中的作用为其发病机制提供了有价值线索，可对疾病的进一步治疗提供依据。SLE患者血清中DcR 3水平虽也高于正常人群，但差异无统计学意义，应进一步研究其在SLE疾病的发生发展中的作用。

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基金项目：蚌埠医学院校自然科学资助项目(BYKY1460)

作者简介：王信，女，1986-08生，硕士，住院医师，E-mail：273084414@qq.com

收稿日期：2016-04-15

中图分类号：R593.241

文献标志码：A

文章编号：1007-6611(2016)07-0611-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.07.007

Clinical significance of detection of serum decoy receptor3 in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus

WANG Xin, WANG Jian*, JIANG Chao,LI Jiqing, GUO Wenjing, CHEN Linjie, LI Zhijun,PAN Shaojun

(DepartmentofRheumatologyandImmunology,FirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu233004,China；*Correspondingauthor,E-mail：181577518@qq.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate serum decoy receptor 3(DcR3) concentration in patients with rheumatoid arthritis(RA) and systemic lupus erythematosus(SLE)，and analyze its clinical significance．MethodsThe serum from 33 RA patients，34 systemic lupus erythematosus(SLE) patients and 30 healthy donators were selected．The serum DcR3 concentration was detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)．The correlation between serum DcR3 level and interferon gamma(IFN-γ) with RA and SLE were investigated．ANOVA test and Spearman correlation analysis were used for statistical analysis with software SPSS 13.0. ResultsSerum DcR3 level in RA patients[(4 630.03±3 182.24)pg/ml] was significantly higher than those of the healthy donators[(480.53±150.06)pg/ml,P=0.002] and SLE patients [(1 068.77±881.86)pg/ml,P=0.011]. Serum DcR3 level was positively correlated with IFN-gamma level(rs=0.775,P﹤0.05). Serum DcR3 level in SLE patients was higher than those of healthy donators, but there was no statistically significant difference(P=0.167).ConclusionDcR3 expression increases in serum of RA patients, and is positively correlated with the serum level of interferon-gamma. The increase of serum DcR3 levels in SLE patients has no statistical significance.

Key words:rheumatoid arthritis；systemic lupus erythematosus；decoy receptor 3;interferon-γ