鹿衔草对去卵巢大鼠骨形成的促进作用

陈　　翔，段晓敏，林　　煜，黄云梅，黄美雅，贾晓康，林燕萍（.福建中医药大学，福建 福州 350；.福州市第二医院，福建 福州 350007）

·实验研究·

鹿衔草对去卵巢大鼠骨形成的促进作用

陈翔1，段晓敏1，林煜2，黄云梅1，黄美雅1，贾晓康1，林燕萍1
（1.福建中医药大学，福建 福州 350122；2.福州市第二医院，福建 福州 350007）

目的观察鹿衔草对去卵巢大鼠骨形成的作用。方法将3月龄SD雌性大鼠通过手术切除双侧卵巢，随机分为鹿衔草高、中、低剂量组、生理盐水组、骨疏康对照组，另设假手术组，分别进行干预，术后4、8、12周分批处死，行骨密度、股骨干骺端骨小梁面积、雌二醇、骨钙素水平检测，Bradford法检测骨组织中骨碱性磷酸酶蛋白含量。结果各用药组可增加骨密度、骨小梁面积百分比，提高血清中雌二醇、骨钙素水平，增加骨碱性磷酸酶的表达。结论鹿衔草对去卵巢大鼠的骨形成有促进作用。

鹿衔草；绝经后骨质疏松症；大鼠模型；骨碱性磷酸酶；骨钙素

绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis，PMOP）是中老年妇女常见的一种代谢性疾病。中医认为PMOP属“骨痿”、“骨痹”范畴，病因主要为“肾虚”。因此，针对PMOP中医常以补肾立法施治。在骨伤方药中，鹿衔草作为补肾健骨强筋的药物被广泛应用，本课题组前期研究［1］结果显示：鹿衔草能明显促进体外成骨细胞的增殖和分化。为进一步明确鹿衔草对绝经后骨质疏松症的防治机理，我们通过在体动物实验，观察鹿衔草对去卵巢大鼠骨形成的促进作用。

1材料和方法

1.1实验药物鹿衔草颗粒（培力药业有限公司，批号：A100099-02）；骨疏康颗粒（辽宁康辰药业有限公司，批号：101109）。

1.2实验动物造模、分组选3月龄健康清洁级雌性SD大鼠180只［上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证号：SCXK（沪）2010-0002，编号：0021099］，体质量（200±20）g。将大鼠随机分为卵巢切除组150只、假手术组30只。卵巢切除组用2%戊巴比妥钠麻醉，取腹部正中切口，结扎切除卵巢，术后肌注青霉素预防感染。假手术组除不结扎摘除双侧卵巢外，其它同卵巢切除组。术后将卵巢切除组150只大鼠随机分为鹿衔草高、中、低剂量组、骨疏康颗粒组、生理盐水组，每组30只。

1.3药物干预大鼠于手术后第3天开始干预，鹿衔草低、中、高剂量组分别给鹿衔草颗粒0.125 g/ （kg/d）、0.25 g/（kg/d）、0.50 g/（kg/d），骨疏康组给骨疏康颗粒1.5 g/（kg/d），所有颗粒药物以2 mL生理盐水溶解灌服，生理盐水组、假手术组大鼠每只每日灌服生理盐水2 mL/只，每日1次。实验动物在室温（23±2）℃、湿度70%条件下喂养，自由摄食、饮水、活动。

1.4实验动物取材卵巢切除组、假手术组于术后4周、8周、12周3个批次取材，用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，检测大鼠全身骨密度。腹主动脉取血，离心取血清保存待测；取第3腰椎和右侧股骨保存待测。

1.5标本检测用Expert双能X线骨密度仪（美国Lunar公司）检测大鼠全身骨密度。用ELisa法检测血清中雌二醇（E2）、骨钙素（BGP），试剂盒来自美国R&D公司。制备骨匀浆，Bradford法检测骨碱性磷酸酶（BALP）含量。HE染色制备骨组织病理切片，用全自动真彩色图像分析总组织面积（T.Ar）、骨小梁面积 （Tb.Ar），计算骨小梁面积百分率（Tb. Ar%）并进行图像观察。

2结果

实验结果见表1～表5。

3讨论

3.1本研究使用的去势雌性大鼠动物模型，因其在短期内显著降低雌激素水平，很好的模拟绝经后骨质疏松症骨代谢的特点，被广泛用于绝经后骨质疏松症研究［2］。BGP和BALP作为反映骨形成的特异性指标，已广泛用于实验研究。其中BGP是由成熟的成骨细胞合成分泌，其功能主要与骨转换有关。目前认为，当骨形成与骨吸收偶联时，BGP可反映骨转换情况。当骨形成与骨吸收解偶联时，BGP可特异性地反映骨形成情况［3］。在评价药物治疗骨质疏松症的疗效上，BGP水平上升，提示药物刺激了骨的形成，BGP水平下降提示药物减缓了骨的吸收［4］。研究［5-8］显示BGP的表达在骨质疏松模型中有明显升高。另外，BALP是碱性磷酸酶（ALP）同工

表1　6组大鼠股骨的骨密度检测结果（±s）gms/cm2

表1　6组大鼠股骨的骨密度检测结果（±s）gms/cm2

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与生理盐水组比较，2）P＜0.05。

组别假手术组生理盐水组骨疏康组鹿衔草高剂量组鹿衔草中剂量组鹿衔草低剂量组大鼠/只8 9 8 9 9 9手术后4周0.147±0.005 0.148±0.005 0.147±0.007 0.147±0.007 0.149±0.007 0.144±0.005手术后8周0.164±0.011 0.150±0.0031）0.160±0.0072）0.160±0.0052）0.159±0.0082）0.159±0.0052）手术后12周0.166±0.007 0.156±0.0051）0.163±0.0052）0.163±0.0072）0.163±0.0072）0.164±0.0112）

表2　6组大鼠血清E2水平（±s）ng/L

表2　6组大鼠血清E2水平（±s）ng/L

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与生理盐水组比较，2）P＜0.05。

组别假手术组生理盐水组骨疏康组鹿衔草高剂量组鹿衔草中剂量组鹿衔草低剂量组大鼠/只8 9 8 9 9 9手术后4周64.26±5.00 39.66±5.351）52.95±6.881）2）52.54±6.031）2）52.89±8.181）2）52.49±9.871）2）手术后8周81.78±3.80 50.10±5.741）71.01±5.691）2）69.26±6.101）2）69.30±7.161）2）69.24±5.231）2）手术后12周80.26±4.39 47.38±6.181）70.38±8.101）2）65.78±5.801）2）66.09±8.781）2）68.73±10.581）2）

表3　6组大鼠血清BGP检测结果（±s）ng/L

表3　6组大鼠血清BGP检测结果（±s）ng/L

注：与假手术组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.05。

组别假手术组生理盐水组骨疏康组鹿衔草高剂量组鹿衔草中剂量组鹿衔草低剂量组大鼠/只8 9 8 9 9 9手术后4周483.00±25.84 572.63±75.021）570.58±36.471）585.81±54.652）619.44±69.992）558.22±76.831）手术后8周784.04±15.27 867.53±59.03 832.10±97.30 812.12±37.55 810.37±69.41 831.62±66.84手术后12周695.20±30.71 834.22±102.852）820.96±58.741）844.82±51.762）776.41±77.42 778.17±88.02

表4　6组大鼠骨小梁面积百分比变化（±s）

表4　6组大鼠骨小梁面积百分比变化（±s）

注：与假手术组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与生理盐水组比较，3）P＜0.01，4）P＜0.05。

组别假手术组生理盐水组骨疏康组鹿衔草高剂量组鹿衔草中剂量组鹿衔草低剂量组大鼠/只8 9 8 9 9 9手术后4周0.5746±0.029 0.4687±0.0812）0.5281±0.081 0.5194±0.035 0.5383±0.0383）0.5086±0.0332）手术后8周0.6052±0.023 0.4378±0.0402）0.5010±0.0612）3）0.5154±0.0672）3）0.5078±0.0562）4）0.5298±0.0412）3）手术后12周0.5510±0.023 0.4208±0.0532）0.4790±0.0611）4）0.4843±0.0631）4）0.5089±0.0991）3）0.4793±0.0432）4）

表5　6组大鼠BALP检测结果（±s）U/gprot

表5　6组大鼠BALP检测结果（±s）U/gprot

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与生理盐水组比较，2）P＜0.05。

组别假手术组生理盐水组骨疏康组鹿衔草高剂量组鹿衔草中剂量组鹿衔草低剂量组大鼠/只8 9 8 9 9 9手术后4周229.14±23.61 240.57±35.18 207.18±15.77 204.16±42.54 204.66±26.56 205.79±38.38手术后8周187.78±20.74 237.84±29.711）259.45±49.201）250.96±48.031）260.22±53.541）251.84±55.111）手术后12周199.35±34.85 238.03±33.641）234.52±34.111）272.29±45.721）2）270.05±33.321）2）263.07±18.971）

酶之一，由成骨细胞分泌，能促进骨的形成。研究表明［9-12］BALP在骨质疏松发病活动期有显著增高，是成骨细胞活性增加的重要标志，其定量测定和动态观察可为骨质疏松症的早期诊断和疗效判定提供有效依据。同时发现BALP和BGP在去卵巢大鼠骨质疏松模型中呈显著表达，与骨质疏松发生程度呈正相关［13］。

3.2研究显示，雌性大鼠在切除双侧卵巢后，与假手术组比较，生理盐水组的E2显著降低，而同期血清BGP水平及BALP活性明显升高，可能由于卵巢摘除后引起大鼠体内雌性激素减少，对破骨细胞的抑制作用减弱，破骨细胞活性增强，骨吸收亢进，进而出现代偿性的骨形成增强［14］。由于骨吸收大于骨形成，引起骨小梁含量降低，导致生理盐水组骨小梁面积百分比和BMD的下降。各用药组的E2水平低于同期的假手术组，高于同期的生理盐水组。表明鹿衔草高中低剂量组能有效的提升机体E2水平。除12周鹿衔草高剂量组外，8周、12周各用药组血清BGP浓度均高于同期假手术组，低于同期生理盐水组。8周、12周BALP活性高于同期假手术组，推测鹿衔草中、低剂量组可以降低骨转化，促进骨形成。鹿衔草高剂量组能更有效提高成骨细胞活性，刺激骨形成。因此，鹿衔草高、中、低各剂量组的骨形成速率大于骨吸收，使得骨小梁面积百分比和BMD的提高。

3.3研究表明鹿衔草治疗绝经后骨质疏松症有良好的疗效，其机理是通过促进骨形成，改善骨代谢。

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R285.5

B

1000-338X（2016）03-0012-02

2016-03-29

国家自然科学基金资助课题（81574003），福建省科技厅引导性项目（2015Y0069）

陈翔（1991—），男，2014级中医骨伤专业硕士研究生，主要从事骨伤基础研究。

林燕萍（1963—），女，教授。E-mail：lyp66@126.com