埃索美拉唑钠中间体清洁验证残留限度检查方法学研究

刘　静　刘秀朋（德州德药制药有限公司　德州　253000）

药品质量及检验

埃索美拉唑钠中间体清洁验证残留限度检查方法学研究

刘静刘秀朋（德州德药制药有限公司德州253000）

目的：埃索美拉唑钠合成中间体清洁验证残留限度检查方法学研究。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm× 150mm，5μm；以乙腈-磷酸盐缓冲液（pH7.6）（50∶50）为流动相；流速1.0mL·min-1；检测波长302nm；进样量10μL。结果：中间体的线性范围为0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1；定量限和检出限分别为0.24ng和0.08ng；平均回收率为89.29%，RSD为1.8%。结论：本方法简便、快速、准确、精密度高、回收率好，可用于中间体的清洁验证。

中间体 清洁验证 方法学研究

为防止原料药生产过程中物料之间的交叉污染，验证按清洗程序清洗后，检测化学残留量是否在规定限度内，以确认清洗效果是否达到不影响产品质量要求，防止可能发生的改变药品质量、使其安全性、纯度达不到规定要求的事故或污染。

中间体（硫醚）制备中清洁限度的制定，由于中间体没有日治疗量的安全性数据，基于对其毒性数据的评估，按照《药品GMP指南-原料药》（2011年版）的有关规定，按十万分之一（10ppm）作为可接受标准。

设清洁后产品的生产批量为B（Kg），因残留物浓度最高为10×10-6，即10mg/kg，则残留物总量最大为10B（mg），设备总内表面积为SA（cm2），则设备内表面残留物允许限度按下式计算

式中：L为内表面残留物允许限度（mg/100cm2）；B为清洁后产品的生产批量（kg）；SA为设备的总内表面积（cm2）。

以埃索美拉唑钠合成为例计算清洁验证中中间体的允许残留量。

1仪器与试药

1.1仪器：日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；紫外检测器SPD-10Avp；PHS-3C酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；AL104电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

1.2试药：中间体对照品（合肥拓锐生物科技有限公司，批号20130319），中间体（德州德药制药有限公司，批号11140601、11140602、11140603），乙腈（Merk，批号1726330 406），磷酸二氢钠（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20140320），磷酸氢二钠（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20140221）。

2方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm× 150mm，5μm，以乙腈-磷酸盐缓冲液［pH7.6（0.0052mol/L磷酸二氢钠和0.032mol/L磷酸氢二钠）］（50∶50）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长为302nm，进样量为10μL，溶剂为流动相。

2.2专属性试验：精密量取空白溶剂及空白溶剂酸、碱、高温、氧化、光照破坏溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白溶剂及空白溶剂破坏试验不干扰主成分的测定。各强制降解条件下，主峰与各降解产物峰间均分离良好，证明专属性良好。

2.3线性试验：精密称取本品对照品适量，置10mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，再定量稀释制成0.06μg·mL-1、0.3μg·mL-1、0.6μg·mL-1、0.9μg·mL-1、1.5μg·mL-1的系列溶液。精密量取上述溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（c）为横坐标，进行线性回归，线性回归方程为y=35247x-655.76，r=0.9999，结果表明中间体在测定浓度范围内（0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1）与峰面积呈良好的线性关系。

2.4重复性试验：取线性试验中0.6μg·mL-1的溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样6次，RSD值为0.2%。结果表明，本方法重复性良好。

2.5定量限、检出限试验：取线性试验中0.06μg·mL-1溶液，用溶剂逐步稀释，定量限按信噪比约为10∶1计算为0.24ng，检出限按信噪比约为3∶1计算为0.075ng。

2.6回收率试验：供试品溶液制备：取本品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成约30μg· mL-1的溶液，取1mL6份，均匀涂于6个10cm×10cm不锈钢板表面，40℃干燥，冷却至室温。用一支蘸有无水乙醇的棉签平稳而缓慢地水平擦拭涂抹药液的不锈钢板表面（100cm2），擦拭过程应覆盖整个表面，另取一支同样蘸有无水乙醇的棉签与前次擦拭方向垂直进行擦拭同一不锈钢板面。将擦拭取样的棉签置于100mL的三角瓶中，用溶剂三次转移至50mL容量瓶中，并用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液，平行制备6个供试品进行测定。

对照品溶液制备：取本品对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成0.6μg·mL-1的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取上述溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按测得量与加入量的比值计算回收率，每块板的取样回收率应大于75%。结果如表1。结果表明此方法测定本品的清洁度准确、可靠。

表1回收率测定结果

2.7稳定性试验：取本品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成1.0mg·mL-1溶液，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液于室温下放置，分别于0h、5h、8h、24h、28h、34h、37h处精密量取各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果显示：供试品溶液室温放置37h内杂质含量变化不大，未出现新杂质，样品溶液在室温37h内稳定。

2.8精密度试验：供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成1.0mg·mL-1溶液，摇匀，即得。两组不同分析人员分别进行实验，各制备6份。

精密量取上述溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：12份供试品溶液中，最大单个杂质、总杂含量的RSD均小于20%，精密度良好。

2.9耐用性试验：分别考察流速为（1.0±0.2）mL·min-1、波长为（302±）5nm、柱温为（25±5）℃条件下的耐用性。

供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成1.0mg·mL-1溶液，摇匀，即得。

精密量取上述溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：经验证，色谱条件微小变化后，供试品溶液主峰与相邻杂质峰的分离度均大于2.5，符合要求，样品的检测结果仍符合要求，说明本方法耐用性良好。

2.10清洁验证结果

表2清洁验证结果

3讨论

经过方法学验证，本方法简便、快速、准确、精密度高、回收率好，可用于中间体的清洁验证。

The methodology of cleaning validation for Esomeprazole sodium mediate limite determination

Liu Jing Liu Xiupeng（Dezhou Deyao Pharmaceutical Co.，Ltd，Dezhou 25300，China）

Objective：the methodology of cleaning validation for esomeprazole sodium mediate limite determination.Methods：The ostadecylsilane column（Agilent ZORBAX SB-C18，4.6mm×150mm，5μm）was used，the mobile phase was acetonitrile-phosphate buffered solution（pH 7.6）（50∶50），theflow ratewas 1.0mL·min-1，the detection wavelength was 302nm，the injection volume was 10μL. Results：The linear range for intermediate was 0.06μg·mL-1～1.5μg·mL-1.The limit of quantitation and the detection limit were 0.24ng and 0.08ng.The average recovery rate was 89.29%with RSD1.8%.Conclusion：This is a convenient，rapid，accurate，high precision and good recovery method，which can be used for the cleaning validation of intermediate

Intermediate Cleaning validation Methodology study

R927.2

A

1672-8351（2016）08-0001-02