M i rcoR N A-195在胃癌患者血清及组织中的表达水平及意义

孙彦珍，李珍，袁征

（河南省南阳市中心医院 病理科，河南 南阳 473000）

M i rcoR N A-195在胃癌患者血清及组织中的表达水平及意义

孙彦珍，李珍，袁征

（河南省南阳市中心医院 病理科，河南 南阳 473000）

目的研究m i croR N A-195（m i R-195）在患者血清及胃癌组织中的表达水平，并探讨其表达水平与胃癌临床病理的关系。方法选取该院62例胃癌患者为研究组，同期来该院体检的36例健康人群为对照组，采用R T-PC R法检测两组人群血清中以及胃癌组织及对应癌旁组织中的m i R-195的表达水平，并探讨m i R-195与临床病理参数的相互关系。结果研究组血清中m i R-195的表达水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。m i R-195在胃癌组织中的表达水平亦显著低于对应的癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；相关分析结果显示，m i R-195的低表达与胃癌浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移相关，差异有统计学意义（P＜0.05），而与肿瘤部位均无相关（P＞0.05）。结论m i R-195在胃癌患者中的低表达可能对胃癌的发生发展有一定的促进作用。

m i croR N A-195；胃癌；分期

胃癌是常见的肿瘤，据统计，胃癌发病率位于全球恶性肿瘤的第4位，且死亡率极高，仅次于肺癌［1］。胃癌的发生、发展是一个多因素、多阶段和多步骤的过程，是遗传因素、环境因素和生物因素共同作用的结果。然而目前对于胃癌的具体机制尚未完全明了。M i rco RNA-195（m i R-195）是近年来新发现的一类m i croRNA，有研究已经发现，m i R-195在骨肉瘤、结直肠癌等肿瘤中表达异常，参与肿瘤细胞的凋亡调节及肿瘤的形成［2-3］。然而到目前为止，m i RNA-195在胃癌组织中的表达水平研究以及其与胃癌患者临床病理特征之间的关系研究尚无报道。因此，本研究通过检测m i RNA-195在胃癌患者血清及组织中的表达，探讨m i RNA-195与胃癌TNM分期的关系，从而为胃癌的诊治及预后提供相关的实验依据。

1　资料与方法

1.1临床资料

62例肿瘤组织来源于2011年11月-2014年8月在本院行胃癌手术的标本，同时取癌旁组织。其中，男29例，女33例；年龄52～77岁，平均（65.2± 6.5）岁；术前未做过任何放疗及化疗。对照组为同期健康体检者36例。其中，男15例，女21例；年龄64～78岁，平均（65.4±9.3）岁。

1.2主要试剂

采用Tri zol试剂盒（上海英骏公司）提取组织及血清中的RNA，采用美国Fem ant es公司cDNA逆转录试剂盒对RNA进行逆转录，PCR试剂盒购于南京生兴生化科技有限公司。

1.3组织以及血浆标本总R N A提取及逆转录反应

62例患者于手术中取胃癌及对应肿瘤边缘2～6 cm处癌旁组织进行实验分析。此外，清晨空腹时抽取各实验对象外周静脉血5 m l，加入EDTA抗凝剂（上海新睿），2 h内于4℃、10 000×g离心10 m i n，离心后提取上层血清备用。取约100 m g组织或150μl血清，加入1 m l Tri zol充分匀浆后，按照说明书的要求抽提总RNA，所得RNA溶于20μl DEPC处理水。提取的总RNA经紫外分光光度计定量。进一步采用cDNA逆转录试剂盒对所得RNA逆转录，并将其置于-20℃冰箱保存备用。PCR反应条件：95℃变性20 s，然后60℃ 20 s，70℃ 1 s，50个循环。采用ABI公司7900型Real-Ti m e PCR仪进行PCR分析，最终结果采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析［4］。m i R-195引物序列为5'-CGTAGCAGCACAGA AAT-3'以及5'-GTGCAGGGTCCGGGT-3'［5］。PCR对照采用U6内参：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'以及5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，均通过正态性检验。两组间比较用两独立样本t检验，多组间比较为单因素方差分析。用Spearm an法分析m i R-195 m RNA表达水平与胃癌TNM分级的关系，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1胃癌患者血清中m i R-195 m R N A水平降低

与正常人比较，m i R-195在胃癌患者血清中的m RNA表达水平降低，差异有统计学意义［（1.21± 0.23）vs（0.32±0.11），t=25.86，P＜0.05］。见图1。

2.2胃癌组织及对应癌旁m i R-195 m R N A的表达水平

与癌旁组织比较，m i R-195在胃癌组织中的表达水平降低，差异有统计学意义 ［（1.19±0.21）vs （0.41±0.27），t=14.90，P＜0.05］（见图2），具体数据见图3。

2.3胃癌组织m i R-195表达水平与胃癌临床病理参数的关系

结果显示，胃癌组织中m i R-195 m RNA在Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在高分化组织中的表达水平低于低分化组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；m i R-195 m RNA表达随着浸润程度加重而降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在有淋巴结转移组织中的表达水平低于无转移的组织（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在不同部位的表达无差异（P＞0.05）。见表1。

图1　胃癌患者血清中m i R-195m R N A的表达水平

图2　胃癌及对应癌旁组织中m i R-195 m R N A的表达水平

图3　胃癌及对应癌旁组织中m i R-195 m R N A的表达水平

表1　m i R-195 m R N A表达与胃癌的临床病理特征的关系

2.4胃癌患者血清及癌组织m i R-195表达水平与胃癌临床病理分级的相关性

进一步Spearm an相关分析结果显示，血清中m i R-195 m RNA表达水平与胃癌TNM分期程度负相关（r=0.554，P＜0.05）。见表2。

表2　m i R-195 m R N A表达水平与胃癌的TN M分级的关系 （±s）

表2　m i R-195 m R N A表达水平与胃癌的TN M分级的关系 （±s）

注：与胃癌TNM各级间比较，1）r=0.501，P＜0.05；2）r=0.554，P＜0.05

T N M分级胃癌组织Ⅰ1 3 　0 . 5 1 ± 0 . 2 1 　0 . 4 9 ± 0 . 2 3 Ⅱ1 7 　0 . 4 6 ± 0 . 1 9 　0 . 4 1 ± 0 . 4 6 Ⅲ1 4 　0 . 3 5 ± 0 . 1 8 　0 . 3 6 ± 0 . 4 3 Ⅳ1 8 　0 . 2 9 ± 0 . 1 81）　0 . 2 7 ± 0 . 5 52）例数胃癌血清

3　讨论

m i RNA是一类全长为19～25 nt的单链小分子RNA，广泛存在于组织、血清、血浆或其他体液中。该分子本身不具有蛋白编码的功能，但对编码蛋白基因的信使RNA（m RNA）有着重要调控作用。越来越多的研究表明，m i RNA的表达异常与肿瘤进展存在重要的关联［6-10］。研究认为，m i R-195在多种肿瘤组织中表达异常，参与肿瘤细胞的凋亡调节及肿瘤的形成［2-3］。Zhao等［11］采用RT-PCR技术检测21例乳腺癌患者血清中m i R-195表达水平明显低于正常人，且认为m i R-195的表达水平可以作为乳腺癌的特异性诊断分子。此外，在食管癌组织中，m i R-195水平被抑制［12］。到目前为止，胃癌中m i R-195的表达水平及其对胃癌可能存在着的生理功能还未知。

本研究结果显示，胃癌组织中m i R-195表达水平低于癌旁组织，从而提示m i R-195发挥抑癌基因的重要作用。本研究还发现，胃癌患者血清中m i R-195表达水平低于正常人，进一步证实m i R-195在胃癌发生、发展中可能发挥抑癌功能。进一步分析胃癌组织m i R-195表达水平与胃癌临床病理特征的关系，发现胃癌组织中m i R-195 m RNA在Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期组织；m i R-195 m RNA在高分化胃癌组织中的表达水平低于低分化组织，说明胃癌恶性程度越严重，m i R-195 m RNA水平越低，提示m i R-195可能参与胃癌的发生、发展；此外，笔者还发现，m i R-195 m RNA表达随着浸润程度加重而降低，m i R-195 m RNA在有淋巴结转移组织中的表达水平低于无转移的组织。以上结果均说明m i R-195的低表达对胃癌的发生、发展有着一定的促进作用，进一步提示了m i R-195在胃癌组织中发挥重要的抑癌功能，

通过相关分析进一步发现，m i R-195在胃癌组织及血清中的表达随着胃癌TNM分级增加而降低，呈现负相关，表明m i R-195在胃癌的诊断、分级以及临床预后的评价中可能起着潜在的重要作用。Deng等［13］研究发现，使用m i R-195的模拟物能够显著抑制胃癌细胞的生长，提示m i R-195很有可能通过影响胃癌细胞的生长来参与肿瘤的进展，研究还发现，m i R-195通过参与细胞周期蛋白D1和E1的作用以抑制在人脑胶质瘤细胞增殖［14］，进而说明m i R-195还可能通过影响癌细胞的增殖参与胃癌的进程。

综上所述，m i R-195的低表达在胃癌的发生、发展中起着重要的作用，可能通过影响胃癌细胞的增殖及生长来实现的。临床中，m i R-195的检测对胃癌患者的治疗以及预后具有一定的指导意义。

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（申海菊编辑）

Expression of mircoRNA-195 in serum and tissues of patients with gastric cancer and its significance

Yan-zhen Sun，Zhen Li，Zheng Yuan
（Department of Pathology，Nanyang Central Hospital of Henan，Nanyang，Henan 473000，China）

Objective To study the expression of mircoRNA-195（miR-195）in serum and tissues of patients with gastric cancer，and to discuss its correlation with clinical pathology of gastric cancer.Methods Sixty-two patients with gastric cancer in our hospital were selected as research group，and 36 healthy people who were accepted for physical examination in our hospital in the same period as control group.The expression level of miR-195 in serum，gastric cancer tissue and corresponding para-carcinoma tissue of the two groups was detected by real-time PCR；and the correlations between the expression level of miR-195 and clinicopathological parameters were discussed.Results The expression level of miR-195 in serum of the research group was significantly lower than that of the control group（P＜0.05）.The expression level of miR-195 in the gastric cancer tissue was significantly lower than that of the corresponding para-carcinoma tissue （P＜0.05）.Correlation analysis showed that the low expression level of miR-195 was significantly correlated with the invasion depth，differentiation degree，clinical stages and lymphatic metastasis of gastric cancer（P＜0.05），but it had no significant correlation with tumor location（P＞0.05）.Conclusions The low expression level of miR-195 has certain effect on promoting the occurrence and development of gastric cancer.

microRNA-195；gastric cancer；stage

R 735.2

A

1005-8982（2016）05-0059-04

10.3969/j.i s s n.1005-8982.2016.05.012

2015-09-16