羌归膝舒丸治疗膝骨关节炎的效果及相关机制

王强，王东军，田国峰，刘志强，张立波，崔斌

(大庆龙南医院 骨科，黑龙江 大庆 163000)

羌归膝舒丸治疗膝骨关节炎的效果及相关机制

王强Δ，王东军，田国峰，刘志强，张立波，崔斌

(大庆龙南医院 骨科，黑龙江 大庆 163000)

目的 研究羌归膝舒丸治疗膝骨关节炎(knee Osteoarthritis，KOA)的效果及其对循环血miR和炎性因子指标的影响。方法 选取2014年10月～2015年10月大庆龙南医院骨科收治的KOA患者50例，按照随机数字表法分为观察组和对照组，各25例。对照组采用双醋瑞因胶囊治疗，观察组给予羌归膝舒丸治疗，比较2组患者WOMAC评分，临床疗效以及治疗前后循环血miR、炎性因子的变化。结果 2组治疗前WOMAC评分无差异；2组治疗后疼痛、关节僵硬、日常活动以及综合评分均有所降低(P<0.05)，且观察组下降程度低于对照组(P<0.05)；2组治疗前血miR-146a、miR-140、miR-21、IL-6、IL-1β、TNF-α含量无明显差异，治疗后2组miR-21、IL-6、IL-1β、TNF-α均低于治疗前(P<0.05)，miR-140、miR-146a均高于治疗前(P<0.05)，且观察组上述指标与对照组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 羌归膝舒丸治疗KOA效果显著，其作用机制可能是通过调控miR以及炎性因子来实现的。

羌归膝舒丸；关节炎；炎性因子；膝骨；双醋瑞因胶囊

膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是退行性膝骨关节病，典型特征为膝关节结构破坏、软骨变性及不同程度的骨质增生，病变呈慢性进行性进展。临床上KOA患者常以膝关节疼痛、僵硬以及活动受限就诊，患病率呈上升趋势。目前KOA的发病原因仍不明确，研究认为炎性因子介导及非编码小RNA(miR)的转录调控在KOA发病中发挥重要的作用。传统中药制剂在治疗KOA方面具有一定的临床疗效，羌归膝舒丸是由传统中药经科学组方提取的复方制剂，本研究探讨羌归膝舒丸治疗KOA患者的效果，并从miR转录及炎性因子水平探讨其作用机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年10月～2015年10月大庆龙南医院骨科收治的KOA患者50例，按照随机数字表法将患者分为观察组与对照组，各25例。其中对照组男13例，女12例；年龄40～65岁，平均(49.3±5.3)岁；病程1.5～10年，平均(5.2±1.4)年；Kellgren分级I级10例，Ⅱ级15例。观察组男12例，女13例；年龄41～62岁，平均(48.2±5.5)岁；病程1～10年，平均(5.5±1.2)年；Kellgren分级I级12例，Ⅱ级13例。2组患者在性别、年龄、病程、Kellgren分级方面差异均无统计学意义。患者自愿参与研究，并签署知情同意书，本研究经本院医学伦理委员会批准同意。

纳入标准：①符合《骨关节炎诊治指南》2007中关于膝骨关节炎的诊断标准[1]；②Kellgren分级为I级或者Ⅱ级。排除标准[2]：①近期服用过影响本次研究的其他相关药物患者；②妊娠或哺乳期妇女；③过敏体质；④合并有重要脏器如心、肝、脑等功能障碍；⑤无法按时用药者。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：2组患者均在指导下进行饮食调节与功能锻炼，对照组给予口服双醋瑞固胶囊(昆明积大制药有限公司，国药准字J20100150)，每次50 mg，2次/d；观察组给予口服羌归膝舒丸(组成成分包括羌活、独活、牛膝、血竭、当归等，河南省洛正制药厂，豫药制字Z04030006)，每次6g，2次/d。2组患者治疗1个月为1疗程，共治疗3个疗程。

1.2.2 评价指标

① WOMAC评分 WOMAC量表评分由麦克马斯特大学编制[3]，共24个问题，涵盖疼痛、关节僵硬、日常活动3个项目，分0～4分4级评分，得分越高，临床症状越严重。

② 疗效判定标准 疗效评价标准参照有关文献[4]制定如下：临床控制：患者关节疼痛等临床症状消失，关节活动不受限，WOMAC评分降低≥95%，X线检查无异常；显效：患者关节疼痛等临床症状显著改善，关节活动不受限，WOMAC评分降低≥70%，X线检查明显改善；缓解：患者关节疼痛等临床缓解，关节活动略受限，WOMAC评分降低≥30%，X线检查略有改善；无效：患者关节疼痛及活动无缓解或加重，WOMAC评分降低<30%，X线检查无变化。临床有效率=(临床控制+显效)/总样本数×100%。

③ 血miR和相关炎性因子的检测 采用RT-PCR法检测miR-146a、miR-21、miR-140的含量，引物设计合成以及试剂购自北京三博远志生物技术有限公司；ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，试剂购自美国Sigma公司。

2 结果

2.1 2组患者治疗前后WOMAC评分比较 2组治疗前WOMAC评分无差异；治疗后，2组疼痛、关节僵硬、日常活动以及综合评分均有所降低(P<0.05)，观察组下降程度低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 治疗前后2组患者WOMAC评分比较

*P<0.05，与治疗前比较，compared with pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 2组患者临床疗效及不良反应比较 治疗后，观察组的临床有效率高于对照组(P<0.05)。2组均未发生明显的不良反应，耐受良好。见表2。

表2 2组临床有效率比较(n，%)

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.3 2组患者治疗前后血miR和炎性因子比较 治疗前，2组血miR-146a、miR-21、miR-140、IL-6、IL-1β、TNF-α含量无明显差异，治疗后，2组IL-6、IL-1β、TNF-α、miR-21均低于治疗前(P<0.05)，miR-140、miR-146a均高于治疗前(P<0.05)，且观察组上述指标与对照组相比，差异显著(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者治疗前后循环血miR及炎性因子含量比较

*P<0.05，与治疗前比较，compared with pre-treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

3 讨论

流行病学研究显示[5]，KOA患病率在老年人群中约为60%，随着年龄的增加，患病率也随之升高，KOA不仅患病率高，且致残率高，未经治疗者致残率可达50%以上，严重危害人类健康。KOA病因较复杂，可能是多种致病因子共同参与的结果，包括创伤、激素分泌紊乱、细胞因子、免疫反应以及机体力学的变化等[6]，但其具体原因仍未明确。KOA治疗分为物理治疗、药物治疗以及手术治疗。药物治疗包括非甾体类抗炎药、延缓关节炎病程的药物如硫酸软骨素、四环素类抗生素、抗氧化剂、中药以及细胞因子与基因治疗等，双醋瑞因胶囊是IL-1抑制剂，临床上广泛用于KOA的治疗，并取得了一定效果[7]。本次研究采用传统中药羌归膝舒丸治疗KOA，结果显示，临床有效率明显高于双醋瑞因胶囊组，并表现出较好的耐受性。

MicroRNA(miRNA)是近年来发现具有调控基因转录后水平的单链小RNA，大量文献报道，其与KOA的发生、发展关系密切，机制可能与调节炎性介质的释放以及细胞外基质的降解有关。Yamasaki等[8]研究发现，KOA的严重程度与miR-146a表达量呈反比，与基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达呈正比，疾病越严重，miR-146a的表达越低，MMP-13的表达越高。韩朝永[9]研究显示，KOA患者关节液中miR-140表达水平明显低于健康人，且miR-140的缺失可能是导致KOA发生发展的重要因素。miR-21是另一个已知调控KOA的miR，其通过激活RANKL通路，调节破骨细胞的分化[10]。另一类与KOA发病有关的是炎性细胞因子，主要包括IL-6、IL-1β、TNF-α，其与miRNA共同调控发挥作用。IL-6、IL-1β能够介导MMPs促进软骨降解，诱导软骨细胞产生NO诱导其凋亡，并能抑制胶原蛋白合成，阻止胶原基质网状形成[7]。TNF-α能够吸收已破坏的软骨，抑制成骨细胞代谢，产生严重的骨关节破坏，其作用类似与白介素[11]。本研究结果显示，2组在治疗前IL-6、IL-1β、TNF-α、miR-21表达较高，miR-140、miR-146a表达较低，治疗后IL-6、IL-1β、TNF-α、miR-21表达降低而miR-140、miR-146a升高，说明有效的治疗是通过炎性因子和miR的调控来实现的。

综上，羌归膝舒丸治疗KOA效果显著，其作用机制可能是通过调控miR以及炎性因子来实现的。

[1] 中华医学会骨科学分会.骨关节炎诊治指南(2007版)[J].中国医刊，2007，42(12)：30-32.

[2] 田涛涛，李无阴，杜志谦，等.羌归膝舒丸与筋骨痛消丸治疗寒凝血瘀型膝骨关节炎临床对照试验[J].风湿病与关节炎，2013，2(4)：18-21.

[3] 李志明.小针刀松解结合玻璃酸钠注射治疗退行性膝关节炎疗效观察[J].河北中医，2016，38(7)：1066-1069.

[4] 韩宗昌，李无阴，王战朝，等.羌归膝舒丸联合双醋瑞因胶囊治疗膝骨关节炎50例临床观察[J].湖南中医杂志，2016，32(5)：103-105.

[5] Bennell K,Dobson F.Review：Exercise interventions improve painand function in people with knee osteoarthritis compared with no ex-ercise[J].Evid Based Nurs,2014,17(4):109.

[6] Iqbal MN,Haidri FR,Motiani B,et al.Frequency of factors associ-ated with knee osteoarthritis[J].J Pak Med Assoc,2011,61(8):786-789.

[7] 郭泰宣，雯霞，毕树雄.膝骨关节炎的治疗进展[J].中国药物与临床，2014，14(3)：330-331.

[8] Yamasaki K,Nakasa T,Miyaki S,et al.Expression of MicroRNA-146a in osteoarthritis cartilage[J].Arthritis Rheum,2009,60(4):1035-1041.

[9] 韩朝永.膝骨关节炎患者关节液中miR-140的表达及其临床意义[J].现代中西医结合杂志，2016，25(3)：1422-1424.

[10] 赵勇，王钢.MicroRNA 基因调控在膝骨关节炎发生发展作用中的研究进展[J].中国骨伤，2016，29(4)：383-385.

[11] 江锋，陈巍，马川，等.膝骨性关节炎患者关节滑液肿瘤坏死因子α的表达及其临床意义[J].实用医学杂志，2010，26(2)：246-247.

(编校：苗加会)

Effect and mechanism of qiangguixishu pills in the treatment with knee osteoarthritis

WANG QiangΔ, WANG Dong-jun, TIAN Guo-feng, LIU Zhi-qiang, ZHANG Li-bo, CUI Bin

(Department of orthopedics, Daqing Longnan Hospital ,Daqing 163000, China)

ObjectiveTo study the effect of qiangguixishu pills in the treatment with knee osteoarthritis and influence in miR of circulating and inflammatory factor index.Methods50 patients with KOA from October 2014 to October 2015 were randomly divided into two groups,the observation group and the control group,with 25 cases in each group.The control group using Diacerein capsules for treatment,the observation group

the Qiangguixishu pills for treatment,compared the WOMAC score and clinical efficacy before and after treatment between two groups,and changes of miR and inflammatory factors circulating.ResultsThere was no difference in WOMAC score between the two groups before treatment;pain,joint stiffness,daily activities and comprehensive scores were decreased after treatment in two groups(P<0.05),and it was lower in the observation group than in the control group(P<0.05);There was no significant difference at blood miR-146a,miR-140,miR-21,IL-6,IL-1beta,TNF-alpha contents between the two groups,miR-21 beta,IL-6,IL-1 beta,TNF- alpha were lower than that before treatment in the two groups after treatment(P<0.05),miR-140,miR-146a were higher than before treatment(P<0.05),and compared with the control group,the above indicators at the observation group were had significant difference(P<0.05).ConclusionThere were the therapeutic effect in the treatment with KOA by Qiangguixishu pills and its mechanism maybe realized by regulating the miR and inflammatory factor.

Qiangguixishu pill;arthritis;inflammatory factor;knee;diacerein capsules

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.08.023

王强，通信作者，男，硕士，主治医师，研究方向：骨科疾病的诊治，E-mail:wangxiaoya_226@163.com。

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