H PLC测定转化糖电解质注射液中5-羟甲基糠醛含量

李彩霞　刘光斌（酒钢医院药学部，甘肃 嘉峪关735100）



H PLC测定转化糖电解质注射液中5-羟甲基糠醛含量

李彩霞刘光斌
（酒钢医院药学部，甘肃 嘉峪关735100）

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定转化糖电解质注射液中5-羟甲基糠醛的含量。方法：色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）调pH值为3.0）；流速为1.0 mL/min，柱温25℃，检测波长284 nm。结果：5-羟甲基糠醛在0.002 8～ 7.0 μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率为99.81%，RSD为1.87%。结论：本方法简便、灵敏、准确可靠，专属性强。

【关键词】转化糖电解质注射液；5-羟甲基糠醛；高效液相色谱法；含量测定

转化糖电解质注射液为复方制剂，其组分为每 500 mL（5%）：果糖 12.5 g，葡萄糖 12.5 g，乳酸钠1.400 0 g，氯化钠0.730 0 g，氯化钾0.930 0 g，氯化镁0.143 0 g，磷酸二氢钠0.375 0 g，用于需要非口服途径补充水分或能源及电解质的患者的补液治疗［1］。转化糖电解质注射液在临床使用过程中发生的药品不良反应很可能与其内果糖和葡萄糖在生产和储存过程中产生的5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）有关［2］。5-HMF是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，该化合物对人体横纹肌和内脏有损害［3］。有报道称5-HMF有可能引发并促进结肠小囊异常生长［4］及具有一定程度的基因毒性［5］。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对转化糖电解质注射液中的5-HMF进行测定并进行多批次不同时间点的检测，为转化糖电解质注射液的安全性评价提供参考。

1　材料

1.1仪器

LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津），岛津 LC solution工作站；AUY220电子分析天平（日本岛津）。

1.2药品与试剂

5-HMF对照品购自中国食品药品检定研究院（批号：111626-200301）；转化糖电解质注射液（扬子江药业集团上海海尼药业有限公司，规格：500 mL）；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）调pH值为 3.0）；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长：284 nm；进样量：10 μL。5-HMF对照品、转化糖电解质注射液的色谱图见图1。

图1　高效液相色谱图

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的配制精密称取5-HMF对照品适量，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得10 μg/mL的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的配制取转化糖电解质注射液样品直接进样。

2.3标准曲线的制备

精密称取5-HMF对照品7.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，精密量取1 mL 置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

精密量取上述对照品贮备液0.01，0.05，0.1，1.0，5.0，10.0，25.0 mL分别置于 100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.002 8，0.014，0.028，0.28，1.4，2.8，7.0 μg/mL的对照品溶液。将上述对照品溶液按“2.1”项下色谱条件分别进样 10 μL，以5-HMF峰面积（Y）为纵坐标，5-HMF浓度（X）为横坐标，进行线性回归，并绘制标准曲线，线性回归方程为：

Y=1.172 34×107X＋ 1 236.1，

r=0.999 8（n=7）。结果表明5-HMF对照品在 0.002 8～ 7.0 μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.4精密度试验［6］

2.4.1重复性试验取同一对照品溶液按照“2.1”色谱条件以10 μL重复进样5次，测得5-HMF含量的RSD=1.12%；取同一批转化糖电解质注射液按照“2.1”色谱条件以 10 μL重复进样6次，计算5-HMF含量，RSD为1.22%，结果表明，本法的重复性较好。

2.4.2中间精密度试验取同一供试品溶液按上述色谱条件，由不同的实验人员分别于0，1，2，3，4，5日进样，记录色谱图，结果峰形无改变，峰面积的RSD为1.64%，说明建立测定转化糖电解质注射液中5-HMF含量的方法中间精密度良好。

2.4.3重现性试验将上述同一供试品溶液送至嘉峪关市药品检验所，依本文建立的方法用不同的高效液相色谱仪进行测定，结果峰形无改变，峰面积的RSD为2.35%，说明不同的实验室不影响本方法的重现性结果。

2.5回收率试验

精密量取已知5-HMF含量的转化糖电解质注射液2.0 mL 9份，分别置于5 mL量瓶中，分为3组，每组3份。3组待测溶液分别精密加入“2.3”项下0.28 μg/mL对照品溶液1.1，1.3，1.5 mL，使得低、中、高浓度对照品加入量与所取供试品待测定成分量之比控制在0.8∶1，1∶1，1.2∶1左右［6］，加超纯水至刻度。分别测定，计算加样回收率。结果见表1，5-HMF平均回收率为99.81%，RSD为1.87%。

表1　加样回收率试验结果（n=9）

2.6样品含量测定及稳定性考察

按拟订的含量测定方法，测定了10批市售转化糖电解质注射液（扬子江药业集团上海海尼药业有限公司，规格：500 mL）样品，并在效期内的不同时间点多次进行检测，5-HMF的含量在0.009～ 1.375 μg/mL之间。同一批号的转化糖电解质注射液在不同时间点检测结果的RSD均小于2.0%，说明同一批号的转化糖电解质注射液在效期内的不同时间点多次检测结果是稳定的。

3　讨论

5-HMF是含有葡萄糖、果糖的注射液制备、运输及储存过程中产生的降解产物，因此有必要制订转化糖电解质注射液中5-HMF的检查方法。《中国药典》2015年版对于含葡萄糖注射液标准中采用紫外-可见分光光度法检测5-HMF限度［7］，UV吸收度法因简单、通用、不需对照品，可作为首选方法。若药品成分比较复杂干扰检测时，该方法分离度不高、专属性较差。经试验，本文所用HPLC专属性好，可用于转化糖电解质注射液中杂质含量的控制。

采用HPLC外标法限度要求应不低于药典中葡萄糖注射液或葡萄糖氯化钠注射液限度，需用对照品进行限度的等量转换试验，以确定合适的限度。根据《中国药典》2015年版规定：葡萄糖注射液中5-HMF“在284 nm的波长处测定，吸光度不得大于0.32”。有研究认为［3］，《中国药典》所规定的“吸光度不得大于0.32”时相对应的5-HMF浓度约为2 μg/mL，所有葡萄糖类注射液中5-HMF的限度应定为2 μg/mL。因此，按以上限度进行判断，所测定的10批样品中实验结果表明转化糖电解质注射液的5-HMF的吸光度均小于2 μg/mL，在限度控制范围内，说明转化糖电解质注射液样品的安全性有保障。

本文曾参照文献［8］选择0.05 mol/mL磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH值至 3.5）-甲醇（80∶20）进行测定，5-HMF的吸收峰拖尾比较严重。而用本文方法减少了拖尾的问题。

转化糖电解质注射液是由葡萄糖与果糖等分子混合制成含有多种电解质的复方制剂，不仅适用于手术后、烧创伤和感染等胰岛素抵抗以及糖尿病患者的能量补充，同时还可作为静脉给药的载体，与多种药物配伍。据文献报道［9-12］，有些药物可以与转化糖电解质注射液配伍使用，而有些药物与转化糖电解质注射液存在配伍禁忌。本研究认为，在考察药物与转化糖电解质注射液的配伍稳定性时应该考察5-HMF的限度。5-HMF是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物。药品与转化糖电解质注射液等含有单糖的注射液配伍后在放置过程中可能会分解产生5-HMF［13］。因此在药物与含糖输液配伍稳定性研究中不可忽视，有必要检测5-HMF的含量。

参考文献：

［1］ 潘百强，李雪峰，莫显文.转化糖电解质注射液对择期手术患者血糖及电解质的影响［J］.山东医药，2010，50（22）：95-96.

［2］ 张玉凤.转化糖电解质注射液致过敏反应一例［J］.中外健康文摘，2013，10（10）：415-416.

［3］ 何伍，凌霄.含葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛限度的检测方法［J］.中国医药工业杂志，2008，39（1）：47-49.

［4］ Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et al.Initiation and promotion ofcolonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose［J］.Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

［5］ Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination［J］.Chem Res Toxicol，1994，7 （3）：313-318.

［6］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：375-376.

［7］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：1270-1271.

［8］ 曾令高.高效液相色谱法测定替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛含量［J］.中国药业，2010，19（19）：18-19.

［9］ 张英梅.头孢地嗪与转化糖电解质注射液存在配伍禁忌［J］.护理学报，2008，15（8）：67.

［10］ 张伟，翟佳琪，郝应龙.转化糖电解质注射液与20%甘露醇注射液存在配伍禁忌［J］.中国新医学论坛，2008，8（6）：9.

［11］ 方宝霞，吴淞潮，时晓亚，等.卡洛磺钠在转化糖电解质注射液中配伍的稳定性考察［J］.实用药物与临床，2010，13（4）：269-270.

［12］ 付秀娟，朱大胜，肖凡.头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/舒巴坦和头孢唑肟在转化糖电解质注射液中的配伍稳定性考察［J］.中国药物与临床，2010，10（5）：539-541.

［13］ 刘光斌，赵丽萍，姜芳宁，等.注射用间苯三酚与常用输液的配伍稳定性研究［J］.中国药房，2013，24（10）：918-920.

doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.006

收稿日期：（2015-09-08）

作者简介：刘光斌，男，主任药师。研究方向：临床药学、医院药学。通讯作者E-mail：jgyylgb@sina.com

Determination of 5-Hydroxymethyl Furfural Content in Invert Sugar and Electrolytes Injection by HPLC

Li Caixia，Liu Guangbin（Department of Pharmacy of Jiugang Hospital，Gansu Jiayuguan 735100，China）

ABSTRACTObjective：To develop a HPLC method for determination of 5-hydroxymethyl furfural content in invert sugar and electrolytes injection.Methods:Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used，serving acetonitrile-triethylamine solution（9∶91，add 2.5 mL triethylamine to 1 000 mL water，and adjust the pH value to 3.0 with dilute phosphoric acid solution（1→5）as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The temperature of column was 25℃，while the detection wavelength was 284 nm.Results:The standard curve of 5-hydroxymethyl furfural showed a good linearity at a concentration range of 0.002 8～7.0 μg/mL（r=0.999 8）. The average recovery was 99.81%，with a RSD of 1.87%.Conclusion：The developed HPLC method is simple，sensitive，specific and accurate.

KEY WORDSInvert Sugar and Electrolytes Injection；5-Hydroxylmethyl Furfural；HPLC；Content Determination