阿魏酸对ob/ob小鼠脂肪沉积及腹脂脂肪酸组成的影响

2016-08-03 02:14:29潘奕鸥王薇薇李爱科张卫卫韩四海刘建学
动物营养学报 2016年7期
关键词:阿魏酸肥胖

潘奕鸥 王薇薇 李爱科 张卫卫 韩四海 刘建学,3*

(1.河南科技大学食品与生物工程学院,洛阳471023;2.国家粮食局科学研究院,北京100037;3.河南省食品原料工程技术研究中心,洛阳471023)



阿魏酸对ob/ob小鼠脂肪沉积及腹脂脂肪酸组成的影响

潘奕鸥1,2,3王薇薇2李爱科2张卫卫1韩四海1刘建学1,3*

(1.河南科技大学食品与生物工程学院,洛阳471023;2.国家粮食局科学研究院,北京100037;3.河南省食品原料工程技术研究中心,洛阳471023)

摘要:本试验旨在研究阿魏酸对ob/ob小鼠脂肪沉积和腹脂脂肪酸组成的影响。选取5周龄的雄性ob/ob小鼠30只,随机分为3组(n=10),分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、0.25%和0.50%阿魏酸的试验饲粮,试验期9周。结果表明:与对照组相比,饲粮中添加0.25%和0.50%的阿魏酸显著降低了ob/ob小鼠的总增重、腹脂率(P<0.05),显著降低了血清甘油三酯及肝脏甘油三酯和总胆固醇水平(P<0.05),减少了肝脏脂滴积累,显著降低了腹脂中棕榈油酸和油酸的含量(P<0.05),显著降低了腹脂中棕榈油酸/棕榈酸和油酸/硬脂酸(P<0.05)。由此得出,阿魏酸可以抑制ob/ob小鼠的脂肪沉积,改善其腹脂脂肪酸组成,减重降脂效果明显。

关键词:阿魏酸;ob/ob小鼠;肥胖;脂肪沉积;脂肪酸组成

阿魏酸(ferulic acid,FA)化学名4-羟基-3-甲氧基-2-丙烯酸,是一种酚类化合物,普遍存在于中药、粮食、蔬菜、水果中[1-2],其在谷物麸皮中含量较高[3],在全麦粉中的含量为1.252 g/kg,在玉米面中的含量更高达2.317 g/kg[4]。多酚类物质如苹果多酚、茶多酚和葡萄籽多酚一般具有强抗氧化性,对高血脂、糖尿病等有一定的调节作用[5-7]。FA也有极强的抗氧化性[8],并对Ⅱ型糖尿病、高血压和心脑血管疾病等有一定的治疗效果[9-12]。肥胖病主要表现在机体脂肪的过量积累,并且是Ⅱ型糖尿病、心脑血管疾病等的主要诱发因素之一[13]。多酚类物质及其衍生物,如富含FA的咖啡多酚、酒花多酚、没食子酸、没食子儿茶素和没食子酸酯均具有抑制脂肪积累的效果[14-17]。Son等[18]研究发现,在饲粮中添加FA或FA酯化物质谷维素可以显著抑制高脂饮食诱导的肥胖小鼠的体重增加,使总增重分别降低了47.50%和26.67%;Senaphan等[19]研究认为,大鼠每天口服30或60 mg/kg BW的FA可以改善高脂高碳水化合物诱导的代谢综合征,降低大鼠血清中甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)的水平,并降低代谢综合征大鼠的体重。但是这些报道并未以脂肪变化为研究重点,只对体重、血脂水平等进行了检测分析,而FA对肥胖机体脂肪沉积和脂肪代谢等方面的影响尚未见系统报道。ob/ob小鼠是瘦素基因缺陷型小鼠,在青年时期即会严重超重,并形成肥胖病相关的体脂紊乱,如高血脂、肝脏脂质沉积等[20]。本试验以雄性ob/ob小鼠为研究对象,研究饲粮中添加不同量的FA(0.25%或0.50%)对ob/ob小鼠脂肪沉积和腹脂中脂肪酸组成的影响,旨在为进一步探明FA对预防和治疗肥胖病的功效提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料与仪器

FA标准品:粉末状,纯度≥99%,购于上海晶纯生化科技股份有限公司。

TG和TC检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所,脂肪酸标准品购于北京普析科技有限公司,其他常规试剂均为分析纯。

主要试验仪器如下:SynergyTMHT酶标仪(Biotek公司,美国);海尔立式超低温保存箱(青岛海尔特种电器有限公司);Centrifuge-5810R型高速冷冻离心机(Eppendorf公司,德国);罗氏生化分析仪(Roche公司,瑞士);7890A气相色谱附氢火焰检测器(FID),色谱柱为DB-23(Agilent公司,美国);KD-BMⅢ生物组织包埋机、KD-3368AM切片机、KEDEE生物组织染色机(金华市科迪仪器设备有限公司)等。

1.2动物饲养管理

30只5周龄、体重相近的雄性ob/ob小鼠,购于北京华阜康生物科技股份有限公司,为无特定病原体级(specified pathogen free,SPF)。ob/ob小鼠基础饲粮由南通特洛菲饲料科技有限公司提供,依照AIN-93M标准饲料配方设计,其组成及营养水平见表1。ob/ob小鼠饲养在SPF实验动物房(国家粮食局科学研究院,北京)的独立送风笼具(individual ventilated cage,IVC)中。饲养室保持温度(23±2) ℃,相对湿度50%,12 h/12 h光照日夜循环。配对饲喂,充足饮水,预饲1周。

1.3试验方法

1.3.1试验设计

将30只ob/ob小鼠随机分成3组,每组10个重复,每个重复1只,分笼饲养。对照组(CON组)、低剂量FA添加组(L-FA组)和高剂量FA添加组(H-FA组)ob/ob小鼠分别饲喂在基础饲粮中添加0、0.25%和0.50% FA的试验饲粮。每周测定各组ob/ob小鼠体重、周采食量,称重前禁食12 h,试验期为9周。

1.3.2样品采集

采样前禁食12 h,称量ob/ob小鼠终体重。摘除小鼠眼球采集血样,分离血清,冻存于-80 ℃待测。采集血样后,ob/ob小鼠断颈处死,解剖分离肝脏和腹部白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT),称重后计算肝脏指数和腹脂率。取同一部位的肝组织,存于10%甲醛固定液中。剩余肝组织与WAT一并冻存于-80 ℃待测。

肝脏指数(%)=(肝脏重/体重)×100; 腹脂率(%)=(腹部WAT重/体重)×100。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

矿物质与维生素预混料为每千克饲粮提供The mineral and vitamin premix provided the following per kg of the diet:Ca 5 000 mg,P 3 000 mg,K 3 600 mg,Na 1 033 mg,Mg 511 mg,Fe 45 mg,Zn 35 mg,Mn 10 mg,Cu 6 mg,I 0.2 mg,Cr 1 mg,S 300 mg,Cl 1 613 mg,VA 4 000 IU,VD 1 000 IU,VE 75 IU,VK 0.000 86 g,VB15 mg,VB26 mg,VB330 mg,VB515 mg,VB66 mg,胆碱 choline 1 000 mg,叶酸 folic acid 2 mg,生物素 biotin 0.2 mg,VB120.025 mg。

1.3.3血脂水平检测

用生化分析仪检测血清中TG、TC、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的水平。

1.3.4肝脂水平检测

肝脏匀浆依照南京建成生物工程研究所提供的方法制备,按照检测试剂盒说明书采用酶联免疫吸附法检测肝脏中TG和TC水平。

1.3.5肝脏病理学分析

取固定24 h后的肝组织,包埋处理后,切片(厚度为5 μm),经苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色后在光学显微镜下以10×25倍视野观察肝组织中脂滴大小和密度变化。

1.3.6腹脂脂肪酸组成检测

按照GB/T 9695.7—2008操作,得到小鼠脂肪组织中的油脂,并按照GB/T 17367—2008的方法,用三氟化硼法对其脂肪酸进行甲酯化,利用气相色谱法(GB/T 17377—2008)分析其脂肪酸组成,主要包括棕榈酸(palmitic acid,C16∶0)、棕榈油酸(palmitoleic acid,C16∶1)、硬脂酸(stearic acid,C18∶0)和油酸(oleic acid,C18∶1)的含量(质量百分数),并计算C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0。

1.4数据统计分析

试验数据用平均值±标准差表示,采用SAS 9.0统计软件中的ANOVA过程进行单因素方差分析,P<0.05为差异显著。

2结果

2.1FA对ob/ob小鼠体重、总增重和总采食量的影响

由图1可知,饲养期初始,各组ob/ob小鼠体重均呈稳定增长趋势,与CON组ob/ob小鼠相比,前4周L-FA组和H-FA组ob/ob小鼠的体重没有显著差异(P>0.05)。第5~6周,L-FA组和H-FA组ob/ob小鼠体重增长趋于平缓。第7周开始至饲养期结束,L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠体重均显著低于CON组(P<0.05)。

同一时间点,数据点无字母或有相同字母标注表示差异不显著(P>0.05),有不同小写字母标注表示差异显著(P<0.05)。

At the same time piont, data points with no letter or the same letters mean no significant difference (P>0.05), while with different small letters mean significant difference (P<0.05).

图1各组ob/ob小鼠每周体重变化

Fig.1Body weight change weekly ofob/obmice in groups

由表2可知,各组总采食量无显著差异(P>0.05),L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠的总增重显著低于CON组(P<0.05)。

表2 各组ob/ob小鼠的总增重和总采食量Table 2 Total weight gain and total feed intake of ob/ob mice in groups g

同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05),不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2FA对ob/ob小鼠肝脏指数和腹脂率的影响

由表3可知,L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠的肝脏重和肝脏指数与CON组无显著差异(P>0.05),但L-FA组和H-FA组ob/ob小鼠的肝脏重均有降低的趋势(P<0.10)。与CON组相比,饲粮中添加0.25%或0.50%的FA显著降低了ob/ob小鼠的腹部WAT重和腹脂率(P<0.05)。

2.3FA对ob/ob小鼠血脂水平的影响

由表4可知,饲粮中添加0.25%或0.50%的FA对ob/ob小鼠的血清TC和LDL-C水平均没有产生显著影响(P>0.05)。L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠的血清TG水平显著降低于CON组(P<0.05),只有当FA添加量为0.50%时,ob/ob小鼠的血清HDL-C水平才得到显著提高(P<0.05),L-FA组ob/ob小鼠的血清HDL-C水平与CON组无显著差异(P>0.05)。

表3 各组ob/ob小鼠的肝脏指数和腹脂率Table 3 Liver index and abdomen lipid percentage of ob/ob mice in groups

表4 各组ob/ob小鼠血清TG、TC、HDL-C和LDL-C水平Table 4 Serum TG, TC, HDL-C and LDL-C levels of ob/ob mice in groups mmol/L

2.4FA对ob/ob小鼠肝脂水平的影响

由表5可知,与CON组相比,饲粮中添加0.25%和0.05%的FA使ob/ob小鼠肝脏TG水平分别降低了50.00%和39.29%,肝脏TC水平降低了39.62%和43.72%,差异均达到显著水平(P<0.05)。

表5 各组ob/ob小鼠肝脏TG和TC水平Table 5 Liver TG and TC levels of ob/ob mice in groups

2.5ob/ob小鼠肝脏病理学分析

由图2可知,同为10×25倍视野下,CON组ob/ob小鼠肝脏脂滴大而密集(图2-A),而L-FA组ob/ob小鼠肝脏脂滴明显减少(图2-B),并且大部分脂滴直径小于CON组,H-FA组ob/ob小鼠肝脏脂滴大小与密集程度相对于CON组也得到了明显改善(图2-C)。

2.6FA对ob/ob小鼠腹脂脂肪酸组成的影响

由表6可知,FA对ob/ob小鼠腹脂中C16∶0和C18∶0含量无显著影响(P>0.05),但对C16∶1和C18∶1含量的增高有显著的抑制作用(P<0.05)。L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠腹脂中C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0显著低于CON组(P<0.05),且H-FA组C18∶1/C18∶0还显著低于L-FA组(P<0.05)。

3讨论

本试验通过在饲粮中添加一定量的FA,研究FA是否会对ob/ob小鼠的增重以及脂肪沉积和代谢有改善作用。本试验采用配对饲喂,使各组最终绝对总采食量无显著差异,各组ob/ob小鼠平均FA日摄入量分别为:CON组,0 mg/d;L-FA组,7.6 mg/d;H-FA组,15.5 mg/d,符合试验所设计的FA摄入梯度。

A为CON组ob/ob小鼠肝脏组织切片,B为L-FA组ob/ob小鼠肝脏组织切片,C为H-FA组ob/ob小鼠肝脏组织切片。

A, liver section ofob/obmice in CON group; B, liver section ofob/obmice in L-FA group; C, liver section ofob/obmice in H-FA group.

图2 各组ob/ob小鼠肝脏组织切片HE染色观察Fig.2 Observation on HE staining of liver tissue sections of ob/ob mice in groups (250×) 表6 各组ob/ob小鼠腹脂脂肪酸组成Table 6 Fatty acid composition in abdominal lipid of ob/ob mice in groups

由试验结果可知,L-FA组和H-FA组ob/ob小鼠的总增重分别比CON组减少了23.01%和19.4%,Son等[18]的研究表明在饲粮中添加0.50% FA可以使总增重降低26.67%,与此相一致,但本研究结果说明更小的FA添加量也可达到减重的效果。与之类似的,饲粮中添加0.25% FA使ob/ob小鼠的脂肪重减少了24.66%,腹脂率降低了18.58%,而H-FA组ob/ob小鼠的脂肪重和腹脂率分别减少了21.97%和16.17%。各组ob/ob小鼠的肝脏指数无显著差异,饲粮中添加0.25%和0.50%的FA均使ob/ob小鼠的肝脏重降低了15.4%,有趋势但不显著,这说明FA对ob/ob小鼠脂肪沉积的抑制可能主要作用于脂肪组织。相对于CON组,L-FA组和H-FA组ob/ob小鼠肝脏中TG水平分别降低了50.00%和39.29%,TC水平分别降低了39.62%和43.72%,这与图2显示出的FA具有改善肝脏脂滴积累的作用相一致,说明0.25%和0.50% FA虽未显著降低ob/ob小鼠的肝脏重,但可以抑制肝脏中脂质的积累。不同的是,Wang等[21]的研究发现口服FA虽可以降低高脂饲粮诱导的肥胖大鼠肝脏中TC水平,但是TG水平只有降低的趋势。其可能的原因是口服大量的FA与饲粮中含的FA在体内消化吸收的效率不同。在血液中,HDL-C的主要功能是促进血清中胆固醇的逆向转运[22]。本试验结果表明,H-FA组ob/ob小鼠的血清HDL-C水平相对于CON组显著提高,但血清TC水平没有显著变化。这与Marimuthu等[23]研究的结果并不相同,他们发现口服FA的代谢综合征大鼠的血清HDL-C水平比CON组升高了74.56%,血清TC水平则降低了35.37%。结果的差异可能是FA的摄入量和摄入方式不同导致。L-FA组与H-FA组ob/ob小鼠的血清TG水平相比CON组分别降低了10.56%和6.11%,而Marimuthu等[23]也报道高脂血症大鼠每天注射20 mL/kg FA可以显著降低血清与肝脏中的TG水平,与此结果类似。

Jeyakumar等[24]研究发现,饮食诱导肥胖大鼠模型中,大鼠脂肪组织的C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0会升高,但是该研究并未关注FA对脂肪酸组成的影响。在本试验中,相对于CON组,L-FA组ob/ob小鼠腹脂中C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0分别显著降低了15.59%和8.09%,H-FA组则分别降低了20.18%和13.62%,差异均达到显著水平。FA对脂肪组织中C16∶0和C18∶0的含量没有显著的改善作用,但是FA降低了C16∶1和C18∶1的含量,从而降低了ob/ob小鼠腹脂中C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0。硬脂酰辅酶A脱氢酶(stearoyl-CoA desaturase,SCD)是一种内质网酶,可以催化不饱和脂肪酸的合成[25]。在缺少SCD基因的ob/ob小鼠中,脂肪组织中C16∶1和C18∶1的含量及C16∶1/C16∶0和C18∶1/C18∶0有所降低[26]。因此,本试验中FA可能通过下调SCD基因的表达,有效减少不饱和脂肪酸的合成,抑制ob/ob小鼠的脂肪合成进程。

在本试验条件下,FA添加量为0.25%时较对ob/ob小鼠的总增重、腹脂、血清与肝脏的TG水平的改善作用都略高于添加量为0.50%时,但0.50%的FA对ob/ob小鼠的血清和肝脏TC水平有较好的改善效果。由此可知,若以减重降脂为目的,0.25%为较适宜添加量,若以降胆固醇为目的,则0.50%为较适宜添加量。FA等酚酸在人们日常饮食中含量丰富,在玉米等粗粮中的含量接近0.25%,这就鼓励人们在日常饮食中多以玉米、小米和糙米等富含FA等多酚类物质的谷物作为主食,提高对此类植物化学素的摄取,达到预防肥胖的保健效果。

4结论

本试验条件下,饲粮中添加0.25%和0.50%的FA均能够抑制ob/ob小鼠体重的增加,降低脂肪组织重量及腹脂率,降低血脂和肝脂水平,改善肝脏脂滴积累程度。以减重降脂为目的时,0.25%为较适宜添加量;以降胆固醇为目的时,0.5%为较适宜添加量。

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(责任编辑菅景颖)

doi:10.3969/j.issn.1006-267x.2016.07.019

收稿日期:2016-01-25

基金项目:公益性(粮食)行业专项“粮油营养健康特性研究与基础参数数据库的构建”(201313011-6);河南省重点攻关项目“农产品加工副产物的高效增值和循环利用关键技术研究”(142102310262)

作者简介:潘奕鸥(1990—),男,河南洛阳人,硕士研究生,研究方向为生物化学与分子生物学。E-mail: lynnouou@163.com *通信作者:刘建学,教授,硕士生导师,E-mail: jx_liu@163.com

中图分类号:S816

文献标识码:A

文章编号:1006-267X(2016)07-2140-07

*Corresponding author, professor, E-mail: jx_liu@163.com

Effects of Ferulic Acid on Lipid Deposition and Fatty Acid Composition in Abdominal Lipid ofob/obMice

PAN Yiou1,2,3WANG Weiwei2LI Aike2ZHANG Weiwei1HAN Sihai1LIU Jianxue1,3*

(1. College and Food and Bioengineering, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, China;2. Academy of State of Administration of Grain, Beijing 100037, China; 3. Henan Engineering Research Center of Food Material, Luoyang 471023, China)

Abstract:This experiment was conducted to study the effects of ferulic acid (FA) on lipid deposition and fatty acid composition in abdominal lipid of ob/ob mice. A total of 30 male ob/ob mice at 5 weeks old were randomly divided into 3 groups (n=10). ob/ob mice in the 3 groups were fed the basal diets supplemented with 0 (control group), 0.25% and 0.50% FA, respectively. The experiment lasted for 9 weeks. The results showed that compared with control group, FA significantly reduced the total weight gain and abdomen fat percentage (P<0.05), significantly lessened the serum TG and liver TG and TC levels (P<0.05), attenuated accumulation of lipid droplet, significantly suppressed the contents of palmitoleic acid and oleic acid in abdominal lipid(P<0.05), and significantly decreased the desaturation indexes-palmitoleic acid/palmitic acid and oleic acid/ stearic acid in abdominal lipid (P<0.05). It is concluded that FA can inhibit the lipid deposition and ameliorate the fatty acid composition in abdominal lipid, and the weight-reducing and lipid-lowering effect is obvious.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(7):2140-2146]

Key words:ferulic acid; ob/ob mice; obesity; lipid deposition; fatty acid composition

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腹腔镜袖状胃切除治疗单纯性肥胖1例报告
正交设计优选白洋淀芦根中阿魏酸的提取工艺
科技视界(2015年35期)2016-01-04 09:49:12