HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量

梁　萍　彭建彪　龙　凯

云南省红河州食品药品检验所，云南　蒙自　661199



HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量

梁萍彭建彪龙凯

云南省红河州食品药品检验所，云南蒙自661199

【摘要】目的：建立逍遥散中芍药苷的测定方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱(Durashell C18柱；250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)；检测波长：230nm；流速:1.0ml/min；柱温：30℃。结果：芍药苷在0.0423～0.4234μg范围内呈现良好的线性关系，r=0.9996,平均回收率为99.95%(RSD=1.73%，n=6)。结论：本方法专属性强，准确度高，重现性良好，可用于逍遥散的质量控制。

【关键词】逍遥散；含量测定；芍药苷；HPLC

逍遥散为云南省个旧市中医院制剂，执行标准为滇ZJGF/2005-721.逍遥散由柴胡、当归、白芍、薄荷等七味药制备而成，具有疏肝解郁、健脾和胃的功效。处方中白芍为方中主药，白芍的主要活性成分为芍药苷，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，为保证该制剂的内在质量，研究采用高效液相色谱法(HPLC)对处方中白芍主要活性成分芍药苷进行定量研究。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子天平，奥豪斯AR224CN电子天平。

1.2试药芍药苷对照品(批号：110736-201438，中国食品药品检定研究院)；逍遥散(批号：20150814、20151013、20151108、20151215，云南省个旧市中医院)。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Durashell C18 (4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长[1]：230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

2.2对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含芍药苷40μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备[1]取本品约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml,超声处理(功率240W，频率45KHz)30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性样品溶液的制备取缺白芍的阴性样品0.3g，按“2.3”项供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.5专属性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果供试品色谱中呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，阴性样品在与芍药苷对照品相同的保留时间处未显色谱峰，可见其他原辅料对主成分无干扰。(见图1)。

2.6线性关系考察分别精密吸取2.2中对照品溶液(每1ml含芍药苷42.3389μg)1、2、4、8、10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以芍药苷峰面积为纵坐标，进样量为横坐标作线性回归，结果峰面积Y与其进样量X(μg)之间呈良好的线性关系，芍药苷的线性范围为：0.0423～0.4234μg，回归方程为：Y=1265.48236X-8.172520，r=9996。2.7稳定性试验取同一逍遥散供试品溶液按上述色谱条件分别在0、1、2、4、8、12h时进样测定，测得芍药苷峰面积分别为472.49792、476.46701、476.68494、476.56143、475.38214、477.20706，RSD为0.37%，表明供试品溶液在12h内稳定。2.8精密度试验精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定5次，测得芍药苷峰面积分别为：537.34906、537.89551、538.09821、538.14862、538.51733、527.16009，RSD为0.83%，结果表明精密度良好。

2.9重复性试验取同一批号(批号20150814)样品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，芍药苷的平均含量为6.2130mg/g，RSD为0.76%，结果表明重复性良好。

2.10回收率试验精密称取6份供试品(批号：20150814，已测芍药苷含量为6.2130mg/g)，每份约0.15g，按1∶1比例加入芍药苷对照品，即加入芍药苷对照品溶液(芍药苷浓度0.2117mg/ml)4.5ml，挥去溶剂。然后按供试品溶液处理方法同法处理，将处理好的供试品溶液按含量测定方法同法测定，计算回收率，芍药苷的平均回收率为99.95%，RSD为1.73%。结果见表1。

2.11样品含量测定取4批逍遥散样品，按供试品溶液的制备方法操作，按“2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含量，结果见表2。

表1　芍药苷加样回收率试验结果　(n=6)

表2　芍药苷含量测定结果　(n=4)

3讨论

3.1芍药苷[2]具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。芍药苷是处方中主药白芍的主要活性成分，且其含量也相对较高，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，通过试验用HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量。

3.2方中白芍直接粉碎入药，参照2015年版《中国药典》一部白芍含量测定项 下的提取方法，用稀乙醇超声30min提取白芍中芍药苷较为完全 。

3.3经试验，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)，流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：230nm，测得结果比较理想。本法专属性强，操作方便，准确度高，重现性良好，可以用于逍遥散的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2015：105.

[2]吴春福.芍药及其化学成分的药理学研究概况[J].中药通报，1985,10(6)：43-46.

【中图分类号】R286.0

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)11-0017-02

(收稿日期：2016.04.08)

Content Determination of Paeoniflorin in Xiaoyao Powder by HPLC

LIING PingPENG Jian BiaoLONG Kai

HongHe Prefeture institute for food and drug control, Yunnan Mengzi 661199,China

Abstract:Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Xiaoyao Powder. Method Eighteen using C18 column chromatography (Durashell C18 column；250×4.6mm，5μm)；The mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution (16∶84)；Detection wavelength: 230nm；Flow rate: 1.0ml/min；column temperature：30℃.Result Paeoniflorin in 0.0423μg ～ 0.4234μg range showed a good linear relationship(r=0.9996)，The average recovery was 99.95% (RSD=1.73%, n=6).Conclusion The method has strong specificity and high accuracy,Good reproducibility, can be used for the quality control of Xiaoyao Powder.

Key words:Xiaoyao Powder;Determination; Paeoniflorin; HPLC