白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究

2016-08-03 06:20邓凤芸
中国民族民间医药 2016年11期
关键词:白花蛇舌草细胞株

邓凤芸

培力(南宁)药业有限公司,广西 南宁 530000



药物研究

白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究

邓凤芸

培力(南宁)药业有限公司,广西南宁530000

【摘要】目的:应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制实验,观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法:通过体外培养的方法培养人结肠癌HT-29细胞株和结肠癌HCTI16细胞株,对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。结果:白花蛇舌草提取物对HT-29、HCTI16细胞株的影响为:3mg/ml浓度时抑制率分别为(25.64±1.36)%、(27.36±1.87)%;5mg/ml浓度时抑制率(37.25±2.01)%、(39.01±1.65)%;7mg/ml浓度时抑制率(49.87±1.68)%、(51.22±2.33)%,其抑制率均优于对照组(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的增值,具有显著的抗肿瘤效果。

【关键词】白花蛇舌草;提取物;结肠癌HT-29细胞株;结肠癌HCTI16细胞株;凋亡作用

肿瘤在患病人群中的致残率及致死率居高不下,是较为难治的一类疾病。西医对于肿瘤的治疗常采用切除手术治疗以及放化疗治疗等,但治疗费用昂贵,且对机体损害极大[1]。中医药及其提取物属于天然药材,具有极高的生物活性,且中药临床应用的不良反应相对较小。为了观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性,本研究通过体外实验的方法观察其对结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的抑制率。

1仪器与材料

1.1仪器低温离心机(SIGMA公司生产,型号2-16PK)、酶标仪(上海赛默飞世尔公司生产,型号MK3)、显微镜(日本尼康公司生产,型号ECLIPSE TS-100)。

1.2材料白花蛇舌草由医院药房提供。RPMI1640培养基(上海博生生物科技有限公司生产,LM-R1641/500);噻唑蓝(MTT)干粉(北京索莱宝科技有限公司生产,M8180-1);(上海国源生物技术有限公司,9002-07-7)、胎牛血清(上海玉博生物科技有限公司,16000-044)。结肠癌HT-29、HCTI16细胞株由本市医学科学院基础医学研究所赠。

2方法

2.1药液的制备白花蛇舌草应用85%乙醇进行回流提取两次,过滤,回收乙醇,将过滤液浓缩至1.05的相对密度,然后进行喷雾干燥得白花蛇舌草粉末提取物。将提取物溶于40%DMSO中,制备成0.4g/ml的溶液,备用。

2.2方法在含有胎牛血清的RPMI1640培养基中分别加入结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株,分别置于细胞培养箱中进行体外培养。培养后取对数生长期的结肠癌HT-29细胞株及结肠癌HCTI16细胞株,应用胰蛋白酶进行消化处理,制成细胞悬浮液进行细胞计数。将细胞悬液的细胞计数密度限定在1×105个/ml,分别加入0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml的白花蛇舌草溶液,于96孔培养板进行接种24h培养。再加入0.5mg/ml的MTT溶液37℃下进行4h的孵育,后加入DMSO进行混匀震荡。2.3指标的测定室温下静置后进行吸光度值测定,计算不同浓度下的平均抑制率。结肠癌细胞株的抑制率=(对照组吸光度值-观察组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。

3结果

由表1可知,不同浓度的白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。

浓度HT-29HCTI163mg/ml25.64±1.36a27.36±1.87a5mg/ml37.25±2.01a39.01±1.65a7mg/ml49.87±1.68a51.22±2.33a对照组14.26±1.3215.68±2.01

注:与对照组相比,aP<0.05。

4讨论

肿瘤属于中医“积聚”的范畴,是由于机体受到外界邪毒入侵,体内正气亏虚,导致正亏邪实而诱发肿瘤的发生。肿瘤发生早期主要为风湿热毒邪入侵机体,导致机体邪实症状[2]。随着肿瘤的不断发生发展,机体正气耗损,从而出现较为显著的虚证症状。另外,饮食结构因素及自身情志失畅等,可使邪毒入侵所致的脏腑损伤以及气滞血瘀状态加重,导致肿瘤的不断进展。中药有效成分的提取分离在中药产业中得到广泛关注,通过药物有效成分的提取纯化,可在不同程度上提升药物的临床药效。

中药及其提取物在抗肿瘤的应用研究较为广泛,其作用机制复杂,主要体现在诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞分化以及逆转肿瘤细胞耐药性等几个方面。目前,抗肿瘤治疗较为理想的机制即为诱导肿瘤细胞的凋亡[3],而细胞凋亡的自我破坏机制由基因决定。中药及其提取物可使肿瘤细胞自身的基因受到直接性的损伤,从而使其处于病理状态。肿瘤细胞的周期性分裂受到阻碍,基因表达受到抑制,肿瘤细胞停止扩增,发生程序性凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。另外,随着肿瘤的不断生长,其可刺激新生肿瘤血管的出现,并不断为肿瘤的生长提供营养供给。但肿瘤细胞内血管多未成熟,且其血管分支杂乱,极易发生破裂渗漏而为肿瘤的转移提供重要条件。

中药及其提取物可使肿瘤血管的VEGF等生成因子的信号传导途径受到抑制,从而阻碍肿瘤血管生成因子的表达,还可促使血小板因子4等肿瘤血管生成抑制因子的表达[4]。机体内肿瘤细胞存在异型性特征,从一定程度上证实肿瘤细胞存在不同阶段的分化现象,肿瘤干细胞是肿瘤细胞分化发生以及发展的源动力。中药及其提取物可促使肿瘤干细胞恢复正常调节分化机制,不断分化为正常细胞或者终末细胞,降低肿瘤细胞的恶性水平或使其自我更新能力丧失,从而达到抗肿瘤的效果。此外,多数肿瘤细胞存在不同程度的多重耐药性,降低了肿瘤化疗治疗的疗效。肿瘤多重耐药的主要因素为其P-糖蛋白的相关表达,中药及其提取物可使P-糖蛋白在肿瘤细胞膜上的表达水平下调,从而使P-糖蛋白的活性受到抑制,降低肿瘤细胞的耐药性,提升化疗抗肿瘤的疗效[5]。

白花蛇舌草属于茜草科耳草植物,具有利尿消肿、清热解毒的功效,目前广泛应用于治疗肺癌、肝癌、白血病、胃肠道癌等疾病的治疗,并且取得良好的治疗效果。随着研究深入,发现白花蛇舌草的核苷类成分具有较强的抗肿瘤活性。杨鹏等[6]通过24孔培养法及MTT法观察白花蛇舌草核苷对人非小细胞肺癌细胞株A549及人红白血病细胞株K562的抑制作用,结果两种细胞株抑制的最低浓度为100μg/ml及50μg/ml,证明白花蛇舌草核苷有抗肿瘤活性。

本文探讨白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的抑制效果发现,随着白花蛇舌草提取物浓度的上升,其肿瘤抑制率呈不断上升态势,抑制率与对照组相比具有统计学差异。曾永长等[7]采用白花蛇舌草提取物(HDNF)对直结肠癌细胞HCT-116、肺癌细胞A549以及肝癌细胞HepG2进行体外抗肿瘤试验,发现中高剂量白花蛇舌草提取物的抑瘤作用显著。但研究存在癌细胞株涉及范围窄等缺陷性,应进一步进行研究扩充,为中药及其提取物的临床抗肿瘤治疗提供科学可靠的依据。

综上所述,中药及其提取物的抗肿瘤已经得到多数学者的广泛认可,临床上也取得一定的成效。说明中药及其提取物应用于临床抗肿瘤治疗中的前景广阔,值得临床推广应用。

参考文献

[1]刘岩,张春阳,张大田,等.白花蛇舌草提取物诱导人肾癌GRC-1细胞凋亡及抑制血管生成的实验研究[J].山东医药,2011,51(8):97-98.

[2]李文婷,戴紫函,程海波,等.白花蛇舌草活性成分及其协同抗肿瘤机制研究进展[J].世界科学技术-中医药现代化,2015,17(3):670-674.

[3]肖云.白花蛇舌草抗肿瘤成分及抗肿瘤机制的研究进展[J].临床合理用药杂志,2012,05(14):169-171.

[4]李洁,孙静,宋健,等.白花蛇舌草抗肝癌H22小鼠血道转移的实验研究[J].时珍国医国药,2012,23(10):2434-2435.

[5]李洁,李玉基,李博,等.白花蛇舌草抑制Lewis肺癌小鼠自发转移的实验研究[J].中医药导报,2012,18(9):78-79,82.

[6]张鹏,赵启韬,杨培民,等.白花蛇舌草核苷体外抗肿瘤作用实验研究[J].时针国医国药,2012,23(8):1901-1902.

[7]曾永长,梁少瑜,罗佳波,等.白花蛇舌草提取物(HDNF)体内外抗肿瘤实验研究[J].中药材,2011,34(4):594-597.

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)11-0007-01

(收稿日期:2016.04.06)

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