配对t检验法比较3种方法检测奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果

黄宝莹，周臣清，黄玲玲，苏妙仪

（广东产品质量监督检验研究院，广东顺德528000）

配对t检验法比较3种方法检测奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果

黄宝莹，周臣清，黄玲玲，苏妙仪

（广东产品质量监督检验研究院，广东顺德528000）

运用配对t检验法评价3种检测方法对奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果一致性的影响。3种方法分别为国标法、PetrifilmTM测试片法和Baird Parker琼脂+RPF法。结果表明，在103g-1和104g-1两种不同浓度，存在相似杂菌干扰的情况下，3种方法的检测结果无显著差异，一致性较好，具有可交换性。

金黄色葡萄球菌；计数；t检验

0 引言

金黄色葡萄球菌（简称金葡）是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一。金葡可产生耐热肠毒素，长时间加热其毒性也不被破坏［1，2］。我国每年由金葡引起的食物中毒事件屡有报道，被列为食品卫生微生物常规检测项目之一［3］。2014年实施的《GB 29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量》［4］中，允许金葡限量存在。

金葡的定量检测国家标准是以GB 4789.10-2010为依据［5］。根据29921，一般采用第二法平板计数法。SN/T 1985-2007［6］采取的是PetrifilmTM测试片法对金葡进行快速计数。。Baird Parker琼脂+ RPF配方（兔血浆+纤维蛋白原试验）是将RPF加入Baird Parker琼脂中，在菌落周围出现沉淀环即为阳性。本文通过配对t检验法比较三种金葡定量检测方法，比较其是否存在显著性差异，为金葡的计数检验提供参考和依据。

1 实验

1.1 培养基与耗材

Baird-Parker琼脂；BHI肉汤；兔血浆；PetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试片；Baird Parker琼脂+RPF。

1.2 仪器与设备

CL-40M高压灭菌锅；GHP-9160隔水式恒温培养箱；AC2-6S1生物安全柜；玻璃热珠灭菌器；Easymix拍击式均质器；dilumat S电子稀释器。

2 方法

2.1 检测样品制备

两个检测样品均为中国食品药品检定研究院提供的盲样考核中的样品，样品由25 g奶粉和白色球状西林瓶装的金黄色葡萄球菌样品组成，样品的前处理方法为：打开西林瓶，将瓶内小球加入到225 mL稀释液中，充分溶解，然后再将与西林瓶相同编码的奶粉加入上述稀释液中，均质混匀。分别编号为样品I和样品II。

2.2 GB法

参照《GB 4789.10-2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数对样品进行检测。将2.1中制成的1∶10样品匀液，制备10倍系列稀释样品匀液，选择2～3个适宜的稀释度，每个稀释度以0.3，0.3，0.4 mL接种量分别涂布于Baird-Parker平板，（36±1）℃培养45～48 h，对典型菌落进行血浆凝固酶试验确认和计数。

2.3 PetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试片法

测试片法稀释同GB法，选择2～3个适宜的稀释度，吸取1mL加入测试片中，（37±1）℃培养（24±2）h，如出现暗紫红色菌落直接计数，如出现了其他颜色（黑色或绿色）菌落则使用确证反应片，（37±1）℃培养1～3 h，计算粉红色环。

2.4 Baird Parker琼脂+RPF法

融化Baird Parker琼脂，冷却至46℃，加10 mL水溶解附加剂，将附加剂加入加入Baird Parker琼脂，摇匀，即为配制好的Baird Parker琼脂+RPF。RPF法稀释同GB法，选择2～3个适宜的稀释度，吸取1 mL加入培养皿中，加入15～20 mL上述Baird Parker琼脂+RPF，（36±1）℃培养24 h，计数所有黑色，周围有沉淀环（白色光晕）的菌落。

2.5 计数结果

配对t检验法比较3种方法检测奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果：采用上述3种方法，同时检测两个样品，重复10次，运用SPSS软件采用配对t检验对比分析，比较其均值是否存在差异［7］。

3 结果与分析

3.1 3种检测方法对样品I检测结果的影响

GB、测试片和RPF法检测样品I中金黄色葡萄球菌计数结果如表1所示。对计数结果进行配对t检验，检测结果均为2次平行实验结果的平均值。GB法检测结果分别与测试片和RPF法是配对的两组数据，运用SPSS软件按照配对t检验进行分析，设临界水平α=0.05，数据分析结果如表2和表3所示。

表1 3种检测方法对样品I检测结果的影响

由表2可以看出，GB法、测试片法和RPF法对样品1检测结果的均值分别为5 070、5 200和5 250；标准差分别是200.27759，163.29932和158.11388。标准差RPF＜测试片＜GB，说明RPF法检测结果波动性相对小，精密度、再现性较好，有利结果的复现以及适用于实验室之间比对。

由表3可以看出，GB法与测试片法均值之间的差值为-130，差值的标准差为323.35052，t值为-1.271，自由度为9，显著性P为0.235（＞0.05），说明GB法与测试片法检测结果之间的差异不显著。GB法与RPF法均值之间的差值为-180，差值的标准差为274.06406，t值为-2.077，自由度为9，显著性P为0.068（＞0.05），说明GB法与RPF法检测结果之间没有显著性差异。

3.2 3种检测方法对样品II检测结果的影响

3种方法检测样品II中金黄色葡萄球菌计数结果如表4所示。对计数结果进行配对t检验，检测结果均为2次平行实验结果的平均值。GB法检测结果分别与测试片和RPF法是配对的两组数据，运用SPSS软件按照配对t检验进行分析，设临界水平α=0.05，数据分析结果如表5和表6所示。

表2 样品I检测结果基本描述统计量

表3 样品I成对差分检测结果t检验结果

表43 种检测方法对样品II检测结果的影响

表5 样品II检测结果基本描述统计量

由表5可以看出，GB、测试片和RPF法对样品2检测结果的均值分别为10 500、11 800和12 200；标准差分别是1 957.89002、1 686.54809和1 032.79556。标准差RPF＜测试片＜GB，与样品1的标准差规律一致，说明在103g-1和104g-1两种浓度情况下，RPF法检测结果波动性均较小。

由表6可以看出，GB法与测试片法均值之间的差值为-1 300，差值的标准差为2 584.13966，t值为-1.591，自由度为9，显著性P为0.146（＞0.05），说明GB法与测试片法检测结果之间的差异不显著。GB法与RPF法均值之间的差值为-1 700，差值的标准差为2 406.01099，t值为-2.234，自由度为9，显著性P为0.052＞0.05，说明GB法与RPF法检测结果之间没有显著性差异，但显著性P仅稍高于0.05。造成这种差异的原因可能有两个，第一是因为两个盲样中混合了疑似表皮葡萄球菌等在Baird Parker琼脂上与金葡菌落形态、生化特征极为相似的杂菌，对检测造成了一定干扰，GB法在计数典型菌落时不确定度较大。与GB法相比，测试片法和RPF法选择性更高，判读更简单，能更好排除杂菌的干扰，故其结果偏高。第二是样品2的10次重复平行试验中，有的检测结果只有一个梯度落在20～200 g-1之间，使用了文献［5］中公式（1）的计算，有的检测结果有连续两个梯度落在20～200 g-1之间，使用了文献［5］中公式（2）的计算，造成结果差异较大。

表6 样品II成对差分检测结果t检验结果

4 结束语

（1）研究结果发现，在103g-1和104g-1两种不同浓度，存在相似杂菌干扰的情况下，GB法与测试片法、RPF法检测奶粉中金葡计数结果，在统计学上无显著差异，检测结果具有一致性。

（2）和传统GB法相比较，测试片法和RPF法能缩短测试时间，操作程序更加简便，不需要很高的操作技巧，有助于提高微生物实验质量和提高实验室效率，但后二者检测成本较高。在实际的检测工作中，可根据样品的污染程度选择合适的方法，既可提高检测速度，又可确保检测的准确性。

［1］陈广全，张慧媛，曾静.食品安全检测培训教材微生物检测［M］.北京:中国标准出版社，2010：65-75.

［2］王勇.食品中三种致病菌的快速检测方法研究［D］.吉林大学，2014.

［3］梁景涛，谢翊，林秋芬，等.3种食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究［J］.中国卫生检验杂志，2010（4）:790-791.

［4］GB 29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量［S］.北京:中国标准出版社，2013：1-4.

［5］GB 4789.10-2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验［S］.北京:中国标准出版社，2010：1-9.

［6］SN/T 1895-2007食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法Petrifilm-TM测试片法［S］.北京：中国标准出版社，2007：1-5.

［7］黄宝莹，佘之蕴，刘海卿，等.配对t检验法评价3种因素对乳酸菌总数检测结果的影响［J］.中国乳品工业，2015（7）:59-61.

Comparison of three methods forStaphylococcus aureuscounting results in milk powder evaluated by paired t test

HUANG Bao-ying，ZHOU Chen-qing，HUANG Ling-ling，SU Miao-yi
（Guangdong Testing Institute of Product Quality Supervision，Shunde 528300，China）

The paired t test was adopted to evaluate the consistency ofStaphylococcus aureuscounting results in milk powder.Three methods were studied，including GB、PetrifilmTMstaph express count and Baird Parker+RPF.Results showed that three methods had no significant difference under different concentrations and presence of interfering bacteria，which were interchangeable.

Staphylococcus aureus；counting；the paired t test

TS252.7

A

1001-2230（2016）08-0055-03

2016-03-10

黄宝莹（1986-），女，工程师，研究方向为食品安全与检测。