龙脷叶中氨基酸的成分分析

谭建宁　马雯芳　李耀华　广西中医药大学　530001　南宁市明秀东路179号

龙脷叶中氨基酸的成分分析

谭建宁马雯芳李耀华广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

摘要目的：对龙脷叶中氨基酸成分进行分析。方法：采用TLC法对龙脷叶中L-谷氨酸、精氨酸、脯氨酸、亮氨酸进行薄层色谱分析；采用日立L-8800型全自动氨基酸分析仪分析龙脷叶中18种氨基酸。结果：龙脷叶中游离氨基酸薄层鉴别分离度好，专属性强；龙脷叶中氨基酸总量达16.32%，其中谷氨酸含量最高（2.31%），蛋氨酸含量最低（0.06%）。结论：本法简便可行，结果准确，重复性好，可用于龙脷叶的质量研究。

关键词龙脷叶；氨基酸；TLC；含量测定

龙脷叶Sauropus spatuli folius Beille为大戟科植物，主要分布在广西、广东、福建等地，具有清肺热、抗菌、止咳作用，壮族民间常用于治疗急性支气管炎、上呼吸道感染、支气管哮喘，是临床常用的壮药［1］。龙脷叶含有皂苷、甾体类、氨基酸和脂肪酸等成分［2-3］。氨基酸是一种重要生物活性物质［4］，其中组氨酸、苏氨酸的缺乏可使小鼠对伤寒沙门氏菌的易感性增高，赖氨酸缺乏可使小鼠炭疽芽胞杆菌的抵抗力下降，而皮下注射半胱氨酸可增强动物的某些非特异性免疫功能及增强对可产气荚膜梭状芽胞杆菌、葡萄糖球菌毒素的抵抗力［5］。氨基酸是龙脷叶的抗菌活性成分，目前对龙脷叶中氨基酸成分的研究尚未见报道。本实验对龙脷叶中L-谷氨酸、精氨酸、脯氨酸、亮氨酸进行薄层色谱分析，并采用全自动氨基酸分析仪测定龙脷叶中氨基酸的含量，旨为进一步研究龙脷叶的活性成分提供实验基础。

1　实验材料

1.1仪器L-8800型全自动氨基酸分析仪（日立）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯公司）；CDUPT型超纯水机（成都超纯科技有限公司）；KQ5200B型超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司）；DHG-9240A型电热恒温干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）；FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2试药L-谷氨酸对照品（批号：111576-200201，供鉴定用）；精氨酸对照品 （批号：140685-201305，供含量测定用）；脯氨酸对照品（批号：111659-200301，供鉴定用）；亮氨酸对照品（批号：110876-200204，供鉴定用）；龙脷叶对照药材（批号：121623-201001，供鉴定用）；十二烷基硫酸钠（SDS）、正丁醇、正己烷及其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

1.3药材龙脷叶于2014年10月购自玉林药材批发市场，经广西中医药研究院严克俭助理研究员鉴定为大戟科植物龙脷叶 Sauropus spatuli folius Beille的干燥叶。5批龙脷叶产地分别为广西靖西（批号：141001、141002），玉林（批号：141004）和梧州（批号：141003、141005）。

2　实验方法

2.1对照品溶液的制备分别取L-谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、亮氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含0.50 mg的溶液，作为龙脷叶薄层色谱对照品溶液。再分别取以上各氨基酸对照品0.03～0.09 g，精密称定，置同一个500 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。临用时精密吸取2.0 ml 置10 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。作为氨基酸成分分析的对照品溶液。

2.2对照药材溶液的制备取龙脷叶对照药材1.0 g，精密称定，置于50 ml具塞锥形瓶中，加入适量水，超声提取40 min，滤过，滤液蒸干，加水定容至5 ml，作为龙脷叶对照药材溶液。

2.3供试品溶液的制备取龙脷叶粉末（过20目筛）1.0 g，精密称定，置于50 ml具塞锥形瓶中，以水为溶剂，超声提取40 min，滤过，滤液蒸干，加水定容至5 ml，作为龙脷叶薄层色谱供试品溶液。另取龙脷叶药材适量，于65℃干燥至恒重后进行常规酸水解处理。精密称定药材粗粉（过100目筛）0.4 g，置水解管中，精密加入6 mol/L HCl溶液20 ml，抽真空状态下封管，置于110℃烘箱中水解24 h，取出，冷却，滤过，精密量取滤液1 ml蒸干。残留物用去离子水溶解，再蒸干，反复进行2次，最后残留物用去离子水溶解定容至25 ml，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。作为氨基酸成分分析的供试品溶液。

2.410%微乳液的制备取十二烷基硫酸钠（SDS）、正丁醇、正己烷和水，按3.0∶14.0∶2.0∶2.2的比例混匀，即得。

2.5龙脷叶的薄层色谱分析参照薄层色谱法［6］试验，分别精密吸取供试品溶液、氨基酸对照品溶液、龙脷叶对照药材溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板（20 cm× 20 cm），以10%微乳液为展开剂展开，取出，晾干，喷以2%茚三酮乙醇试液（临用配制），电吹风热风吹至斑点显色清晰。

2.6氨基酸成分分析［7-8］采用日立L-8800型全自动氨基酸分析仪。分析柱：阳离子交换树脂柱（4.6 mm×60 mm，3 μm）；分析时间：45 min；缓冲液流速：0.4 ml/min（缓冲液泵压力8～11.5 Pa），茚三酮流速：0.3 ml/min（茚三酮泵压力0.9～1.2 kPa）；缓冲液改变次数5次；柱温：56℃；氮气压力：20 kPa；供试品和对照品溶液进样量均为20 μl。

3　结果

3.1龙脷叶中游离氨基酸薄层色谱分析结果见图1。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

基金项目：广西自然科学基金项目（编号：2013GXNSFAA019171）；广西中医药民族医药继承创新工程壮瑶医药研究与开发项目（编号：GZZY13-10）

图1　龙脷叶中游离氨基酸TLC图

3.2龙脷叶中氨基酸成分的分析结果按照2.6项测定条件，对龙脷叶中18种基础氨基酸进行分析测定，结果见表1。

表1　龙脷叶中18种基础氨基酸的测定结果

4　讨论

龙脷叶中含有蛋氨酸（0.06%）、缬氨酸（1.07%）、苏氨酸（0.82%）、异亮氨酸（0.84%）、苯丙氨酸（1.07%）、亮氨酸（1.58%）、赖氨酸（0.62%）等7种人体必需氨基酸，含有组氨酸（0.27%）、胱氨酸（0.08%）、络氨酸（0.58%）、精氨酸（1.29%）等4种半必需氨基酸。龙脷叶总氨基酸总量达16.32%，表明龙脷叶具有较高的药用和食用价值。

龙脷叶中氨基酸成分的薄层色谱以微乳系统作为展开剂，可以有效克服由于氨基酸成分水溶性强、极性大造成斑点拖尾的缺点。在预试验中，本课题组对龙脷叶中氨基酸的薄层色谱展开系统进行筛选，分别考察了正丁醇∶冰醋酸∶水（4∶1∶1）、氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）、10%微乳液、30%微乳液、60%微乳液等多种不同展开系统，其中以10%微乳液的分离效果最好，斑点集中清晰，比移值适中，专属性强。

氨基酸是构成生物体蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动密切相关，尤与人类健康有着紧密的关系。本研究采用全自动氨基酸分析仪分析测定了龙脷叶中18种基础氨基酸的含量，为龙脷叶的质量评价和营养评价提供初步的基础数据。

参考文献

［1］广西壮族自治区中医药研究所.广西药用植物名录［M］.南宁：广西人民出版社，1986：198.

［2］广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准［M］.广州：广东科学技术出版社，2004：70.

［3］莫惠雯，曾艳婷，韦建华，等.龙脷叶挥发油化学成分的GC-MS分析［J］.广西中医药，2015，38（5）：70-72.

［4］Egydio P M，Catarina C S，Floha E S，et al.Free amino acid composition of Annona（Annonaceae）fruitspecies of economic interest［J］.Industrial Crops and Products，2013，45：373-376.

［5］徐琪寿.氨基酸药理学研究进展［J］.氨基酸和生物资源，1996，18（1）：30-32.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：附录34-35.

［7］章丽，刘松雁.氨基酸测定方法的研究进展［J］.河北化工，2009，32（5）：27-29.

［8］徐瑾，叶爱英，丁敬敏.百合中氨基酸组成测定与营养功能分析［J］.氨基酸和生物资源，2011，33（3）：18-20.

（2016-05-03收稿/编辑陈明伟）

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1003-0719（2016）03-0076-03