胃贲门腺癌p-cadherin表达与临床特征的相关性研究

甘亚平

(湖北科技学院基础医学院，湖北 咸宁 437100)



胃贲门腺癌p-cadherin表达与临床特征的相关性研究

甘亚平

(湖北科技学院基础医学院，湖北 咸宁 437100)

摘要：目的 通过检测p-钙粘蛋白(p-cadherin)在胃贲门腺癌及癌旁正常组织表达情况，探讨p-cadherin蛋白在胃癌中表达是否与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、临床分期以及淋巴结转移等临床相关病理参数有关联。方法 采用免疫组化技术，检测121例胃贲门腺癌及40例相应癌旁正常胃黏膜p-cadherin蛋白表达情况。结果 p-cadherin蛋白在正常胃黏膜组织为阴性表达；在中高分化胃腺癌组织阳性表达较高(22/24,92%)，高于低分化腺癌(58/79,73%)，与粘液腺癌及印戒细胞癌(5/18,28%)相比有统计学差异(P<0.01)； p-cadherin表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床肿瘤分期、淋巴结转移差异无统计学意义(P>0.05)。结论 p-cadherin蛋白的表达与胃贲门腺癌分化程度呈明显相关性。

关键词：胃腺癌；p-cadherin；免疫组织化学

胃癌是目前世界发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，也是我国目前最常见的十大恶性肿瘤之一，预后往往很差，严重威胁着人们的健康，而胃癌的发生是一个多因素多步骤的过程，到目前真正的机制尚未明确，亦缺乏灵敏度和特异性都很高的肿瘤生物标记[1]。不断有研究发很多细胞-细胞粘附分子的表达或功能的变化，可牵涉肿瘤进展的很多步骤[2]。

钙粘蛋白是细胞与细胞粘附分子的一类，是一个横跨膜糖蛋白家族，其中包括上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经钙粘蛋白(N-cadherin)和胎盘钙粘蛋白(P-cadherin)[3]。p-cadherin基因(CDH3)和E-cadherin基因 (CDH1)都位于16q22.1，CDH3 32 kb是CDH1的上游基因[4]。E-cadherin的表达与肿瘤的发生、发展的相关性已做了很多的研究，但p-cadherin在肿瘤中研究相对较少。本实验检测p-cadherin在胃贲门腺癌中的表达，分析其表达与肿瘤的分化、分期、淋巴结转移等临床病理参数的相关性。

1资料与方法

1.1研究对象收集121例胃贲门癌标本。标本来自市人民医院 2009—2012年外科切除的胃贲门癌病例，年龄32～80岁，平均62岁，其中女29例，男92例，男女比例3.17∶1。所有胃贲门腺癌标本严格按最新WHO胃癌的诊疗标准、经过几级病理医师阅片签字确诊，并进行肿瘤的分级和综合临床病历资料进行临床分期。通过对每例所有肿瘤标本阅片，每例选择结构清楚、病变典型、符合实验条件的蜡块为本实验研究对象；并选择其中40个病例癌旁正常黏膜组织蜡块同时进行检测。临床病理资料参数有：性别、年龄、肿瘤的大小、组织学分类分级，淋巴结转移，临床分期TNM。

1.2主要试剂小鼠抗人p-cadherin单克隆抗体、抗小鼠型二抗，购自美国BD公司产品，p-cadherin克隆号：56/P-Cadherin 。

1.3方法121胃癌病例及部分对应的癌旁正常黏膜组织进行P-cadherin免疫组化染色检测。用已知乳腺癌阳性染色的标本作为阳性对照，以PBS代替I抗为阴性对照。

1.4结果判定每张切片免疫组化阳性细胞的染色强度按无着色、淡棕色、黄棕色和棕褐色分别计分为0、1、2、3分；按免疫组化阳性细胞面积分别计分为0(0%)、1(1%～25%)、2(26%～50%)、3(>51%)。然后根据两项评分之积判断结果：0分为阴性(-)，≤3分为弱阳性(+)，4～6分为中度阳性(++)，>6分为强阳性(+++)。P-cadherin表达病例分组：≤3分为阴性病例，≥4分为阳性病例。

1.5统计学方法应用统计软件SPSS 16.0处理数据，分类变量相关性的分析使用χ2检验，P值≤0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1胃组织p-cadherin蛋白的表达胃组织p-cadherin蛋白免疫组织化学染色，结果见图1(封三)。

2.1.140例癌旁正常黏膜p-cadherin在贲门癌旁相对正常被覆鳞状上皮的基底细胞及近基底的棘细胞层有较强的表达，见图①(封三)，在胃柱状黏膜上皮及腺上皮基本没有表达，少数在腺体的颈部部分细胞有弱表达，见图②(封三)。

2.1.2121例胃癌标本85例(70.2%)显示中度到强的膜染色，其中，在中高分化腺癌肿瘤区，大部分病例呈中度到强的膜染色，见图③(封三)。在其余36例(29.8%)呈弱阳性或阴性，见图④(封三)。其中在低分化和粘液及印戒细胞癌中，大部分肿瘤区呈阴性或局灶性弱染色，见图⑤(封三)。在同一低分化腺癌，有腺管形成的区域明显表达阳性，而在无腺管形成的细胞区域明显表达低下或阴性表达，见图⑥(封三)。

2.2p-cadherin蛋白表达与患者资料的关系表1通过对P-cadherin表达数据总结了与临床病理参数的关系，p-cadherin表达与肿瘤细胞分化程度相关，中高分化、低分化、粘液和印戒细胞癌之间p-cadherin表达具有统计学差异(P<0.001)。但是，p-cadherin的表达与年龄、性别、淋巴结转移、临床TNM分期在统计学上没发现有显著相关性。

表1　p-cadherin蛋白表达与患者临床病理学参数之间的关系

3讨论

免疫组织化学检测p-cadherin在胃贲门癌旁相对正常被覆鳞状上皮的基底细胞及近基底的棘层细胞有较强的表达，其下的腺体阴性表达，这与以前的研究[5]，在人体正常的被覆复层上皮基底层及基底旁表达阳性结果一致，可以在一定程度上反应细胞的增殖能力。在本实验胃黏膜被覆鳞状上皮p-cadherin阳性染色效果很好，可作为阳性表达对照组织。在胃被覆的单层柱状黏膜上皮及腺体p-cadherin基本表达阴性，少数在腺体的颈部增殖区部分细胞有弱表达，与以前研究结果一致，并且有实验验证，正常胃黏膜p-cadherin蛋白的阴性表达是与其CDH3基因启动子正常状态下甲基化修饰相关[6,7]。

在本实验，在高分化管状腺癌肿瘤区，大部分呈完整腺管排列的肿瘤细胞呈中度到强的膜染色，p-cadherin表达明显上调。有研究显示[7，8]，在胃癌中，CDH3基因启动子异常去甲基化是经常发生的分子事件，在中高分化胃癌致癌作用中，P-钙粘蛋白的表达可能起主要的作用；最近，在P-cadherin超表达肿瘤模型中，一种新的和高度选择性的人类单克隆抗p-钙粘蛋白的produced-PF-03732010，具有显示在不同的方面的抗肿瘤活性[9]，有望作为p-cadherin高表达肿瘤患者新的生物治疗制剂。

在本实验，在低分化腺癌、粘液及印戒细胞癌中，大部分肿瘤区呈阴性或局灶性弱染色，粘液腺癌及印戒细胞癌基本阴性表达。更具特点的是在同一低分化腺癌中，肿瘤有异质性，少数肿瘤细胞分化形成腺管的区域明显阳性表达，而在围绕腺管的大片分化低无腺体形成的细胞区域明显表达很弱或呈阴性，显示当肿瘤细胞进一步演进、出现异质性、肿瘤细胞分化差时，P-cadherin表达降低。提示在癌变过程中，P-cadherin表达调控程序可能不只是一种机制，如CDH3基因的甲基化和去甲基化存在，可能还受其他不同的程序调控，如转录、翻译、P-cadherin和E-cadherin与 p120ctn相互干扰结合等信号通路的异常[10,11]。Shimomura 等描述[12]，P63(p53家族有关的转录因子)是一个调节P-cadherin表达的关键点，可直接转录调控CDH3基因。

综上所述，P-cadherin在胃被覆正常鳞状上皮基底层及基底旁细胞明显表达，在正常柱状上皮被覆的胃黏膜及腺体无表达。在胃贲门腺癌病例，p-cadherin的表达与肿瘤的类型和分化程度呈明显的相关性，中高分化管状腺癌表达较强，低分化癌和粘液印戒细胞癌表达弱或阴性。胃癌肿瘤的异质性很大，早期诊断和有效治疗方案均存在很多盲区，通过本实验，有望为寻找胃癌治疗的生物学制剂和选择不同的患者因人而治的方案提供一定的可靠形态数据和临床数据，在以后的研究中将进一步探讨p-cadherin表达转录调控的相关机制。

参考文献：

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Association of p-cadherin Protein Expression with Clinical Pathological Parameters in Carcinoma of Gastric Cardia

GAN Ya-ping

(SchoolofBasicMedicine，HubeiUniversityofScienceandTechnology,XianningHubei437100,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the expression of p-cadherin protein in gastric cardia adenocarcinoma its correlation with clinical pathological parameters，such as patient age，sex，tumor size，lymph node metastasis，histological type，grade and pTNM stage. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of p-cadherin protein in 121 cases of gastric cardia adenocarcinoma and 40 cases of adjacent normal gastric mucosa.Results The positive rate of P-cadherin protein expression in well-middle differentiated gastric adenocarcinoma was 92% (22/24)，higher than that in poor differentiated adenocarcinoma (73%) or that in mucinous adenocarcinoma and signet ring cell carcinoma (28%)，and the differences were statistically significant (P<0.001).However，P-cadherin protein expression was not correlated with patient sex，age，tumor size,lymph node metastasis and TNM stage(P>0.05).Conclusion The expression P-cadherin protein is correlated with the differentiation degree of gastric cardia adenocarcinoma.

KEY WORDS：Gastric adenocarcinoma；p-cadherin；Immunohistochemistry

中图分类号：R735.2

文献标识码：A

文章编号：2095-4646(2016)03-0194-03

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.03.0194

(收稿日期：2016-02-20)