半夏厚朴汤加味对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜血流量及脂质过氧化损伤的影响研究

李宁宁，郭　海，雷延飞

(河南医学高等专科学校，河南 郑州 451191)



半夏厚朴汤加味对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜血流量及脂质过氧化损伤的影响研究

李宁宁，郭海，雷延飞

(河南医学高等专科学校，河南 郑州 451191)

[摘要]目的观察半夏厚朴汤加味对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜血流量及脂质过氧化损伤的影响，探讨其作用机制。方法随机选取18只大鼠作为正常组，90只大鼠用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍制作CAG模型。将造模成功后CAG大鼠随机分为模型组、维酶素组、半夏厚朴汤加味高剂量组、半夏厚朴汤加味中剂量组、半夏厚朴汤加味低剂量组，每组18只。维酶素组给予维酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚朴汤加味高、中、低剂量组分别给予半夏厚朴汤水煎剂10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，连续10周。检测各组大鼠胃黏膜血流量、胃液游离酸度和总酸度及胃蛋白酶活性，胃黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果模型组大鼠胃黏膜血流量、胃液游离酸度和总酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性均显著低于正常组(P均<0.05)，胃黏膜组织中MDA活性明显高于正常组(P<0.05)；维酶素组和半夏厚朴汤各剂量组大鼠胃黏膜血流量、胃液游离酸度和总酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性均显著均显著高于模型组(P均<0.05)，MDA活性均明显低于模型组(P均<0.05)，且高、中剂量组效果优于低剂量组(P均<0.05)。结论半夏厚朴汤加味可能通过增加胃黏膜血流量、调节胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂质过氧化损伤而起保护和修复胃黏膜作用。

[关键词]慢性萎缩性胃炎；半夏厚朴汤加味；大鼠

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是以胃黏膜固有腺体萎缩和肠上皮化生及不典型增生为病理特征的慢性炎症过程，具有发病缓慢、病势缠绵、迁延难愈的特点，因其癌变率较高而被WHO列为癌前病变[1]。本研究以中医传统理论为基础和指导，探讨了半夏厚朴汤加味对CAG模型大鼠胃黏膜血流量及脂质过氧化损伤指标的影响及其作用机制，旨在为半夏厚朴汤加味在临床上治疗CAG提供实验依据。

1实验资料

1.1实验动物清洁级SD大鼠108只，雌雄各半，体质量200～220 g，山东鲁抗医药股份有限公司提供，动物合格证号：SCXK(鲁)20130001。

1.2药物与试剂半夏厚朴汤加味由半夏、厚朴、茯苓、生姜、苏叶、黄芪、白术等药物组成，购于河南省第二人民医院，各味药材粉碎，加水适量，超声辅助提取2次，每次30 min，经浓缩后，制备为浓度分别为每毫升含药材250，500，1 000 mg的供试液，冰箱保存备用，灌胃给药前复温。维酶素片，河南环海药业有限公司提供，捣碎，用蒸馏水配成混悬液，灌胃给药。N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)，由百灵威科技有限公司提供，每3 d用电子天平称取MNNG 2 g，以蒸馏水2 000 mL稀释配成浓度1 mg/mL的保存液，4 ℃冰箱避光保存。每日把保存液稀释为100 μg/mL作为CAG模型大鼠的饮水。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。

1.3造模与分组给药随机选取18只大鼠作为正常组，其余90只大鼠参照文献[2]方法进行CAG造模。大鼠自由饮用上述MNNG稀释液，饮用瓶外涂黑色漆以避光，瓶内液体每日更换，共8周；同时每只每周一、周四各给予40%乙醇灌胃1次，每只2 mL，共8周。将造模成功后CAG大鼠随机分为模型组、维酶素组、半夏厚朴汤加味高剂量组、半夏厚朴汤加味中剂量组、半夏厚朴汤加味低剂量组，每组18只。维酶素组给予维酶素0.28 g/kg灌胃，半夏厚朴汤加味高、中、低剂量组分别给予半夏厚朴汤水煎剂10.0 g/kg、5.0 g/kg、2.5 g/kg灌胃，均2 mL/只，1次/d，连续10周。

1.4观察指标

1.4.1大鼠一般状态实验过程中定期观察所有大鼠的体质量、精神状态、活动、进食、毛色及腹水情况等。

1.4.2胃黏膜血流量给药10周后，每组随机取6只大鼠，参照文献[3]方法，用中性红清除法测胃黏膜血流量。

1.4.3胃液酸度与胃蛋白酶活性每组剩余的12只大鼠禁食12 h后麻醉，打开腹腔结扎幽门，向胃内注射生理盐水2 mL，15 min后摘除全胃，收集胃液于离心管。胃液离心后，二步滴定法[3]测定胃液游离酸度和胃液总酸度，麦氏法[4]测定胃蛋白酶活性。

1.4.4胃黏膜病理改变情况及SOD、MDA、GSH-Px活性将1.4.3步骤所得鼠胃进行常规解剖，在胃体及胃窦小弯处取1.5 cm×1.0 cm组织块，制备病理切片，HE染色，显微镜下观察胃黏膜病理改变情况。其余目检胃黏膜损伤情况后，蒸馏水洗净胃内容物，滤纸吸干水分后，加入适量蒸馏水用超声波匀浆器制成胃黏膜匀浆，严格按照试剂盒说明书步骤测定胃黏膜组织中SOD、MDA、GSH-Px活性。

2结果

2.1各组大鼠一般状态模型组大鼠活动和食量减少，被毛蓬松，消瘦。维酶素组及半夏厚朴汤加味低剂量组大鼠体质量稍轻，被毛稍微散乱，但较洁净。半夏厚朴汤加味高、中剂量组大鼠食量较好，活动灵活，体质量接近正常组。

2.2各组胃黏膜血流量正常组为(26.56±5.25)mL/(kg·h)，模型组为(12.27±1.47)mL/(kg·h)，维酶素组为(16.49±2.35)mL/(kg·h)，半夏厚朴汤加味低剂量组为(17.42±4.57)mL/(kg·h)，半夏厚朴汤中剂量组为(23.54±5.12)mL/(kg·h)，半夏厚朴汤高剂量组为(26.21±4.82)mL/(kg·h)。模型组大鼠胃黏膜血流量显著低于正常组(P<0.05)；维酶素组和半夏厚朴汤各剂量组大鼠胃黏膜血流量均显著高于模型组(P均<0.05)，且半夏厚朴汤中、高剂量组均明显高于低剂量组(P均<0.05)。

2.3各组胃液酸度与胃蛋白酶活性模型组大鼠胃液游离酸度和总酸度及胃蛋白酶活性均明显低于正常组(P均<0.05)；维酶素组和半夏厚朴汤各剂量组大鼠胃液游离酸度和总酸度及胃蛋白酶活性均明显高于模型组(P均<0.05)，且半夏厚朴汤中、高剂量组均明显高于低剂量组(P均<0.05)。见表1。

表1　各组胃液酸度与胃蛋白酶活性±s)

注：①与正常组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05；③与半夏厚朴汤低剂量组比较，P<0.05。

2.4各组病理表现正常组大鼠胃黏膜完整，上皮细胞排列整齐，腺体形态规则，排列紧密。模型组大鼠胃黏膜层明显变薄，腺体数目显著减少，体积缩小，腺体排列紊乱，固有层可见大量淋巴细胞浸润，少数大鼠可见肠上皮化生。维酶素组大鼠胃黏膜可见点状炎细胞浸润，腺体轻度萎缩，排列整齐。半夏厚朴汤加味低剂量组胃黏膜结构轻度紊乱，腺体轻度萎缩，黏膜层有少量炎细胞浸润；高、中剂量组胃黏膜上皮排列整齐，腺体大小形态较一致，腺体萎缩不明显。病理表现见图1～5。

2.5各组胃黏膜组织中SOD、MDA、GSH-Px活性模型组大鼠胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性明显低于正常组(P均<0.05)，MDA活性明显高于正常组(P<0.05)；维酶素组和半夏厚朴汤各剂量组大鼠胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性均明显高于模型组(P均<0.05)，MDA活性均明显低于模型组(P均<0.05)，且半夏厚朴汤中、高剂量组改善情况均明显优于低剂量组(P均<0.05)。见表2。

图1　正常组光镜下胃黏膜表现(HE染色，×400)

图2　模型组光镜下胃黏膜表现(HE染色，×400)

图3　半夏厚朴汤加味低剂量组光镜下胃黏膜表现(HE染色，×400)

图4　半夏厚朴汤加味中剂量组光镜下胃黏膜表现(HE染色，×400)

图5　半夏厚朴汤加味高剂量组光镜下胃黏膜表现(HE染色，×400)

表2　各组胃黏膜组织中SOD、MDA、GSH-Px活性

注：①与正常组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05；③与半夏厚朴汤低剂量组比较，P<0.05。

3讨论

CAG以病情迁延、长期消化不良为特征，其发生与胃黏膜血流量的减少关系密切，而良好的血液循环可为胃黏膜提供必需的营养，去除代谢有害物质，是保证胃黏膜完整性及维护其屏障功能的保障[5]。目前该病具体发病原因尚未完全阐明，但已发现CAG的形成与氧自由基损伤、脂质过氧化物作用关系密切[6-7]。SOD和GSH-Px是体内自由基清除系统中重要的酶，可清除H2O2和O2-，保护细胞不受自由基的损伤，二者活性可在一定程度上反映机体清除自由基的能力。MDA是脂质过氧化的最终分解产物，可与脂质过氧化中间产物自由基损伤膜结构，改变膜成分的活性及抗原性而影响膜的正常功能，所以MDA水平是脂质过氧化物损伤效应的特征指标[8]。目前西医治疗CAG主要是抗菌、保护胃黏膜、增强胃动力药物联合运用，但疗效不佳，而且病情容易反复[9-10]。

CAG属于中医学 “胃脘痛” “痞满”“腹胀”等范畴，病机多为虚实夹杂，以脾胃虚弱、肝肾亏虚为本，湿热、邪毒、血脉瘀阻为标[11]。半夏厚朴汤中半夏、厚朴理气和胃、消痞除满，生姜、紫苏行气和胃，茯苓健脾祛湿，加味黄芪、白术益气健脾，鼓舞中气，诸药合用，共奏辛开苦降、行气化浊、和胃调脾、补中益气、梳理中焦之效，通则不痛，中气畅通，痛止痞消。

本实验结果显示，模型组大鼠胃黏膜血流量、胃液游离酸度和总酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性均显著低于正常组，胃黏膜组织中MDA活性明显高于正常组；维酶素组和半夏厚朴汤各剂量组大鼠胃黏膜血流量、胃液游离酸度和总酸度、胃蛋白酶活性及胃黏膜组织中SOD、GSH-Px活性均显著均显著高于模型组，MDA活性均明显低于模型组，且高、中剂量组效果优于低剂量组。提示半夏厚朴汤加味干预，可增加CAG模型大鼠胃黏膜血流量，改善胃黏膜分泌功能，减轻脂质过氧化损伤，逆转胃黏膜萎缩，达到修复胃黏膜的目的。

综上所述，半夏厚朴汤加味可能通过增加胃黏膜血流量、调节胃酸和胃蛋白酶分泌及抗脂质过氧化损伤而起保护和修复胃黏膜作用，这为半夏厚朴汤加味在临床上治疗CAG提供了理论和实验基础。

[参考文献]

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[9]刘华汉,周余攀,陈世禧. 养胃舒胶囊治疗老年慢性萎缩性胃炎的疗效观察[J]. 中医药导报,2013,19(2):67-68

[10] 王权华. 慢性萎缩性胃炎的胃黏膜保护机制的研究进展[J]. 临床医学工程,2011,18(7):1146-1174

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Study on the effect of Banxia Houpo Decoction on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis

LI Ningning,GUO Hai, LEI Yanfei

(Henan Medical College,Zhengzhou 451191,Henan, China)

Abstract:0bjective It is to observe the effect of Banxia Houpo Decoction (BHD) on blood flow and lipid peroxidation injury in gastric mucosa in rats with chronic atrophic gastritis(CAG), and to investigate the mechanism. Methods 18 rats were randomly selected as normal group, another 90 rats were selected to establish CAG model with N methyl N nitro N nitrosoguanidine．The successful models were randomly divided into model group, Vitacoenzyme group treated with Vitacoenzyme 0.28 g/kg, high, medium and low dose of BHD groups treated with 10.0, 5.0, 2.5 g/kg BHD respectively, 18 rats in each group. All the rats were treated once per day and for 10 weeks. After 10 weeks, secretion of gastric acid and pepsin activity, gastric mucosal blood flow(GMBF), the SOD, MDA and GSH in gastric mlucosa were observed or detected. Results The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly lower while that of MDA was higher in model group than those in normal group (P all<0.05). The secretion of gastric acid and pepsin activity and the levels of GMBF, SOD, GSH-Px in gastric mucosal were significantly higher while that of MDA was lower in Vitacoenzyme group and BHD groups than those in model group (P all<0.05), and the decrease or increase were more significant in high dose group and medium group than that in low dose group (P<0.05). Conclusion Banxia Houpo Decoction has good curative effect on CAG, its mechanism may be related with improving blood circulation of gastric mucosa, strengthening gastric mucosl protective screen, regulating gastric acid and pepsin activity, resisting the free radical imp airment and so on.

Key words:chronica trophic gastritis; Banxia Houpo Decoction; Chinese medicine treatment; raexperiemntal study

[作者简介]李宁宁，女，硕士，讲师，主要从事胃腺癌的防治研究工作。

[基金项目]河南省科技攻关计划项目(142102310089)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.20.002

[中图分类号]R-332

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)20-2170-04

[收稿日期]2015-12-02