金水宝胶囊联合西药对老年COPD稳定期患者外周血Treg表达的影响

黄　芪　黄　鸿　刘先玲

重庆三峡中心医院老年科(万州404000)



金水宝胶囊联合西药对老年COPD稳定期患者外周血Treg表达的影响

黄芪黄鸿刘先玲

重庆三峡中心医院老年科(万州404000)

摘要目的：探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例及中成药金水宝胶囊干预后的影响。方法：选择在我院老年科住院部及门诊的COPD稳定期患者76例，随机分为治疗组41例和对照组35例，两组在对症治疗的基础上，治疗组加用金水宝胶囊、盐酸氨溴索片口服，1个疗程为4周，对照组仅加用盐酸氨溴索片口服，用流式细胞仪检测两组在治疗前后外周血中Treg表达比例的变化，并且选择同期30例体检正常的老年人作为健康组。结果：病例组的外周血Treg比例在治疗前均高于健康组(P<0.05)，治疗组的外周血Treg比例在治疗后低于对照组(P<0.05)。结论：Treg细胞在老年COPD发病过程中有重要作用，中药干预能改善稳定期COPD老年患者体内存在免疫功能紊乱或异常。

主题词肺疾病，慢性阻塞性/中西医结合疗法金水宝胶囊老年人

慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的发病机制与遗传易感性、氧化/抗氧化、气道炎症等有关，但至今任未真正阐明。T细胞中可以抑制免疫应答反应的细胞群包括CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)[1-2]，向下调节CD4+、CD25+T细胞活化与增殖能力，从而免疫负调节功能。在机体内环境稳态中的作用，维持、过激免疫应答及改善自身免疫等。本研究通过检测中药治疗前后外周血中Treg的水平表达变化，从而探讨中药改善老年患者体内存在免疫功能紊乱或异常状态的重要性。

临床资料选择2014年3月至2015年8月间在我院老年科收治住院和门诊随访的老年COPD稳定期患者共76例作为病例组，随机分为治疗组41例，其中男23例，女18例，年龄62～86岁平均70.7±6.8岁；对照组35例，其中男19例，女16例，年龄60～82岁平均68.6±7.1岁。选择同期在我院体检中心体检正常的老年人30例为健康组，其中男17例，女13例，年龄63～80岁，平均66.7±5.7岁。临床纳入标准：诊断《慢性阻塞性肺疾病诊治指南》(2007年修订版)中关于稳定期的诊断标准[3]。中医标准《中医内科常见病诊疗指南-中医病证部分》“肺胀病”进行，稳定期分为：肺脾气虚证、肺肾气虚证、肺肾气阴两虚证，稳定期以喘息、气短，乏力或自汗，动则加重为主要表现，临床辨证大多数符合肺肾气虚证的特点[4]。

治疗方法两组在一般的对症处理、护理、氧疗等方面相同。针对慢性咳嗽咳痰等症状祛痰镇咳等常规治疗；针对气短呼吸困难等症状支气管扩张剂，必要时加用糖皮质激素。两组在院期间均长期低流量吸氧以改善氧饱和度。治疗组加用金水宝胶囊(成分：发酵虫草菌粉(Cs-4)，国药准字：Z108900。0.33g/颗，3颗/次，3次/d)、盐酸氨溴索片(30mg/次，3次/d)口服，1个疗程为4周，对照组仅加用盐酸氨溴索片口服。

观察指标Treg的测定：Foxp3及淋巴细胞亚群的测定采用FACS Calibur流式细胞仪(美国，BD)进行检测。各组受试者均于清晨空腹状态下使用抗凝负压真空采血管收集外周静脉血3mL，使用淋巴细胞分离液分离的静脉血外周单个核细胞(PMBC)，且标本1h内进行。所使用之单克隆抗体(抗CD4-PerCP、CD25-FITC和各阴性对照IgG)均使用美国BD公司产品，所使用之Foxp3-PE染色缓冲液均美国eBioscience公司产品。取两支洁净试管，加入分离后标本液100uL，其次，加入抗人CD4-PerCP/CD25-FITC抗体及各自阴性同型对照IgG各10uL，混匀，避光放置30min(室温)；加入红细胞裂解液，避光孵育，用PBS清洗，离心弃上清；然后加入1mL固定/破膜应用液，摇匀避光孵育15min；加入1mL破膜缓冲液，室温静置20min，离心弃上清；最后，各试管中均加入5uL的抗Foxp3-PE单抗及各自阴性同型对照IgG，摇匀，4℃避光静置30min，用2mL破膜缓冲液清洗3遍，分别离心，弃掉上清，加入500uL PBS(4℃预冷)后摇匀上机，以FAC Sort流式细胞仪分选细胞、在所得到的FSC-SSC点图上选择理想淋巴细胞群，以Cell Quest软件分析所得数据，记录荧光抗体染色阳性细胞的百分比结果。

治疗结果确定各组的基本资料包括各组的性别、年龄、淋巴细胞以及CD4+CD25+细胞的比例间差异均无统计学意义(P>0.05)，但病例组在治疗前的CD4+CD25+Foxp3+细胞比例与健康组的差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1　各组治疗前外周血中调节性T细胞的比例分布

注：与健康组比较，△P<0.05

治疗后病例组间调节性T细胞比例的比较两组受检者外周血中淋巴细胞、CD4+/CD25+细胞比例，治疗组与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)，但CD4+CD25+Foxp3+细胞比例，治疗组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2　病例组治疗后血清中调节性T细胞的比例分布

注：与对照组比较，△P<0.05

讨论中医认为COPD的发病机理以正气亏虚和呼吸道防御能力下降，而调节性T细胞(regulatory T cell， Treg)是一类有负性调节功能的T细胞亚群，但目前对其发生、成长及迁移等机制尚未真正阐明，其具有免疫功能和免疫抑制的特性。Treg在人和小鼠的外周血及淋巴组织中大约占到CD4+T细胞的5%～10%左右(胸腺内自然发育成熟的天然Treg(nTreg)和诱导性调节T细胞(iTreg))。nTreg大多数为CD4+/CD25+Treg，主要在预防病理性自身免疫反应方面发挥功能。除了CD4、CD25之外，CD4+/CD25+Treg表面还表达有叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)，Foxp3持续作用于Treg，在效应T细胞上低表达，作为特异表达的转录因子，是CD4+/CD25+Treg生长、活化、发挥作用的关键，常常作为鉴定或筛选的标志[5]。机体免疫异常则容易受到邪气侵犯而发病，出现咳喘，积液成痰，随着病情的发展，又常累及其他脏器，如肺病及脾，肺虚及肾，三脏相互虚损，痰浊、水饮、淤血交替为患最终发展成“肺胀”[6-7]。

本文中老年COPD稳定期的患者，与健康组相比，其外周血中CD4+/CD25+Foxp3+调节性T细胞的比例均明显升高，这表明Treg参与老年COPD的发病，另外老年人免疫系统功能异常或紊乱也导致其较普通人易得慢性感染性疾病，细胞免疫特别是调节性T细胞在COPD的产生、发展中发挥着重要作用[8]。而给予中药干预治疗后，治疗组的外周血Treg比例明显低于对照组，说明COPD肺肾气虚证者补肾益肺，纳气定喘冬虫夏草麦角菌科《本草从新》，具精气，补虚，实腠理，止咳祛痰，研究表明它含有核苷类、多糖类、氨基酸、微量元素、维生素等活性成分，具有调节免疫、抗菌、抗病毒、保肝护肾等药理作用。COPD是可防可控的疾病，只是目前尚无治愈的办法，积极预防和提高疗效、延缓病情的进展成为COPD防治的关键所在，正与中医“未病防病、既病防变、瘥后防复”的理念不谋而合。通过尽早使用中医药进行干预，在COPD稳定期调整体质状态，做到“正气存内、邪不可干”，利于减少COPD急性发作。

参考文献

[1]Huntington ND， Carpentier S， Vivier E， et al. Innate lymphoid cells： parallel checkpoints and coordinate interactions with T cells[J].Curr Opin Immunol，2015， 28(38)：86-93.

[2]黄芪,刘先玲,徐海,等. 老年COPD患者Treg与TGF-β1的变化及其意义[J].2015，44(29)：4106-4107.

[3]中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组. 慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2007年修订版)[J]. 中华结核和呼吸杂志，2007，30：8-17.

[4]Lee YA， Kim HR， Lee JS，et al.CD4+Foxp3+Regulatory T Cells Exhibit Impaired Ability to Suppress Effector T Cell Proliferation in Patients with Turner Syndrome[J].PLoS One，2015，28;10(12).

[5]张改华，吴娟，李建英，等. NT-ProBNP、CRP及动脉血气检测在慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺动脉高压中的临床意义[J].陕西医学杂志，2014，43(10)：1386-1388.

[6]陶玙婧，杨云柯. 慢性阻塞性肺疾病的中西医临床研究进展[J].陕西中医，2014，35(7)：934-936.

[7]Domaga-Kulawik J，Hoser G，D browska M， et al. CD4+/CD25+cells in systemic inflammation in COPD[J].Scand J Immunol，2011，73(1)：59-65.

[8]Hou J1， Sun Y， Hao Y， et al. Imbalance between subpopulations of regulatory T cells in COPD[J]. Thorax，2013， 68(12)：1131-1139.

(收稿2016-01-23；修回2016-02-21)

【中图分类号】R563.9

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.07.036