甲状腺微小癌Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达分析

纪军生，陆云峰，赵亚萍



·临床经验·

甲状腺微小癌Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达分析

纪军生，陆云峰，赵亚萍

目的探讨半乳糖凝集素3(Galectin-3)、细胞角蛋白19(Cytokeratin 19, CK19)、分化抗原簇56(cluster of differentiation 56, CD56)及甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO)蛋白在甲状腺微小癌(thyroid microcarcinoma, TMC)中的表达特征。方法对手术切除的32例TMC病理形态学特征及Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白免疫组化检测结果进行回顾性分析。结果32例TMC中，甲状腺乳头状微小癌26例，滤泡型微小癌6例；Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达阳性率分别为100%、100%、9.38%和6.25%。结论采用免疫组化技术同时检测Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达，可提高TMC检出率，有效避免漏诊。

甲状腺微小癌；半乳糖凝集素3；细胞角蛋白19；分化抗原簇56；甲状腺过氧化物酶；免疫组织化学

甲状腺微小癌(thyroid microcarcinoma, TMC)是肿瘤直径≤1 cm的甲状腺癌。因病灶微小，无明显临床症状，TMC极易被临床医师及病理医师忽视，导致漏诊。本文对TMC中半乳糖凝集素3(Galectin-3)、细胞角蛋白19(Cytokeratin 19, CK19)、分化抗原簇56(cluster of differentiation 56, CD56)及甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO)的表达特征及其在TMC病理诊断中的价值进行了研究。

1　对象与方法

1.1对象2003年1月-2014年12月手术切除的TMC 32例，男5例，女27例，男女之比为1：5.4；年龄18～68岁，平均44.2岁；左侧13例，右侧19例；术前临床诊断：甲状腺腺瘤9例，结节性甲状腺肿17例，待查6例。

1.2方法手术切除标本均经10%甲醛固定。查见病灶或可疑病灶取材时，每隔2～3 mm书页状切开，仔细观察及触摸，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，HE染色，光镜观察。同时采用免疫组化Envision两步法检测Galectin-3、CK19、TPO及CD56蛋白表达，试剂购自福州迈新公司，所有操作严格按照说明书进行，简述如下：石蜡切片脱蜡、水化、置于柠檬酸抗原修复液中，采用高压锅进行抗原修复，自然冷却10 min后，流水冲洗，去除水份，PBS冲洗3 min×2次，分别滴加Galectin-3、CK19、TPO及CD56单克隆抗体，4 ℃过夜，PBS冲洗×2次，滴加辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的二抗，室温孵育15 min，PBS冲洗×2次，去除PBS，滴加新鲜配制的DAB显色液，室温避光直到显色至预期深浅，自来水冲洗终止显色，苏木素再染，PBS返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.3免疫组化结果判定光镜下观察着色程度并计数阳性细胞百分数，每张切片5个高倍视野，阳性细胞百分数的平均数为该切片百分数结果，按阳性细胞数所占百分比并结合着色强度进行分级：着色细胞≤10%为(-)，11%～25%为(+)，26%～50%为(++)，﹥50%为(+++)。

2　结　果

2.1肉眼观察32例TMC中28例为单发癌结节，4例为多发癌结节(3例2个、1例3个)，结节直径0.1～0.8 cm，有或无包膜，切面灰白、灰黄色，实性，质地中等，有的呈放射状瘢痕样、细颗粒状粗糙及绒毛状外观，部分有砂砾感，边界不清。

2.2镜检本组26例呈典型的乳头状癌组织结构及细胞形态特征(图1a)，瘤组织为具有纤维血管轴心的真性乳头，乳头细长或短钝，长者有复杂的分支，多为2-3级或多级分支乳头，乳头表面被覆单层或多层柱状上皮，圆形或椭圆形、异形，可见毛玻璃核、核沟、核重叠，少数见嗜酸性核内包涵体，乳头中心为纤维脉管束，浸润性生长，其中15例侵犯包膜向周围结节性甲状腺肿或甲状腺腺瘤组织中微浸润，所有病例均见促纤维间质反应。6例为滤泡型微小癌，癌细胞呈滤泡样、腺样、线条状及流水状排列，个别滤泡腔内有淡红染类胶质，无乳头状结构，但具有上述乳头状癌细胞核的特征，呈浸润性生长，均见突破包膜向周围结节性甲状腺肿组织中微浸润，间质纤维组织增生，呈玻璃样变性(图1b)；32例TMC中合并有结节性甲状腺肿25例，甲状腺腺瘤6例，乔本病1例。

2.3Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达Galectin-3主要表达于细胞质，细胞质内出现棕黄色颗粒(图1c)，CK19表达于细胞膜及细胞质，其内出现棕黄色颗粒(图1d)，32例TMC中，Galectin-3、CK19均有表达，表达强度为：+～+++。CD56主要表达于细胞膜(图1e)，伴或不伴有细胞质表达，本组3例阳性，其中表达强度“+”2例，“++”1例；TPO位于细胞质(图1f)，2例表达弱阳性，均为“+”。

a:乳头状癌(HE ×100)，短钝乳头，核重叠，浸润生长；b：乳头状癌滤泡亚型(HE ×100)癌细胞呈滤泡状排列，细胞核深染，异型；c：Galectin-3蛋白(Envision法 ×100)，主要表达于细胞质；d：CK19蛋白(Envision法 ×100)，主要表达于细胞膜；e：CD56蛋白表达阴性(Envision法 ×100)；f：TPO蛋白表达阴性(Envision法 ×100)图1　Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白在TMC中的表达

3　讨　论

3.1TMC临床特征甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤，每年新发病例占所有肿瘤的1%～5%[2-3]，我国2012年肿瘤登记年报显示，甲状腺癌发病率6.6/10万。近年来，全球甲状癌发病率呈上升趋势，北京市2010年发病率比1995年上升了518.8%，世界卫生组织公布的全球癌症报告指出甲状腺癌新发病例中>50% 为TMC。TMC手术治疗效果确切，远期复发率低于8%。TMC好发于青中年，女性明显多于男性[8-9]，本组女性患者占84.4%，与文献一致。女性患者TMC患病率的确切原因目前尚不清楚，可能与性激素水平有关。TMC肿瘤体积较小，触诊困难，患者通常无明显症状，虽然现在影像仪器分辨率有了很大的进步，但临床的漏诊率仍然较高，部分病例在出现淋巴结转移或远处转移方才就诊，更多的病例是在其他甲状腺疾病的手术中，进行病理组织学检查时得以发现，本组32例术前诊断均不明确，术中快速冰冻及常规病理切片检查时才发现其微小癌组织学特征并得以明确诊断。

3.2TMC组织学特征TMC主要包括乳头状微小癌，滤泡型微小癌，髓样型微小癌极为少见，乳头状微小癌最为常见[10]。镜下乳头状癌乳头分支多且细，乳头上皮的核呈毛玻璃样外观，体积大，染色淡，外形不规则，核重叠，深的核沟，细胞质陷入形成假包涵体等核的特征性改变，乳头的中央为纤维血管轴心，间质纤维化，浸润性生长。在乳头状TMC的病理诊断中，必须做好与良性乳头状增生的鉴别：良性乳头状增生通常没有明显的纤维血管轴心，乳头间质可见水肿及滤泡结构，乳头被覆单层扁平或立方上皮，核较小，外形规则。滤泡型TMC由大小不等的滤泡构成，此型虽缺乏乳头，但却有乳头状癌核特征改变，肿瘤呈浸润性生长，本组6例滤泡型TMC中有1例肿瘤细胞呈蘑菇状微侵出于包膜外。

3.3Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达与TMCGalectin-3是凝集素家族中的一员，不仅具有调节细胞生长，抑制细胞凋亡的作用，而且参与细胞间黏附和新生血管的形成，与肿瘤的浸润、转移密切相关。近年来，Galectin-3在甲状腺疾病发病机制中作用受到广泛重视，并且越来越多被应用到疾病的诊断和鉴别诊断中[11]。吕云福等[12]研究发现甲状腺乳头癌Galectin-3阳性率83.03%，结节性甲状腺肿为19.35%，而正常甲状腺组织均为阴性。邓敏等[13]报道甲状腺乳头癌Galectin-3阳性率98.5%，其中TMC阳性率100%。本组32例TMC中，Galectin-3表达均为阳性。Galectin-3在甲状腺良性病变中不表达或呈极低水平表达，而在甲状腺恶性肿瘤中常表达阳性的特征，提示其在甲状腺恶性病变诊断中的重要价值。CK19是一种低分子量角蛋白，为恶性肿瘤细胞中间丝的组成成分，已证实其在头颈部鳞癌、食管癌等肿瘤性疾病诊断中具有重要价值。研究发现，甲状腺恶性肿瘤中CK19常表达阳性，而桥本甲状腺炎、甲状腺腺瘤多不表达或极低表达[13-15]，我们的结果显示32例TMC中， CK19均为阳性。目前，CK19常与Galectin-3联合检测应用于甲状腺恶性疾病的鉴别诊断，可有效提高诊断的灵敏性与特异性[13-14]。CD56属于免疫球蛋白超家族成员，主要参与神经外胚层来源的肿瘤(如视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤等)、内分泌肿瘤和 NK/T 细胞淋巴瘤的发生机制，CD56在甲状腺乳头状癌中常常表达缺失，阳性表达多位于肿瘤浸润边缘。黄悦等[16]报道，49例甲状腺乳头状癌中仅1例CD56弥漫性表达，且位于肿瘤与正常组织交界处，表达程度极弱。本组TMC中，CD56阳性率为9.4%，表达特征与文献一致[17]。CD56在甲状腺恶性病变中虽然也有表达，但多为散在局灶性，且为细胞内弥漫表达，而其在非肿瘤性甲状腺病变主要表达于细胞膜。TPO是一种与甲状腺素合成相关的酶，由甲状腺滤泡细胞合成，在正常甲状腺组织及甲状腺良性肿瘤中高表达，甲状腺恶性肿瘤通常表达缺失或极低表达[13-14]。本组32例中，只有2例弱阳性表达。在甲状腺良、恶性疾病的诊断和鉴别诊断中，同时检测甲状腺组织中CD56及TPO蛋白可有效提高病理诊断的准确性。

综上所述，TMC 组织中Galectin-3、CK19蛋白呈阳性表达，而CD56及TPO蛋白表达多为阴性，在进行甲状腺病灶病理形态学检查时，如果采用免疫组化技术同时检测Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达，可提高TMC检出率，有效避免漏检。

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(本文编辑：黄攸生)

223001江苏淮安,解放军82医院

赵亚萍，E-mail：XKH@njmu.edu.cn

R736.1

B

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.03.024

2016-03-20；

2016-05-07)

引用格式：纪军生，陆云峰，赵亚萍,等.甲状腺微小癌Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白表达分析.东南国防医药，2016,18(3):303-305.