寒痹丸的质量标准研究

崔恩忠，陈美惠，贡　磊，盛　华，汤　淏



·论著·

寒痹丸的质量标准研究

崔恩忠，陈美惠，贡磊，盛华，汤淏

目的建立寒痹丸的质量控制标准。方法对方中当归和川芎进行薄层色谱鉴别,同时采用HPLC法对淫羊藿中淫羊藿苷进行含量测定。结果薄层色谱中斑点清晰，专属性强；淫羊藿苷在10.15～81.20g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.92%(RSD=1.34%)。结论本实验所用方法简便，重现性良好，定量方法准确可靠，可用于寒痹丸的质量标准控制。

寒痹丸；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱法

寒痹丸为南京军区南京总医院中西医结合科所研制，经临床应用多年，疗效确切。原方由细辛、黄芪、当归、土鳖虫、制川乌、制草乌、川芎、淫羊藿和鸡血藤等九味中药饮片组成，具有散寒止痛，活血通络之功效，用于治疗风湿与类风湿性关节炎、强直性脊柱炎及其他寒湿痹证型关节疼痛。本实验对方中当归和川芎进行薄层色谱鉴别,同时采用HPLC法对淫羊藿中淫羊藿苷进行含量测定，进一步完善了其质量控制方法，为评价并建立其质量控制标准提供了科学依据。

1　仪器与药材

Waters高效液相色谱仪(1525型双泵+2487型紫外检测器，美国Waters公司)；梅特勒尔AH-240电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；UV-1700紫外分析仪(日本岛津)；HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。

对照药材当归(120927-201014)、川芎(120918-201110)和淫羊藿苷(110737-200415)均购自中国药品生物制品检定所；寒痹丸均为南京军区南京总医院制剂科配制(样品1批号140822，样品2批号141019，样品3批号141213)；本实验所用中药饮片均购自安徽亳州；薄层层析硅胶G(薄层色谱用，青岛海洋化工)；乙腈(色谱纯，美国天地产品)，其余所用试剂均为分析纯。

2　实验方法

2.1当归、川芎的鉴别对照药材溶液的制备：取当归、川芎对照药材各0.5 g，同法制成对照药材溶液。

供试品溶液的制备：取本品4 g，研细，加乙醇25 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇4 mL使溶解，溶液转移至5 mL容量瓶内，作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除当归、川芎以外的其余药材，研碎，按本品制备工艺及供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法试验：吸取供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开后取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。

2.2淫羊藿苷的含量测定色谱条件：色谱柱：Hedera-ODS-2 C18柱(4.6×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(29∶71)；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10L。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。

对照品储备液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品8.12 mg，置于100 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

对照品应用液的制备：精密称取对照品储备液3.5 mL，置10 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为对照品应用液。

供试品溶液的制备：取本品粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)60 min放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续取滤液，即得。

阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除淫羊藿以外的其余药材，按本品制备工艺及供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

方法专属性考察：精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10L，在上述色谱条件下进样检测。

线性关系考察：精密吸取淫羊藿苷储备液1.25、2.5、5.0、7.5、10.0 mL分别至10 mL量瓶中，用稀乙醇溶液稀释至刻度，可得10.15、20.30、40.60、60.90、81.20g/mL等一系列浓度。精密吸取10L在上述色谱条件下进样，记录色谱峰面积，以峰面积为纵坐标(y)，以对照品浓度为横坐标(x)进行回归分析，计算回归方程。

重复性试验：取寒痹丸(批号120315)，按照2.2项下方法制备供试品溶液6份，分别在上述色谱条件下进样测定，以峰面积计算相对标准偏差(RSD)。

加样回收率试验：称取已知含量的样品0.25 g(批号为120315)，共 9份，置于50 mL锥形瓶中，分别精密加入淫羊藿苷对照品储备液8.0 mL、10.0 mL和12.0 mL，按2.2项下方法制备供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液各10L注入色谱仪，测定含量，计算回收率。

3　结　果

3.1当归、川芎的鉴别按照2.1项下的薄层色谱鉴别方法进行鉴定。如图1所示，供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，同时阴性对照无此斑点，证明处方中其他药材对当归和川芎的鉴别无干扰。在制剂有效期内，该鉴别均呈正反应。取三批不同批号的样品依法检验，结果均满意。

1. 样品1(140822); 2. 样品2(141019); 3. 样品3(141213);4. 当归对照药材; 5. 川芎对照药材; 6. 阴性对照图1　当归、川芎的薄层色谱图谱

3.2含量测定

3.2.1淫羊藿苷的含量测定方法专属性考察：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间处，有同一色谱峰，而阴性对照溶液在相应保留时间处则无峰出现，表明其对样品测定无干扰。结果见图2。

A:淫羊藿苷对照品;B:寒痹丸样品;C:阴性图2　专属性试验

淫羊藿苷线性关系考察：按2.2项下方法进行测定，以对照品浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归，得到回归方程：Y=21762974X-7950，r=0.9999。结果表明，淫羊藿苷的浓度在10.15～81.20g/mL之间，与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：按2.2项下方法进行测定，以淫羊藿苷峰面积计算，RSD为0.29%。结果表明该方法的精密度良好。

稳定性试验：按2.2项下方法进行测定，以淫羊藿苷峰面积计算，RSD为1.09%。结果表明样品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验：按2.2项下方法进行测定，计算峰面积的RSD为0.71%。结果表明方法重复性良好。

加样回收率试验：按2.2项下方法进行计算测定，平均回收率为99.92%，RSD为1.34%。结果见表1。

表1　淫羊藿苷加样回收率试验结果(n=9)

3.2.2样品含量测定取10批寒痹丸，按2.2项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件进行测定。结果见表2。

参考10批样品测定结果以及淫羊藿苷的转移率，确定本品每g含淫羊藿苷以淫羊藿苷计不得少于1.0 mg。

表2　10批样品含量测定结果

4　讨　论

4.1薄层色谱鉴别项的选择当归含挥发油及水溶性成分，水溶性成分有阿魏酸、烟酸、丁二酸、胆碱等[2-4]；川芎含挥发油及生物碱类、酚类等[5-7]；两者成分非常相似，无法排除阴性干扰，故薄层色谱鉴别阴性对照采用双缺味，本方法具有专属性。

4.2含量测定最大波长的选择：精密称取一定量的对照品于50 mL量瓶中，加稀乙醇溶液定容，进行紫外扫描，测得最大吸收波长为270 nm。

流动相的选择：参照《中国药典》2015版一部淫羊藿中淫羊藿苷的含量测定方法，流动相为乙腈-水(30∶70)时寒痹丸阴性样品有干扰。参考相关文献[8-12]后调整流动相为乙腈-水(29∶71)后，阴性样品无干扰，且分离度较好。

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(本文编辑：张仲书；英文编辑：王建东)

Study onquality standard of Hanbi Pill

CUI En-zhong, CHEN Mei-hui,GONG Lei, SHENG Hua, TANG Hao.

DepartmentofPharmaceution,NanjingGeneralHospitalofNanjingMilitaryCommand,PLA,Nanjing,Jiangsu210002,China

ObjectiveTo establishthe quality standard of Hanbi Pill. MethodsA TLC method was used for qualitative identification of the Radix Angelicae Sinensi and the Ligusticum chuanxiong Hort, and the Icariin was determined by HPLC. ResultsThe TLC spots were clear, with strong specificity. The linear relationship of Icariin content was good in the range of 10.15-81.20g/mL, and the average recovery was 99.92% (RSD=1.34%). ConclusionThe method is simple, accurate and reliable, with good reproducibility, and it can be used for the quality control of Hanbi Pill.

Hanbi Pill; quality; TLC; HPLC

全国医疗机构制剂标准提高科研专项课题面上课题(14ZJZ16-3)

210002江苏南京,南京军区南京总医院制剂科

汤淏，E-mail：tanghao_0518@sina.com

R927.11

A

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.03.018

2016-01-19；

2016-03-01)

引用格式：崔恩忠，陈美惠，贡磊,等.寒痹丸的质量标准研究.东南国防医药，2016,18(3):281-283,297.