不同检测方法在吸毒人群筛查丙肝中的应用价值

刘振专 杨红梅 蔡常辉 陈述文 梁连辉

[摘要] 目的 探讨不同检测方法在吸毒人群筛查丙肝中的应用价值。 方法 选取2014年1～8月中山市第二人民医院“美沙酮门诊”定点收治的吸毒史部分患者194例，采用HCV-cAg ELISA试剂盒，HCV-Ab ELISA试剂盒，HCV-RNA PCR试剂盒分别检测。 结果 194例吸毒患者血样，HCV-RNA PCR阳性率为58.76%（114/194），HCV-Ab阳性率为63.92%%（124/194），HCV-cAg阳性检出率为32.47%（63/194）。HCV-Ab标志物阳性率显著高于HCV-cAg（χ2=38.411，P<0.01）。在HCV-Ab阴性样本中，有5例HCV-cAg阳性，其中4例HCV-RNA PCR结果阳性。 结论 不同检测方法的检测效果略有差异，临床上可考虑HCV-cAg与HCV-Ab联合检测优势互补，对吸毒高危人群联合筛查，将有效防止漏检。

[关键词] 丙型肝炎病毒；丙肝病毒核心抗原；丙肝病毒抗体；联合检测

[中图分类号] R512.6+3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）03（c）-0129-03

[Abstract] Objective To explore the application value of different determination method in screening hepatitis C in drug users. Methods 194 patients with history of drug use sentinel treated by "adanon outpatient"in the Second People′s Hospital of Zhongshan City from January to August 2014 were selected.HCV-cAg ELISA kit，HCV-Ab ELISA kit and HCV-RNA PCR kit was respectively used to detect. Results Among 194 samples from drug users，the positive rate of HCV-RNA PCR was 58.76% （114/194），the positive rate of HCV-Ab was 63.92% （124/194），the positive detection rate of HCV-cAg was 32.47% （63/194）.The positive rate of HCV-Ab markers was obviously higher than t of HCV-cAg （χ2=38.411，P<0.01）.Among HCV-Ab negetive samples，5 cases were HCV-cAg positive and 4 cases with HCV-RNA PCR positive results among that. Conclusion The detection effect of different determination method has lightly difference，HCV-cAg and HCV-Ab of combination detection may be considered for their complement each other′s advantages.Using combination screening to high-risk drug users can prevent missed detection effectively.

[Key words] Hepatitis C virus；HCV-cAg；HCV-Ab；Combined detection

丙型肝炎（丙肝）在我国属乙类传染病[1]，其病原体是丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）[2]。据文献报道全球约有2亿人感染，感染率为3%，每年因HCV相关疾病死亡人数达35万之多，中国约有4000万人感染，感染率为3.2%，略高于全球平均水平[3-4]，而这些感染者中，>60%为吸毒人员[5-6]。号称“沉默杀手”的丙肝具有隐匿性、慢性化特征，并可发展为肝硬化、肝癌，但因HCV具有高度变异性，目前尚无理想的预防性疫苗和特效药物治疗，只能采取保肝护肝治疗[7-8]，因此，建立早期、快速、准确、价廉的筛查方法，选择合适的检测策略，对HCV的防控和预后有重大意义。丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、HCV-RNA、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）是近年来应用较广的检测方法，其中HCV-cAg检测是新近发展的一项检测技术，其窗口期（PWP）较短，为13～15 d[9-10]，且不受机体免疫状态的影响。本文对中山市第二人民医院“美沙酮门诊”194名吸毒人员分别采集样本，同时进行HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA 检测，以探讨HCV-cAg联合HCV-Ab检测在吸毒高危人群中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年1～8月，选取中山市第二人民医院“美沙酮门诊”定点收治的吸毒史部分患者194例，其中男性为152例，女性为42例，年龄为20～65岁，平均（39.2±5.4）岁。入选标准：男女不限；精神状况正常；肝肾等重要脏器无严重并发症者；参与者知情并同意本次研究；经中山市第二人民医院医学伦理委员会批准。参照中山卫计局立项编号：2015A020183的立项要求开展本研究。

1.2 方法

采集患者的静脉血两支，1支为无抗凝管，用于检测HCV-cAg和HCV-Ab；1支为EDTA-K2管，及时分离血浆，低温-20℃保存，用于检测HCV-RNA。

1.2.1 HCV-Ab检测 试剂由北京万泰生物药业股份有限公司提供，采用ELISA，严格按试剂说明书操作，阳性结果均双孔进行复检。检测过程：包被微孔中加入100 μl样品稀释液，再加入10 μl样品，充分混匀，置入37℃水浴箱30 min，取出依次反复洗涤5次，拍干，加入50 μl酶标志物，置入37℃水浴箱20 min，取出同上洗涤5次，拍干，待显色。

1.2.2 HCV-cAg检测 试剂由湖南康润制药股份有限公司提供，采用双抗夹心ELISA，严格按试剂说明书操作，阳性结果均进行双孔复检。检测过程：微孔条固定在支架，加入100 μl样品稀释液，充分混匀，加入封板膜，置于30℃中温育30 min，洗涤液洗涤5次，扣干，加入显色剂50 μl，轻轻混匀，37℃避光显色10 min，每孔加入50 μl终止液，轻轻混匀，测量。

1.2.3 HCV-RNA检测 试剂由中山大学基因股份有限公司提供，采用荧光定量PCR仪进行病毒定量检测，观察HCV-RNA水平，严格按说明书操作。

1.3 丙肝诊断阳性标准

①ELISA检测HCV-Ab的阳性标准：样品OD值≥临界值为HCV-Ab阳性。②ELISA检测HCV-cAg的阳性标准：样品OD值≥临界值为HCV-cAg阳性。③荧光定量PCR法检测HCV-RNA的阳性标准：拷贝数>1.0×103判定为阳性。

1.4 统计学处理

使用SPSS 17.0统计软件进行数据统计和分析，计数资料以百分率表示，采取χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

194例吸毒患者血样，HCV-RNA PCR定量检测，阳性率为58.76%（114/194）。HCV-Ab阳性率为63.92%（124/194）；HCV-cAg阳性检出率为32.47%（63/194），HCV-Ab标志物阳性率显著高于HCV-cAg（χ2=38.411，P<0.01），提示两种检测方法的诊断水平有差异。HCV-Ab的阳性检出率更高，但对HCV-Ab阴性样本，有5例HCV-cAg阳性，其中4例HCV-RNA PCR结果阳性，出现病毒复制（表1）。HCV-cAg与HCVAb在人体体内的浓度转换过程见图1。

3 讨论

目前，我国对HCV的筛查主要是ELISA检测HCV-Ab[11]，初筛结果阴性，报告HCV-Ab阴性，不再进行复检。初筛结果阳性，才进行后续的复检程序。然而，ELISA检测HCV-Ab具有一定的局限性，尤其是吸毒高危人群极易漏检，原因有以下几点[12-15]：①HCV-Ab检测的PWP较长，平均为70 d；②与机体免疫状态有关，免疫缺陷、器官移植、血液透析、使用免疫抑制剂治疗等免疫虚损患者，产生抗体的浓度极低，超出现有试剂ELISA的检测下限；③为了防止高IgG血症及类湿因子等的干扰，一般ELISA检测HCV-Ab需稀释样本，加血清量较少，加样器不准确也是可能漏检的原因之一。

HCV-cAg与HCV-Ab是筛查HCV感染的两种标志物，两者在体内的浓度存在相互主导转换的一个过程，如图1所示，感染早期，HCV-cAg几乎与HCV-RNA同时出现，机体内一定量的HCV-cAg不断刺激机体产生抗体，几乎所有的HCV-Ab全部与HCV-cAg结合，此时HCV-cAg过量，而ELISA只能检测游离状态的HCV-Ab或HCV-cAg，因此会出现HCV-Ab阴性，HCV-cAg阳性的情况，这也是两者检测PWP不同的原因之一[16]。随着病情的发展，机体产生HCV-Ab浓度逐步升高，与HCV-cAg结合后，游离HCV-cAg浓度逐步下降，在病程的中后期，患者体内的HCV-cAg全部被HCV-Ab结合形成免疫复合物，游离的HCV-cAg浓度低于检测下限为阴性，而HCV-Ab浓度进一步升高，检测则为阳性，因此，从患者感染HCV全程来看，单纯依靠HCV-Ab或HCV-cAg标志物来检测，极易可能造成漏检或误诊。

实时荧光PCR定量检测HCV-RNA 是诊断HCV感染的“金标准”，但由于其耗时长，实验条件要求高，仪器和试剂贵，且RNA室温易降解，结合我国国情，作为常规筛查手段，难以全面推广。

综上所述，不同检测方法的检测效果略有差异，临床上可考虑HCV-cAg与HCV-Ab联合检测优势互补，对吸毒高危人群联合筛查，将有效防止漏检。

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（收稿日期：2015-11-30 本文编辑：许俊琴）