链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠尿AQP-2的改变及机制

胡曼丽杜 娟（ 长春医学高等专科学校，吉林 长春 3003； 吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春 300）



链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠尿AQP-2的改变及机制

胡曼丽1杜 娟2
（1 长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2 吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春 130021）

【摘要】目的 检测链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病（DM）大鼠尿液中水通道蛋白-2（AQP-2）的变化。方法 将大鼠分为两组，对照组（Con组）8只大鼠以及糖尿病组（DM组）10只大鼠，两组均用STZ腹腔注射诱导成DM模型。在成模12周，用电子显微镜观察肾脏形态变化，用免疫组织化学方法检测DM大鼠肾脏髓质集合管AQP-2的表达，用ELISA方法检测尿AQP-2。结果 ①12周DM组血糖较之前显著提升（P＜0.01），尿量较Con组偏高（P＜0.01），体质量方面较Con组明显偏低（P＜0.01）。②在电镜下，肾脏髓质集合管细胞结构变化明显。③糖尿病组大鼠肾脏髓质集合管AQP-2蛋白的表达增加。④DM组尿AQP-2排泄增加。结论 DM大鼠尿液AQP-2蛋白的表达增加，同时肾脏髓质AQP-2显著增加。

【关键词】链脲佐菌素（STZ）；糖尿病肾病

目前，糖尿病（DM）呈现出高发态势，且病死率极高，严重危害患者正常生活。糖尿病肾病（DN）是造成患者死亡的主要原因，也是常见并发症之一，严重时会导致患者出现继发性肾脏病。糖尿病肾病具有起病隐匿、易被忽视等特点，给患者早期诊断带来严重困扰。据相关资料显示，水通道蛋白-2仅能在肾脏髓质中表达，同时受到加压素（VP）调节［1］。本文旨在探讨AQP-2在DN早期改变及其衰竭临床治疗中，地高辛临床效果远没有丹参川芎嗪注射液疗效好。在临床中联合丹参川芎嗪注射液使用可对心力衰竭临床症状进行有力控制，可逐渐对慢性充血性心力衰竭进行改善，增强患者生存质量。

1.4 慢性肺心病临床治疗：慢性肺心病因长期处于二氧化碳富足、缺氧的情况中，造成红细胞数量逐渐增加，免疫物质沉着，血管内皮细胞伤害、血小板及红细胞聚集，最后造成血液流动活性减弱，与中医“血瘀滞不行”理念中相同［2］。因此针对慢性肺心病患者动脉栓塞及滞血症进行治疗有重要含义。在临床中对慢性肺心病患者使用丹参川芎嗪注射液，可有效改善患者动脉血气，对心肌功能有良好的治疗效果，而且不良反应相对偏少。

2 联合丹参川芎嗪注射液用药

2.1 耳源性眩晕临床联合654-2药物治疗：654-2联合丹参川芎嗪注射液对耳源性眩晕进行治疗，可显著提升其痊愈率，进一步将疗效时间缩短，治疗禁忌为前列腺增生、心跳过速及青光眼等，患者如出现此类症状应禁用654-2联合丹参川芎嗪注射液临床疗法。

2.2 老年慢性胃炎临床联合埃索美拉唑治疗：在老年慢性胃炎临床治疗中埃索美拉唑联合丹参川芎嗪注射液疗法相比单纯运用埃索美拉唑更具疗效，因此两种药物联合使用可显著增加治疗老年慢性胃炎的疗效成功率，临床应用效果值得认同，中医药材里的活血化瘀成分可为老年慢性胃炎的治疗提供疗效更加明显的治疗方法。

2.3 冠心病心绞痛临床联合奥扎格雷钠治疗：在冠心病心绞痛临床治疗中应用奥扎格雷钠联合丹参川芎嗪注射液疗法，可将心肌梗死区域有效缩小及缓解患者病情，并且会起到保护心肌缺血防止再次损伤的效果，从多个方面对血液流动理念进行完善。

2.4 糖尿病四周神经病变临床联合甲钴胺治疗：在糖尿病四周神经病变临床中应用甲钴胺联合丹参川芎嗪注射液治疗法4周之后，患者疼痛感及肢体麻木等症状得到显著改善，在临床实践中有92.4%的总有效率，明显比单纯使用甲钴胺疗效高，数据差异有统计学意义（P ＜0.05）。在对神经进行生理检查时，应用甲钴胺联合丹参川芎嗪注射液疗法效果比单纯使用甲钴胺疗效高。

2.5 重度一氧化碳中毒迟发型脑病临床联合大黄治疗：在重度一氧化碳中毒迟发型脑病临床治疗中，大黄联合丹参川芎嗪注射液可有效减少因一氧化碳中毒产生的迟发型脑病，并且能对迟发型脑病临床症状进行明显改善。

3 不良反应

丹参川芎嗪注射液属于中医临床药剂，其产生不良反应主要和患者机体差别、不同药材产地、生产工艺、药剂成分复杂等因素有关［3］，因此在临床上应用丹参川芎嗪注射液，药剂师应着重注意如下几方面。丹参川芎嗪注射液不良反应通常为产生皮疹。偶尔会造成休克及低血糖，多发于老年患者，通常对皮肤及神经系统造成影响，之后为心血管系统、全身及局部危害、消化系统等，在静脉滴注时产生的不良反应概率最高；而且部分患者会出现头晕、气短、血压增加、心悸等现象；因此在临床中要加强对药物的监管，对患者肝脏功能足够了解之后，再对其用药，并对药物滴速进行控制，使患者有效缓解不良反应。

综上所述，在脑血管疾病临床治疗中丹参川芎嗪注射液有优越性的临床疗效，不良反应小，药源广泛，且可按照川芎药物构造简单极易改造的优势，研发出疗效显著、针对性高的丹参川芎嗪注射液，为现代中医临床治疗做出卓越贡献。当前，丹参川芎嗪注射液在中医临床中的应用十分广泛，并取得了中医医师普遍认可。但是作为中医注射药剂，丹参川芎嗪注射液还需在临床中得到更深层次研究。

参考文献

［1］ 刘权红，李诗娟.丹参川芎嗪的临床应用进展与不良反应研究［J］.北方药学，2012，9（9）：48-49.

［2］ 周晓萍，袁红伶.丹参川芎嗪注射剂对老年慢性肾衰竭患者肾功能和血浆内皮素及D-二聚体的影响［J］.中国老年学杂志，2012，32（24）：5552-5553.

［3］ 可海霞，张金盈，贾银明，等.丹参川芎嗪对老年急性心肌梗死患者炎性因子及血管内皮功能的影响［J］.中国急救医学，2015，35 （5）：430-432.机制，故将大鼠分为对照组和糖尿病组，用STZ腹腔注射诱导成DM模型，观察肾脏形态变化，检测DM大鼠肾脏髓质集合管AQP-2的表达，并检测尿AQP-2。

表1 DM组与Con组大鼠12周理化指标的比较

1 实验方法

1.1 DM大鼠模型的建立：选择18只健康Wistar大鼠，体质量最轻160 g，最重200 g。对其进行适应性饲养1周后，分为正常对照组以及实验组，其中，对照组大鼠共8只，实验组大鼠共10只。对DM组大鼠采取禁食不禁水措施，时间为16 h，用枸橼酸钠稀释STZ，并且进行单次腹腔注射（以45 mg/kg体质量为标准），与此同时，Con组大鼠进行腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液（注射要求等体积）。3 d后，对大鼠空腹血糖和尿糖含量进行相关检测，造模成功的标准如下：大鼠体内血糖不低于16.67 mmol/L，同时尿糖（3+）以上。

1.2 留取标本：在实验结束时，将两组大鼠均置于代谢笼中，同时禁食24 h，允许大鼠正常自由饮水，最后收集大鼠在24 h内的所有尿液，并取5 mL尿液用来检测AQP-2。乙醚吸入麻醉生效后，取大鼠肾脏，用冰袋进行短期冷却，待切除大鼠肾脏髓质后，将其快速放入戊二醛中保存，用来作为电镜标本，与此同时，将大鼠肾脏的其他部位均放入中性福尔马林中保存，用来作为光镜标本。

1.3 观察指标的测定：①乐康全血糖仪测定大鼠血糖含量；②尿糖试纸半定量测定大鼠尿糖含量；③尿AQP-2浓度用ELISA法测定；④在透射电镜下观察常规制备电镜标本；⑤免疫组化染色均按常规步骤进行，DAB显色，试剂盒（郑州安赛生物科技有限公司）。

1.4 统计学处理：用SPSS18.0进行统计分析，各组数据采用（x-±s）表示，组间数据比较采用t检验，P＜0.05具有统计学差异。

2 结 果

2.1 DM组与Con组大鼠12周理化指标的比较：12周DM组血糖较之前显著提升（P＜0.01），尿量较Con组偏高（P＜0.01），体质量方面较Con组明显偏低（P＜0.01），DM组尿AQP-2高于Con组（P＜0.05），见表1。

2.2 电镜下大鼠肾脏髓质观察情况：对照组大鼠肾脏集合管是正常上皮细胞结构。糖尿病组大鼠肾脏集合管暗细胞较正常之前出现显著变化，细胞核出现固缩现象，同时胞质内溶酶体含量较之前显著增加，除此之外，顶小管与顶小泡也较之前有所增多，线粒体也呈现出固缩状态，有极少数细胞顶部胞膜还出现局部破损现象。集合管亮细胞细胞核呈现不规则排列，核内异染色质凝聚在其边缘，细胞器有所减少，还有大量糖原出现在胞质中。

2.3 免疫组化染色情况：对照组大鼠肾脏髓质近皮质端，有被染成棕黄色的集合管管腔内壁细胞，细胞膜和细胞质是其着色最多的结构。

3 讨 论

本文选用STZ腹腔注射诱导成DM模型。STZ在大鼠体内经过部分反应会产生如下物质：过氧化物、羟基等，此类物质会给动物胰岛B细胞降血糖功能带来一定损害，导致动物血糖升高，从而造成糖尿病，不利于健康生长。本文最终研究数据显示，DM组大鼠体内血糖含量均不低于16.67 mmol/L，且尿糖（3+），除此之外，大鼠体内尿量较之前也明显增加，不仅如此，大鼠体质量较之前也显著降低，这些指标变化情形完全与DM相关临床特点相一致。

本文主要用透射电子显微镜对DM大鼠肾脏髓质结构进行一系列观察，最终结果表明，糖尿病组大鼠肾脏集合管暗细胞较正常之前出现显著变化，细胞核出现固缩现象，同时胞质内溶酶体含量较之前显著增加，除此之外，顶小管与顶小泡也较之前有所增多，线粒体也呈现出固缩状态，有极少数细胞顶部胞膜还出现局部破损现象。集合管亮细胞细胞核呈现不规则排列，核内异染色质凝聚在其边缘，细胞器有所减少，还有大量糖原出现在胞质中。在远端小管管腔内的脱落细胞实质上就是蛋白质（大鼠尿液中检测到的），该结果表明，DM大鼠在12周时，从微观形态方面表明肾脏已出现改变。

免疫组织化学染色的相关结果表明，AQP-2可以在大鼠肾脏集合管内有效表达，与已往报道一致［2］。大鼠肾脏AQP-2沿集合管内壁上皮细胞分布的棕黄色颗粒在颜色及厚度方面，与对照组相比，糖尿病组颜色加深且浓厚，具有更广泛的分布，说明DM大鼠肾脏AQP-2在蛋白质水平上表达增强。据相关研究表明，DM大鼠肾脏集合管亮细胞中AQP-2表达有所增加，而且会向管腔膜移动［3-6］。

当糖尿病组大鼠肾脏髓质AQP-2出现过高表达时，会有少数AQP-2蛋白随大鼠尿液排出体外［7］，而本研究也显示，DM大鼠尿AQP-2明显高于Con组。

综上所述，水通道蛋白-2仅能在肾脏髓质中表达，同时也会受到加压素（VP）调节。本文主要用STZ腹腔注射诱导成DM模型，在成模12周用电子显微镜观察了肾脏组织结构，用免疫组织化学方法，检测了大鼠肾脏髓质集合管AQP-2的表达，检测到AQP-2在尿中排泄增加，同时发现DM大鼠AQP-2的表达明显比Con组增加，并伴有肾脏形态的早期改变。尿液检查无创伤而易于被患者接受，故AQP-2能否作为糖尿病肾病诊断的标志物，将在后继实验中进一步探讨。

［1］ 汪峰，杨国珍，刘宓，等.链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型稳定性观察［J］.贵阳医学院学报，2012，37（1）：40-42.

［2］ F梁彦，张传军，吕艳荣，等.马齿苋多糖对高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的作用及机制［J］.食品科学，2014，35（3）：217-220.

［3］ 刘金凤，彭红丽.黄芩苷对链脲佐菌素诱导的糖尿病模型大鼠血糖和血脂及腺苷酸活化蛋白激酶的影响［J］.中国药理学与毒理学杂志，2011，25（2）：145-150.

［4］ 邢邯英，刘敏，野战鹰，等.正铁血红素改善链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肝损伤［J］.临床荟萃，2014，29（1）：56-58.

［5］ 穆媛，庄映辉.环孢菌素A对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏组织中MIP-1α mRNA表达的影响［J］.吉林大学学报（医学版），2012，38（4）：683-686.

［6］ 王立俊，于永慧，汪翼，等.牛磺酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病幼鼠氧化应激系统及早期血管内皮损伤的干预性研究［J］.中华儿科杂志，2009，47（3）：194-199.

［7］ 王腾，汪晶晶，甘文云，等.维拉帕米对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制探讨［C］.中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文集，2013：128.

中图分类号：R587.2

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）17-0036-02