吴茱萸炮制品的质量标准研究

刘铎，鲁建美，吕露阳



吴茱萸炮制品的质量标准研究

刘铎，鲁建美，吕露阳

［摘要］目的：建立吴茱萸炮制品的质量标准。方法：采用显微鉴别、薄层鉴别和水分、灰分及浸出物等方法对吴茱萸炮制品进行定性鉴别，采用高效液相色谱法，测定了吴茱萸炮制品中的柠檬苦素含量。结果：显微鉴别等能够很好地鉴别吴茱萸炮制品，薄层色谱鉴别专属性较强。结论：所建立的质量控制方法结果准确、操作简便、重复性好，可控制吴茱萸炮制品的质量。

［关键词］吴茱萸炮制品；质量标准；含量测定

［作者单位］西 南民族大学民族医药研究院，四川 成都 610041

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa （Juss.） Benth、疏毛吴茱萸Euodia rutaecarpa （Juss.）Benth.var. bodinieri （Dode） Huang或石虎Euodia rutaecarpa （Juss.） Benth var.officinalis （Dode） Huang的干燥近成熟果实。8～11月果实尚未开裂时，剪下果枝，低温干燥或晒干，除去叶、枝、果梗等杂质。吴茱萸具有降逆止呕，散寒止痛，助阳止泻的功效。临床用于寒疝腹痛，厥阴头痛，寒湿脚气，经行腹痛，呕吐吞酸，脘腹胀痛，五更泄泻等症状。对于吴茱萸炮制品自汉代起就有记载，对于吴茱萸的炮制方法全国各地方也收载了很多。［1-7］《中国药典》［8］2010版中吴茱萸的炮制品仅收录了甘草制吴茱萸和除去杂质的吴茱萸，《全国中药炮制规范》中收载了盐吴茱萸［9］，而2002版《四川省中药饮品炮制规范》收载有清炒吴茱萸、醋炙吴茱萸、盐炙吴茱萸、黄连炙吴茱萸。但《四川省中药饮品炮制规范》质量标准仅有吴茱萸的炮制方法及炮制品的性状，并没有进行TLC和HPLC实验，因此我们收集了上述四种吴茱萸炮制品进行系统的质量标准研究，用以规范吴茱萸炮制品的质量标准。

1　实验材料

1.1 仪器

KQ-250DE型数控超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；STI-501型液相色谱仪（杭州赛智科技有限公司）；水浴锅等。

1.2 试药

乙腈为色谱纯（天津科密欧化学试剂有限公司，批号：20100106 ）；四氢呋喃（成都市科龙化工试剂厂，批号：2014092201），甲醇（成都市科龙化工试剂厂，批号：2014102901），乙醇（成都市科龙化工试剂厂批号：20120306），冰醋酸（成都市科龙化工试剂厂批号：20090910）均为分析纯，水为高纯水。

1.3 药物饮片

吴茱萸炮制品分别购于四川德仁堂中药饮片有限公司（批号：130804），四川德仁堂中药饮片有限公司（批号：140501），四川科伦药业（批号：111202），四川省中药饮片有限责任公司（批号：140314），四川利民中药饮片有限责任公司（批号：140301），四川省中药饮片有限责任公司（批号：140820），成都万好药房，绵阳神农药业有限公司（批号：131201），四川省中药饮片有限责任公司，四川省洪雅县瓦屋山药业有限公司。

2　实验方法与结果

2.1 性状

同《四川省中药饮片炮制规范》2002年版中炒吴茱萸、醋炙吴茱萸、盐吴茱萸、黄连炙吴茱萸。炒吴茱萸：表面呈黑褐色。醋炙吴茱萸：经炮制后呈黑褐色，含有醋香味。盐吴茱萸：经炮制后表面呈浅灰褐色，味苦、咸，苦。黄连炙吴茱萸：经炮制后表面呈黑褐色，味极苦。

2.2 鉴别

2.2.1 显微鉴别 采用吴茱萸药材粉末《中国药典》2010年版显微鉴别标准。本品粉末呈褐色。腺毛头部为7～14细胞，椭圆形，常含黄棕色内含物。非腺毛长140～350μm，2～6细胞，壁疣明显，有的胞腔内含棕黄色至棕红色物；柄一般为2～5细胞。草酸钙簇晶较多，偶有方晶；直径10～25μm。石细胞类圆形或长方形，直径35～70μm，胞腔很大。有时可见油室碎片，呈淡黄色。（图略）

2.2.2 薄层鉴别 采用《中国药典》2010年版吴茱萸药材薄层鉴别法，作吴茱萸炮制品薄层色谱。

取本品粉末0.4g，加乙醇10ml浸泡，静置30分钟后，于超声清洗仪里处理30分钟，滤过后取滤液作为供试品溶液。另取吴茱萸碱对照品、吴茱萸次碱对照品，加乙醇分别制成每1ml含1.5mg和0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》附录ⅥB）进行试验，分别吸取上述三种溶液2μl，点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-三乙胺（7∶3∶0.1）展开，取出，晾干，在365nm波长的紫外光灯下检视。在供试品色谱中，与对照品色谱中相应的位置上，显示的荧光斑点颜色相同，各样品均能检出吴茱萸碱和吴茱萸次碱，但吴茱萸碱在色谱中显示不明显（见图1A）。

图1（A） 10批吴茱萸炮制品TLC图

由图1A可见，采用《中国药典》2010年版吴茱萸药材薄层鉴别法，吴茱萸碱在色谱中显示也不明显，而且增加吴茱萸碱的点样量也不能改善，因此采用《中国药典》2005年版吴茱萸药材薄层鉴别法与其进行对比，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19:5:1:1）为展开剂作薄层鉴别，结果显示各样品均能检出吴茱萸次碱和吴茱萸碱，但吴茱萸碱在色谱中同样显示不明显，增加点样量也不能改善（见图1B）。

S1：吴茱萸次碱；S2：吴茱萸碱；1～5：炒吴茱萸；6～7：盐吴茱萸；8：醋吴茱萸；9～10：黄连炙吴茱萸

2.3 检查

2.3.1 水分 按《中国药典》2010年版一部附录ⅨH第一法，于干燥至恒重的扁形称量瓶中平铺供试品2～5g，厚度一般为5mm左右；供试品疏松程度不超过10mm；精密称定，在100～105℃打开瓶盖干燥5小时，干燥好后移置干燥器中，冷却30分钟，再次精密称定，再在上述温度下干燥1小时，冷却，称重，至干燥后每两次称重的差值不超过5mg为止。根据减少的重量，计算供试品中含水量（%）。分别测定了10批样品，测定结果为5.8～12.2%（见表1）。

2.3.2 总灰分 按《中国药典》2010年版一部附录ⅨK方法，测定用的供试品使其粉碎后能通过二号筛，混合均匀后取供试品2～3g/3～5g（如须测定酸不溶性灰分），置炽灼的坩埚中，坩埚需恒重，称定总重量（准确至0.01g），缓缓炽热，至完全炭化，避免燃烧，然后逐渐升温至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据前后称重，计算供试品中总灰分的含量（%）。分别测定了10批样品，测定结果为6.6～8.1%（见表1）。

2.3.3 浸出物 醇溶性浸出物：按《中国药典》2010年版一部浸出物项下热浸法，以稀乙醇为溶剂，取精密称定供试品2～4g，置100～250ml的锥形瓶中，加稀乙醇50～100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，采用回流装置，加热至沸腾，保持微沸1小时。放冷后，密塞，再称定重量，用水补足减少的重量，摇匀后用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中、用水浴蒸干，于105℃条件下干燥3小时，再置干燥器中冷却30分钟，迅速称重。分别测定了10批样品，测定结果为43.3～55.7%。（见表1）。

表1 不同批次吴茱萸炮制品水分、总灰分和浸出物测定结果

2.4 柠檬苦素含量测定

按《中国药典》2010年版一部附录VID，采用高效液相色谱法，分别测定了10批样品中的柠檬苦素含量。

2.4.1 色谱条件与系统适应性试验

（1）以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

（2）以乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸（41:59:1:0.2）为流动相。

（3）检测波长为225nm。

（4）理论塔板数按柠檬苦素峰计算应不低于3000。

按以上色谱条件进行试验，色谱峰分离条件好。混合对照品色谱峰（吴茱萸碱16.727min，吴茱萸次碱28.917min，柠檬苦素35.770min，柠檬苦素对照品浓度是0.23mg/ml）结果见图2。

A：对照品；B～F：炒吴茱萸1～5；G～H：盐吴茱萸6～7；I：醋吴茱萸8；J～K：黄连炙吴茱萸9～10：1吴茱萸碱；2吴茱萸次碱；3柠檬苦素

2.4.2 对照品溶液的制备 取吴茱萸次碱对照品、柠檬苦素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含吴茱萸碱0.15mg、吴茱萸次碱0.1mg、柠檬苦素0.7mg的混合溶液，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇25ml，称定重量，浸泡1h，超声处理（功率100w，频率40kHz）40min，放冷，再称定重量，用80%乙醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取过滤液，即得。

2.4.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表2。

表2 不同批次吴茱萸炮制品浸出物和柠檬苦素测定结果

5炒四川利民中药饮片有限责任公司（140301）　0.7 6　　盐炙　四川省中药饮片有限责任公司（140820）　0.6 7盐炙　　成都万好药房　1.2 8　　醋炙　　绵阳神农药业有限公司（131201）　2.5 9　黄连炙　　四川省中药饮片有限责任公司　0.2 10黄连炙　　四川洪雅瓦屋山药业有限公司　0.7

3　结果与讨论

吴茱萸中主要药效成分是生物碱［10］，吴茱萸生物碱含量因产地不同差异也较大，其中生物碱含量较高的为武汉地区所产，而吴茱萸中羟基吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量最高的为云南地区所产［11］。据报道，吴茱萸止呕止痛、温中散寒的作用主要依赖于生物碱［12］，所以最佳者应该是炮制后所含挥发油和生物碱多者。因此本次实验中主要采用吴茱萸碱和吴茱萸次碱作为实验对照品。

实验结果为吴茱萸各类炮制品中的吴茱萸内酯（柠檬苦素）、吴茱萸碱、吴茱萸次碱均有不同程度下降，而且以黄连炙吴茱萸下降最多。据相关文献报道［13-16］中的实验结果与本次实验结果相同。究其原因，黄连与吴茱萸煎出液可产生沉淀且复方煎出液中黄连生物碱和吴茱萸生物碱的量均有不同程度的下降。

由于吴茱萸炮制品药材缺乏统一的质量标准来控制质量，因此，本研究根据《中国药典》2010版对质量标准的规定和方法进行系统性实验，为吴茱萸炮制品制定质量控制标准，将作为《四川省中药饮品炮制规范》制定的重要参考依据，对全面控制吴茱萸炮制品的药材质量，保证临床疗效具有重要意义。

感谢四川省食品药品检验所、四川省中药饮片炮制规范制定委员会为本次研究提供经费支持。

［参考文献］

［1］邓先瑜.吴茱萸炮制的历史沿革［J］.中成药，1999，21（6）:297.

［2］洪玉梅，蔡嵩，高慧敏，等.中药吴茱萸RP-HPLC指纹图谱的研究［J］.中国药学杂志，2006，41（12）:895.

［3］任世禾，刘柏年.中药吴茱萸炮制工艺及质量标准研究［J］.中成药，2000，22（9）:627.

［4］彭永红，罗习珍，伍泽红，等.数种吴茱萸炮制品中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量比较［J］.江西中医药，2009，40（7）:70.

［5］王孝涛.历代中药炮制法汇典（现代部分）.江西科学技术出版社，1989年第1版：231.

［6］福建省卫生厅.福建省中药炮制规范.福建科学技术出版社，1988:242.

［7］湖南省卫生厅，湖南省中药炮制规范，湖南科学技术出版社，1983:136

［8］国家药典委员会.2010年版中华人民共和国药典一部［S］.北京:中国医药科技出版社:160.

［9］中华人民共和国卫生部药政管理局全国中药炮制规范.人民卫生出版社，1988版:155.

［10］李群，王易实.正交法探讨吴茱萸炮制工艺［J］.中药材，1991，14（12）:24.

［11］刘蕴秀，罗淑荣，冯孝章，等.薄层荧光扫描法测定吴茱萸药材及其制剂5种生物碱的含量［J］.药学学报，1999，34（5）:3851.

［12］小菅卓夫.吴茱萸的化学和药理.国外医学中医中药分册，1986，8（1）:201.

［13］赵平，许海玉，许浚，等.吴茱萸不同炮制品化学成分的变化分析［J］.中国中药杂志，36（5）:559.

［14］何丽仙，黄忠京，谭倪，等.黄连吴茱萸单煎后配伍沉淀物的化学成分研究［J］.中草药，2007，38（4）:515.

［15］徐艳春，魏璐雪，周玉新.高效液相法测定黄连与吴茱萸配伍前后吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量［J］.中国中药杂志，2001，26（12）:846.

［16］周迎新.中药吴茱萸类的质量比较［J］.中国中药杂志，1993，18（4）:203.

（责任编辑：胡慧玲）

The quality standards research of Wuzhuyu processed products

IU Duo， LU Jian-mei， LV Lu-yang //（Ethnic MedicineInstitute， Southwest University for Nationalities， Chengdu 610041， Sichuan）

［Abstract］Objective: To establish a quality standard for Wuzhuyu processed product. Method: The microscopic identification， TLC and water， ash， and extractum detection were performed for the qualitatively identification of Wuzhuyu. High performance liquid chromatography （HPLC） method was applied to detect limonin concentration in Wuzhuyu. Result: Wuzhuyu can be well distinguished by microscopic identification， and TLC identification was specific. Conclusion: The established method of quality control is accurate， simple and reproducible which can be used for quality control of Wuzhuyu.

［Key words］Wuzhuyu； processed products； quality standard； content

［中图分类号］R 283

［文献标识码］A

［文章编号］1674-926X（2016）02-011-04

［作者简介］刘 铎（1989-），男，汉族，硕士研究生，研究方向：中药、民族药的药理与制剂研究

［通讯作者］吕 露阳（1974-），女，汉族，讲师，博士，主要研究方向：中药、民族药的制剂研究

［收稿日期］2016-02-21