不同干燥方法对虎杖主要有效成分含量的影响

余志芳，欧泉，文静，罗婷婷，马云桐



不同干燥方法对虎杖主要有效成分含量的影响

余志芳，欧泉，文静，罗婷婷，马云桐

［摘要］目的：比较不同干燥方法对虎杖有效成分含量的影响，为虎杖的产地初加工提供科学依据。方法：将采挖的鲜虎杖随机分组，分别采用晒干、阴干、50℃低温干燥、高温杀青干燥、真空冷冻干燥方法进行干燥，以HPLC法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚的含量为评价指标，比较5种方法处理的虎杖药材质量优劣。结果：不同干燥处理方法后有效成分含量差异较大，其中晒干处理使有效成分损失最多，低温干燥、冷冻干燥、自然阴干有利于虎杖有效成分的保留。结论：从经济成本和成分保留及实用性综合分析，阴干更宜于虎杖的干燥处理。

［关键词］虎杖；干燥方法；有效成分；HPLC法

［作者单位］成 都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

Tel:18380191389 Email:zhengnlyzf@163.com

中药材虎杖是蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根茎，其作为传统大宗药材具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰之功效［1］。临床用于湿热黄疸、风湿痹痛、经闭、水火烫伤、跌扑损伤、痈肿疮毒，咳嗽痰多［1］。现代研究表明其所含活性成分较多，主要分为二苯乙烯类和蒽醌类化合物，二苯乙烯类为虎杖苷和白藜芦醇，蒽醌类化合物主要以大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黄素甲醚、大黄酚等为代表［2-4］。药理研究表明虎杖苷具有扩张血管、降血脂、保肝作用［5，6］，虎杖苷注射液是中国第一个受美国FDA临床审批的天然药物，其苷元白藜芦醇具有抗炎、抗肿瘤、保肝作用［7，9］，尤其白藜芦醇在抗艾滋病方面具有显著活性［11］，使得白藜芦醇受国际医药行业的关注。而以大黄素、大黄素甲醚、大黄苷为代表的蒽醌类化合物等在抗菌、抗炎、抗肿瘤及其调节免疫力等方面具有显著活性［12，13］。

中药材干燥效果直接影响产品的使用、质量和外观［14］。朱俊霖等［15］采用6种干燥方法处理黄芩，发现不同干燥方法对黄芩中黄芩苷和黄芩素的含量具有较大影响。檀伟静等［16］采用4种干燥方法对栀子进行处理，结果不同处理组栀子苷等3种有效成分含量变化较大。但目前还未见干燥处理对虎杖成分含量变化的影响，本文对比了冷冻干燥、高温杀青干燥、低温（50℃）干燥、自然晒干、自然阴干5种方法，以虎杖5种有效成分含量的变化为指标，系统评价干燥方法对虎杖药材品质的影响，为虎杖的产地初加工标准提供数据参考，以期避免药材在加工过程中品质降低。

1　材料与试剂

1.1 试验材料

实验材料取自四川省巴中市虎杖种植基地，经成都中医药大学马云桐教授鉴定为蓼科虎杖属植物虎杖（Reynoutria japonica Houtt.），采集鲜品后切片备用。

1.2 主要仪器与试药

Labconco型冻干机（美国）；电热鼓风干燥机（上海将任试验设备有限公司）；KQ5200E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；高效液相分析系统配双波长检测器和在线脱气系统（日本岛津公司）； 色谱柱Agilent Zorbax XDB-C18（4.6×250mm，5μm）（安捷伦公司）；BT-457型电子天平（深圳市博途电子科技公司）；QUINTIX224-1CN型电子分析天平（北京sartorius天平有限公司）。

大黄素（批号：131009）、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（以下称大黄苷，批号：141209）、大黄素甲醚（批号：140820）、白藜芦醇（批号：150122）、虎杖苷（140828）对照品（以上均购自成都克洛玛生物科技有限公司，纯度均≥98%）；无水乙醇（成都科龙化学试剂厂）；甲醇、乙腈（美国赛默飞世尔有限公司）

2　方法与结果

2.1 干燥处理方法

将药材鲜品切片后随机分为5份，每份约1.0 Kg，摊开于托盘中，分别冷冻干燥、高温杀青干燥（105 ℃杀青2 h后50 ℃鼓风直至干燥）、低温干燥（50 ℃鼓风干燥）、自然晒干、自然阴干；样品干燥期间每隔12 h称重，分析其失水状况；药材干燥至两次称重 ＜3.0 g，粉碎过40目筛备用。

2.2 含水量分析

取虎杖样品按“2.1”项下方法处理不同处理组样品干燥过程重量变化见图1，各处理组干燥所需时间及各组性状差异见表1。样品粉粹后对其进行水分测定，水分测定参照2010版《中国药典》采用烘干法：称2 .0 g药材粉末平摊于恒重过的扁形称量瓶中，105 ℃干燥 8 h，移至干燥器中冷却后精密称定，根据减失重量计算其含水量，测量结果见表1。

图1 干燥过程样品重量变化

由图1可知冷冻干燥组、高温杀青干燥组、低温干燥组在12 h内迅速失水，失水量分别为42.7%、44.2%、41.8%，12 h后失水量变化不明显。由于0 ～12 h是夜间干燥，阴干组及晒干组失水量均不大，分别仅为5.3%和5.5%，12-24h白天期间该两组失水量迅速增加分别为38.1%、24.3%，由结果可知冷冻干燥、高温杀青、低温干燥处理虎杖失水最快，而晒干和阴干失水较慢。

表1 不同干燥处理药材干燥时间和含水量

由表1可知，冷冻干燥处理虎杖只需36 h即可达到干燥状态，而自然阴干时间最长为96h。各组药材水分均符合药典规定不得高于12%标准，其中阴干组水分含量最高。药材断面色泽显示冷冻干燥药材颜色最浅，其次是50℃低温干燥组，高温杀青干燥组和阴干组药材颜色棕黄色，晒干组药材颜色最深，接近棕褐色。

2.3 对照品制备

分别称取虎杖苷4.87 mg 、白藜芦醇0.08 mg、大黄苷0.75 mg 、大黄素0.23 mg 、大黄素甲醚0.38 mg 至10 mL容量瓶，以甲醇为溶剂定容，稀释2倍后配成混合对照品溶液备用。

2.4 样品溶液制备

称取0.2 g药材粉末，加入60%乙醇25 mL，超声提取30 min，过滤后定容至50 mL容量瓶备用，进样前过0.45 μm滤膜。

2.5 色谱条件

Agilent Zorbax XDB-C18柱（4.6×250 mm，5μm）；流动相乙腈-0.5%乙酸水；洗脱梯度（以乙腈浓度表示）：0-10 min，15%；10～18 min，15% ～ 25%；18～35 min，25%～35%；35～48 min，35%～70%；48～65 min，70%～78%，流速1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长290 nm；进样体积10μL按照此色谱条件分析得到的样品和对照品色谱图见图2。

图2 虎杖样品中5种有效成分的HPLC图谱

2.6 方法学考察

2.6.1 标准曲线绘制 取混合对照品溶液分别进样2μL，4μL，6 μL，8μL，12μL，15μL，分别计算各化合物浓度与色谱峰面积之间的回归方程，线性关系良好，结果见表2。

表2 虎杖中5种成分的回归方程

2.6.2 精密度试验 取同一虎杖样品，按照“2.2.2”项下制备供试品，按照“2.5”项下色谱方法连续进样5次，测定虎杖苷、白藜芦醇、大黄苷、大黄素、大黄素甲醚的峰面积，各化合物峰面积的RSD（n=6）分别为0.1%，0.3%，0.2%，0.4%，2.0%。

2.6.3 重复性考察 称取5份虎杖样品，按照“2.2.2”项下制备样品，按“2.2.3”项下色谱方法分析得到样品中虎杖苷、白藜芦醇、大黄苷、大黄素、大黄素甲醚的含量分别为23.763、0.441、7.941、0.596 、0.507mg/g，RSD（n=5）分别为2.0 %、1.3%、1.3%、1.7%、2.0%。

2.6.4 稳定性考察 取同一虎杖样品，按照“2.2.2”项下制备供试品，按“2.2.3”项下色谱方法每隔6 h进样，计算上述5种化合物色谱峰面积RSD，各化合物RSD（n=6）分别为0.1%、1.1%、1.1 %、1.8%、2.1%，表明各化合物在36 h内稳定性良好。

2.6.5 加样回收试验 分别称取虎杖苷10.010mg、白藜芦醇0.312mg、大黄苷3.280mg、大黄素0.360mg、大黄素甲醚0.250mg至100ml容量瓶中，60%乙醇定容，得到混合对照液。根据“2.6.3”重复性实验得到样品中5种有效成分的含量，取样品6份，分别为0.10865、0.10216、0.12279、0.10645、0.10195、0.12265 mg，各份样品分别加上述混合对照品10mL，再加60%乙醇15mL，按“2.4”项下方法制备供试品，经“2.2.3”色谱分析方法得到各样品色谱峰，根据峰面积与回归方程计算回收率得到虎杖苷、白藜芦醇、大黄苷、大黄素、大黄素甲醚回收率分别为96.7 %、95.2%、98.1%、98.2%、101.0%。

2.7 样品测定

将虎杖鲜品不同处理得到的干燥品按照“2.2.2”项下制备样品，按“2.2.3”项下色谱条件下测定，以干燥品计，鲜品和干燥品中5种化学成分的含量见表3。

表3 不同干燥处理后虎杖5种活性成分含量

如表3，与鲜品对比，经高温杀青干燥、低温干燥、阴干、晒干组处理后虎杖苷的含量依次下降了2.2%、5.3%、11.2%、18.5%，而白藜芦醇比鲜品升高了33.9%、218.8%、238.4%、150.9%，而冷冻干燥和高温杀青干燥对虎杖苷和白藜芦醇的含量变化不大。 大黄苷数据显示经5组干燥方法处理，除低温干燥组和阴干组含量分别降低了15.6%和11.0%外，其他各组变化不大。相应的低温干燥组和阴干组大黄素的含量分别升高了47.8%和55.1%，而高温杀青组大黄素下降了22.2%。同样，高温杀青组中大黄素甲醚含量降低量也最大，达到58.3%，其他组对大黄素甲醚含量影响却存在不规则变化。

3　讨论

本研究中，经高温杀青干燥、低温干燥、阴干、晒干处理后虎杖苷含量较鲜品依次下降，相应的白藜芦醇含量却显著增高，这可能是这几种干燥方法使虎杖苷降解为其苷元白藜芦醇，而晒干组虎杖苷的降低量最大，白藜芦醇却只是适当上升，这可能是与晒干环境下光照引起已转化的白藜芦醇又降解有关，这与周丽［17］研究表明0.5 h日光光照即可引起白藜芦醇的降解相吻合，因此晒干不可作为虎杖的干燥方法。同样的，低温干燥组与阴干组中大黄苷含量较鲜品降低，相应的大黄素含量较鲜品上升，可能是大黄苷降解为其苷元大黄素的原因。高温杀青干燥组大黄素和大黄素甲醚含量较鲜品均降低，可能是蒽醌类化合物酚羟基较多，高温下更易氧化［18］。从有效成分保留方面评价5种干燥方法的优劣为：低温干燥最佳，冷冻干燥和自然阴干次之，其次是高温杀青干燥，晒干最不利于其有效成分的保留。从实际考虑冷冻干燥和低温干燥需要高成本投入不符合实际，综合考虑虎杖有效成分及经济成本，自然阴干可作为虎杖的干燥方法。

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（责任编辑：胡慧玲）

Effect of different drying methods on active components contents of Huzhang

YU Zhi-fang， OU Quan， WEN Jing，LUO Ting-ting， MA Yun-tong//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine； Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137，Sichuan）

［Abstract］Objective: To provide a scientific basis for the original processing of Huzhang by comparing effect of different drying methods on active components content. Method: The fresh medicinal material was divided into 5 groups randomly and treated using the methods of drying methods including natural drying in the sun， natural drying in the shade， oven 50℃ lowtemperature drying， high-temperature drying under 105℃， and vacuum freeze-drying. The contents of polydatin， resveratrol，emodin-8-O-glucoside， emodin and physcion were used as examine indicators to compared the effect of different methods. Result: Significant differences were found among components contents after treated with different drying methods. The drying in the sun caused the most loss of active ingredients. However， low-temperature drying， freeze-drying and drying in the shade were beneficial for the active components reservation. Conclusion: Comprehensively considering cost， remained active components and practicability， the method of drying in the shade is suggested to be adopted for Huzhang processing.

［Key words］Huzhang； drying method； active component； HPLC

［中图分类号］R282.4

［文献标识码］A

［文章编号］1674-926X（2016）02-004-04

［基金项目］巴 州区道地中药材虎杖种植技术集成及产业化示范项目（编号：313-672）

［作者简介］余志芳（1989-），女，硕士生，从事中药品种、质量及资源研究

［通讯作者］马 云桐（1963-），男，教授，从事中药种质及资源研究工作 Email:mayuntong06@163.com

［收稿日期］2016-03-04