欢天安神饮的质量标准研究

赵　颖，李　文，刘永年，隆红艳，杜　秋

(1.南京市中医院药学部，江苏 南京　210001； 2.南京市中医院门诊，江苏 南京　210001； 3.南京市中医院中心实验室，江苏 南京　210001)

欢天安神饮的质量标准研究

赵颖1*，李文1#，刘永年2，隆红艳3，杜秋1

(1.南京市中医院药学部，江苏 南京210001； 2.南京市中医院门诊，江苏 南京210001； 3.南京市中医院中心实验室，江苏 南京210001)

摘要目的：建立欢天安神饮的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对欢天安神饮中的丹参、郁金、远志进行薄层鉴别；采用高效液相色谱法对欢天安神饮中的丹参酸B进行含量测定。结果：薄层色谱的斑点清晰；丹酚酸B在进样量为0.25～5 μg时，线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为103.35%(RSD=1.01%，n=6)。结论：本鉴别方法的专属性强，含量测定方法的准确性可靠，可用于欢天安神饮的质量控制。

关键词欢天安神饮； 丹酚酸B； 薄层色谱法； 高效液相色谱法； 质量标准

欢天安神饮已在南京市中医院(以下简称“我院”)使用多年，为我院名老中医刘永年的常用经验方，疗效显著、安全性高，目前正按照新医院制剂的申报要求对其进行研究。该方主要由丹参、合欢皮、郁金等9味中药组成，其功效为疏肝达郁、和血安神，主治失眠肝郁神伤证，症见入睡困难、或多梦不实易惊、或早醒难以复寐，情志不舒，胸胁胀痛，烦躁易怒，苔薄白，脉细弦。本研究采用薄层色谱法对方中丹参、郁金、远志进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对丹酚酸B进行含量测定，为建立欢天安神饮的质量标准提供理论依据。

1材料

1.1仪器

1290型超高压液相色谱仪(安捷伦公司)；紫外检测器(安捷伦公司)；色谱柱为Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪马公司)，柱号：225-1125。

1.2药品与试剂

乙腈为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。水为纯净水。丹酚酸B对照品(批号：111562)；丹参对照药材(批号：120923)；郁金对照药材(批号：120949)；远志对照药材(批号：120989)，以上对照品、对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。欢天安神饮：自制，批号分别为130727、130729、130731。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1丹参：取本制剂1.5 ml，加75%甲醇溶液25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液；取丹参对照药材粉末0.2 g，加75%甲醇溶液25 ml，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为对照药材溶液；另取缺丹参的阴性制剂，按上述处理方法，制得阴性制剂溶液。按照《中华人民共和国药典》薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(V∶V∶V∶V∶V=2.0 ∶3.0 ∶4.0 ∶0.5 ∶2.0)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视[1-4]。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性制剂无干扰，见图1。

1.丹参对照药材；2—4.3批欢天安神饮；5.阴性制剂1.salvia miltiorrhiza standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5. negative preparation图1　丹参的TLC图Fig 1　TCL of salvia miltiorrhiza

2.1.2郁金：取本制剂10 ml，加无水乙醇25 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，将残渣加无水乙醇1 ml使之溶解，作为供试品溶液；取郁金对照药材2 g，加无水乙醇25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，将残渣加无水乙醇1 ml使之溶解，作为对照药材溶液；另取缺郁金的阴性制剂，按照上述处理方法，制得阴性制剂溶液。按照《中华人民共和国药典》薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(V∶V=17 ∶3)为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，置日光和紫外光灯(365 nm)下检视[5-8]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点或荧光斑点，阴性制剂无干扰，见图2。

1.郁金对照药材；2—4.3批欢天安神饮；5.阴性制剂1.radix curcumae standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5.negative preparation图2　郁金的TLC图Fig 2　TCL of radix curcumae

2.1.3远志：取本制剂6 ml，加70%甲醇溶液20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，将残渣加70%甲醇溶液1 ml使之溶解，作为供试品溶液；取远志对照药材粉末0.5 g，加70%甲醇溶液20 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，将残渣加70%甲醇溶液1 ml使之溶解，作为对照药材溶液；另取缺远志的阴性制剂，按照上述制剂处理方法，制得阴性制剂溶液。按照《中华人民共和国药典》薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(V∶V∶V=7 ∶3 ∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视[9-12]。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性制剂无干扰，见图3。

1. 远志对照药材；2—4.3批欢天安神饮；5.阴性制剂1.polygala tenuifolia standard medical material; 2—4.three bunches of Huantian Anshen drink; 5.negative preparation图3　远志的TLC图Fig 3　TCL of polygala tenuifolia

2.2丹酚酸B的含量测定

2.2.1色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪马公司)，柱号：225-1125；流动相：乙腈-2%乙酸(V∶V=20 ∶80)；检测波长：284 nm；进样量：10 μl；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于3 000。

2.2.2对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥器干燥24 h的丹酚酸B对照品适量，加流动相制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品储备溶液。

2.2.3供试品溶液的制备：取装量差异项下的欢天安神饮2 ml，精密加入甲醇10 ml、水8 ml，使甲醇浓度为50%，称定质量，超声处理30 min(微波功率400 W)，冷却，再称定质量，用50%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4阴性溶液的制备：取缺丹参的样品，按照“2.2.3”项下方法制备阴性溶液。

2.2.5专属性试验：取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液，按照上述色谱条件，进样10 μl，测定，结果表明，在丹酚酸B色谱峰处无干扰，见图4。

2.2.6标准曲线及线性范围：精密称取0.5 mg/ml的对照品储备溶液，分别吸取0.5 mg/ml对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 μl，进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积均值(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程Y=1 123.43X-13.55，r=0.999 9(n=6)。结果显示，丹酚酸B进样量在0.25～5 μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.7精密度试验：取质量浓度为0.1 mg/ml的丹酚酸B对照品溶液，按照上述色谱条件，连续进样6次，进样量为10 μl，测定其峰面积，计算RSD(%)。结果显示，RSD为0.74%，表明精密度良好。

2.2.8稳定性试验：取供试品溶液，每隔2 h进样1次，每次10 μl，测定丹酚酸B在10 h内的峰面积，计算RSD(%)。结果显示，RSD为0.77%，表明供试品溶液在10 h内稳定性符合要求。

2.2.9重复性试验：精密量取5份欢天安神饮各2 ml，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml、水8 ml，使甲醇的含量为50%，称定质量，超声处理30 min(微波功率400 W)，冷却，再称定质量，用50%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行试验5份，进样量10 μl，按上述色谱条件测定其丹酚酸B的含量，计算RSD(%)。结果显示，RSD为0.17%，表明本方法重复性良好。

2.2.10加样回收率试验：精密称取丹酚酸B含量为0.6 mg的欢天安神饮0.5 ml，置于具塞锥形瓶中，平行6份，每2份为1组，分别精密加入质量浓度为0.631 2 mg/ml丹酚酸B对照品溶液1.0、1.2、1.4 ml，按照上述供试品溶液最佳制备方法制备，即精密加入50%甲醇溶液5 ml，密塞，称定质量，超声处理30 min(微波功率400 W)，冷却，再称定质量，用50%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件同前，进样量10 μl，以外标两点法测定其丹酚酸B的含量。结果显示，平均回收率为103.35%，RSD为1.01%，表明本品回收率符合要求，见表1。

表1　加样回收率试验结果

2.2.113批样品丹酚酸B含量测定结果：取装量差异项下的合剂2 ml，按供试品溶液制备方法制备，得供试品溶液。色谱条件同前，进样量10 μl，以外标两点法测定其丹酚酸B的含量，3批样品(130727、130729、130731)丹酚酸B含量测定结果分别为262.5、250.0、260.0 mg/ml。

3讨论

本试验曾考虑选用合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量作为质量标准的检测指标，但其指标性成分峰型不好，有干扰，故最终选用丹参中的丹酚酸B含量为最终的检测指标。

丹酚酸B含量测定在流动相的选择上也曾摸索了多个方法，其中《中华人民共和国药典》(2010版)中的丹酚酸B的流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(V∶V∶V∶V=30 ∶10 ∶1 ∶59)，由于本试验所用仪器安捷伦1290型高效液相色谱仪为二元泵，故《中华人民共和国药典》(2010版)中的流动相在每次使用之前需人工配置，容易造成人为误差，且流动相的误差会造成色谱峰的保留时间出现略微的差异。故本试验经过反复摸索，并查阅了相应的文献[13-15]，最终确定丹酚酸B含量测定中的流动相为乙腈-2%乙酸(V∶V=20 ∶80)。

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Study on Quality Standard for Huantian Anshen Drink

ZHAO Ying1, LI Wen1, LIU Yongnian2, LONG Hongyan3, DU Qiu1

(1.Dept.of Pharmacy, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Nanjing 210001, China; 2.Dept.of Outpatient, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Nanjing 210001, China; 3.Dept.of Central Lab, Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jiangsu Nanjing 210001, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the quality standard for Huantian Anshen drink. METHODS: Qualitative identification of Salvia miltiorrhiza, Radix curcumae and Polygala tenuifolia was conducted by thin layer chromatography(TLC). The content of Salviaacid B was determined by HPLC. RESULRS: TLC spots were clear without interference from negative sample. The linear range of loganin was 0.25-5 μg(r=0.999 9)with the average recovery of 103.35%(RSD=1.01%, n=6). CONCLUSIONS: The established quality standard is highly specific, the content determination method is correct and reliable, which can be used in the quality control of Huantian Anshen drink．

KEYWORDSHuantian Anshen drink; Salviaacid B; HPLC; TLC; Quality standard

#通信作者：主任中药师。研究方向：中药鉴定及药剂相关研究。E-mail：njzyyliwen@sohu.com

中图分类号R927.11；R932

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)05-0633-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.05.023

(收稿日期：2015-08-27)

*主管中药师。研究方向：医院制剂的质量标准研究。E-mail：86371797@qq.com