中性粒细胞CD64和血清sTREM-1在老年社区获得性肺炎中的诊断价值探讨

农贤刚　程卫萍

(贵港市中西医结合骨科医院，贵港537100)

中性粒细胞CD64和血清sTREM-1在老年社区获得性肺炎中的诊断价值探讨

农贤刚程卫萍

(贵港市中西医结合骨科医院，贵港537100)

[摘要]目的：探讨中性粒细胞CD64和sTREM-1在老年社区获得性肺炎(CAP)诊断中的临床价值。 方法：将76例老年CAP住院患者按病情严重程度分为重症肺炎组23例(存活15例，死亡8例)，普通肺炎组53例；同期进行健康体检老年人45例为对照组。采用流式细胞术检测外周血中性粒细胞CD64的表达，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测sTREM-1的水平，并应用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve，ROC)分析二者对老年CAP的诊断价值。 结果：重症肺炎组、普通肺炎组、对照组CD64中位数水平分别为37.49、18.82、10.63MFI，三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；重症肺炎组sTREM-1中位数为75.39 pg/ml，高于普通肺炎组和对照组(分别为65.31、43.96 pg/ml)，三组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)；重症肺炎存活组CD64、sTREM-1随着病情好转逐渐降低至正常水平，而死亡组 CD64、sTREM-1随着病情的加重持续升高，且在死亡时达到最高值；二者诊断老年CAP的ROC曲线下面积分别为0.876、0.843，联合二者诊断CAP的ROC曲线下面积为0.917。 结论：CD64、sTREM-1可作为老年CAP有价值的诊断指标，动态监测两项指标的水平变化趋势能够反映CAP的病情以及预后。

[关键词]中性粒细胞CD64；可溶性髓系细胞触发受体-1；老年；社区获得性肺炎

社区获得性肺炎(Community acquired pneumonia，CAP)是一种严重威胁人类健康的常见感染性疾病。近年来，随着社会人口老龄化态势的日益严峻， 老年CAP尤其是重症CAP的发病率不断上升。老年人因基础疾病的积累，免疫力水平差，病死率较高，目前重症CAP死亡率高达30%～70%[1]。早期诊断和准确评估患者病情严重程度、变化趋势，将有益于治疗方案的制定和判断患者预后。近年有文献报道，应用流式细胞仪检测CD64的表达水平可作为早期诊断细菌感染的特异性指标[2]，可溶性髓系细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1，sTREM-1)对CAP诊断及病情严重程度评估有重要价值[3]。本研究通过对老年CAP患者疾病发展过程中中性粒细胞CD64和sTREM-1表达水平变化的动态观察，探讨CD64和sTREM-1在老年CAP诊断和疗效观察、预后判断等方面的临床价值。

1材料与方法

1.1资料选取2013年1月至2015年5月本院呼吸内科收治的老年CAP患者76例作为观察组，其中男46例，女30例；年龄61～82岁，平均(71.4±5.7)岁；根据病情严重程度分为重症肺炎组23例(存活15例，死亡8例)，普通肺炎组53例，所有患者均符合中华医学会呼吸病学分会2006年制定的《社区获得性肺炎诊断和治疗指南》的CAP诊断标准[4]，且排除合并其他部位感染及肺部疾病者、恶性肿瘤、活动性肺结核、器官移植和AIDS者、终末期肝或肾功能衰竭者。另选取同期在本院进行健康体检老年人45例为对照组，男28例，女17例；年龄60～79岁，平均(70.6±5.1)岁。观察组与对照组在性别、年龄构成等方面均无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1标本采集所有观察组患者在发病或者入院后的第1、4、7天抽取静脉血5 ml，其中2 ml EDTA-K2抗凝静脉血用于中性粒细胞CD64测定；3 ml静脉血置于促凝生化管，离心后取血清保存于-20℃冰箱，用于血清sTREM-1水平测定。对照组空腹采集血标本，处理同上。

1.2.2测定方法CD64检测 50 μl全血加CD64-FITC抗体20 μl(美国BD公司生产)混匀，以IgG-FITC为同型对照，室温避光放置30 min后加流式细胞分析(FACS)溶血剂2 ml，暗处再放置15 min，用美国BD FACS Calibur流式细胞仪进行检测，根据FSC/SSC点图显示的形态学特征选定中性粒细胞群，每个样本计数10 000个细胞，测定CD64的平均荧光强度(MFI)； 血清sTREM-1测定采用双抗体夹心ELISA法，sTREM-1检测试剂盒由上海沪峰生物科技有限公司提供。所有检测操作均严格按照试剂盒说明书进行。

2结果

2.1对照组与观察组CD64、sTREM-1水平的变化普通肺炎组、重症肺炎组中性粒细胞CD64、sTREM-1水平均明显高于对照组，且重症肺炎组明显高于普通肺炎组，差异均有统计学意义(P<0.05)。重症肺炎组、普通肺炎组、对照组中性粒细胞CD64中位数分别为37.49、18.82、10.63 MFI；sTREM-1中位数分别为75.39、65.31、43.96 pg/ml。见表1。

2.2不同组别CD64检测结果流式细胞仪分析图谱见图1。

2.3重症肺炎死亡组与存活组CD64、sTREM-1动态变化水平比较存活组患者随着病情的好转，患者CD64、sTREM-1水平呈下降趋势，转出院时降低至正常水平；死亡组患者CD64、sTREM-1水平不断升高，且在死亡时达到最大值。见表2。

2.4CD64、sTREM-1诊断CAP敏感性和特异性比较以本组资料通过SPSS17.0软件绘制ROC曲线分析发现，CD64曲线下面积(AUC)为0.876，sTREM-1的AUC为0.843，联合2项指标诊断CAP的AUC为0.917。以曲线中最靠近左上角的一点为最佳截断值，计算得出阳性标准以16.34 MFI为最佳截断值时，CD64诊断老年CAP的敏感性为80.3%，特异性为91.1%、；以57.76 pg/ml为界时，sTREM-1诊断老年CAP的敏感性为82.9%，特异性为84.4%；两项联合对老年CAP诊断的敏感性和特异性分别为90.8%，95.5%。见表3。

2.5相关性分析Pearson相关分析显示，CAP患者血清sTREM-1水平与中性粒细胞CD64之间呈正相关(r=0.631，P<0.01)。

GroupsnCD64(MFI)sTREM-1(pg/ml)Controlgroup4510.63±3.2143.96±4.83OrdinaryCAPgroup5318.82±7.471)65.31±17.961)SevereCAPgroup2337.49±16.041)2)75.39±23.521)2)F45.6154.42P<0.05<0.05

Note：Compared with control group，1)P<0.05；compared with ordinary pneumonia group，2)P<0.05.

TimeSurvivalgroup(n=15)CD64(MFI)sTREM-1(pg/ml)Deathgroup(n=8)CD64(MFI)sTREM-1(pg/ml)1st36.34±14.4874.72±21.5339.63±18.9776.64±27.264th19.47±15.7368.49±25.6246.33±16.0792.57±32.247th14.93±14.2249.52±8.2451.54±19.03117.72±32.83outpatient/antemortem9.89±4.1236.52±4.4362.02±19.87148.80±28.16

表3CD64、sTREM-1对CAP诊断效能的比较(%)

Tab.3Diagnostic efficacy of CD64 and sTREM-1 for CAP(%)

ParameterAUCSensitivitySpecificity95%CICD640.87680.391.10.781-0.962sTREM-10.84382.984.40.729-0.957CD64+sTREM-10.91790.895.50.864-0.976

图1　流式细胞仪分析图Fig.1　Flow cytometry analysis diagram

3讨论

CAP是老年人呼吸系统常见病及多发病，是具有潜在生命危险的感染性疾病。老年CAP临床症状不典型，临床医生判断病情困难，常常造成对病情的严重程度估计不足。因此，临床迫切需要有效的血液学诊断指标，以辅助CAP的及时诊断和准确预测患者病情变化趋势和严重程度，为指导临床制定治疗方案和分级治疗提供依据。

随着流式细胞仪的普及和应用，外周血中性粒细胞CD64的表达在临床诊断和治疗细菌性感染中得到越来越多的应用。CD64是免疫球蛋白IgG的Fc段受体之一，又称Fcγ-RI，为免疫球蛋白超家族成员。它是一个高亲和力的受体，表达受细胞因子的调节，起连接体液免疫和细胞免疫的桥梁作用[5]，主要分布在单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞等抗原呈递细胞表面，正常情况下，在外周血的中性粒细胞表面CD64仅少量表达，但当机体受到感染时，其表达水平明显增高，可增多5～10倍，且上升速度很快[6]，在4～6 h内会大量升高[7]。本研究通过对老年CAP患者进行相关检测分析，发现普通肺炎组、重症肺炎组中性粒细胞CD64水平均明显高于对照组，且重症肺炎组明显高于普通肺炎组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；重症肺炎存活组CD64随着病情的好转逐浙下降至正常水平，而死亡组CD64随着病情的加重持续升高，与陈琳磊等[8]的报道相似，提示CD64与老年CAP病情严重程度呈正相关，可作为评估老年CAP患者病情及判断相应的预后的指标应用于临床。另外，CD64表达检测与其他检查相比，需要的血量较少、操作简单，检测快速准确，可以单独或联合其他指标进行诊断[9]，其受性别、年龄、抗菌药物等因素的影响小、且在基层医院都较易于实施，值得临床推广应用。

sTREM-1是TREM-1的分泌亚型，在感染的过程中能够释放于血液或体液中，与感染严重程度密切相关，是一种早期诊断炎症性疾病的新指标。sTREM-1在免疫过程发挥重要作用，是促炎性因子[10]。中性粒细胞和巨噬细胞等细胞中sTREM-1表达量最多，在炎性级联反应中发挥着放大作用[11]。国外有研究证实，sTREM-1水平的高低反应了感染的程度，严重感染时会显著升高，临床可用于评估感染性疾病的发展和预后[12]，肺部感染患者血清中sTREM-1明显增高[13]。本研究结果显示，普通肺炎组、重症肺炎组中血清sTREM-1水平均明显高于对照组，且重症肺炎组明显高于普通肺炎组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；重症肺炎死亡组患者血清sTREM-1水平持续升高，而存活组患者血清sTREM-1水平呈下降趋势，说明sTREM-1是一种促炎介质，动态监测其水平变化趋势能够反映CAP的病情以及预后情况，水平下降，病情好转，反之，则考虑病情进展预后不良，与文献[13,14]的报道相似。

本研究数据ROC曲线分析显示，CD64诊断CAP的特异性为91.1%优于sTREM-1(84.4%)，而sTREM-1的敏感性为82.9%比CD64(80.3%)高，CD64曲线下面积(AUC)为0.876大于sTREM-1的AUC为0.843，说明对于考察老年CAP早期诊断的单一检测指标，CD64相比sTREM-1具有更好的预测值；联合两项指标诊断CAP的ROC曲线下面积可达到0.917，敏感性和特异性分别提升至90.8%、95.5%，表明应用CD64和sTREM-1联合检测对CAP的诊断价值更大。相关性分析表明，CAP患者血清sTREM-1水平与中性粒细胞CD64之间呈正相关，提示两项指标联合检测能互为补充，有可能进一步提高患者病情评估的准确性，利于及时监测疾病进展情况。

综上所述，CD64、sTREM-1均可作为老年CAP早期诊断有价值的参考标志物，动态监测二者的水平变化趋势能够反映CAP的病情以及预后。CD64和sTREM-1联合检测可以提高诊断的灵敏度和准确率、对老年CAP的早期诊断、疗效观察、预后判断具有重要的临床价值，值得在临床推广应用。

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[收稿2015-08-21修回2015-09-28]

(编辑许四平)

Study of diagnostic value of neutrophil CD64 and sTREM-1 in elderly patients with community-acquired pneumonia

NONG Xian-Gang,CHENG Wei-Ping.

Integrative Medicine Orthopaedic Hospital in Guigang City,Guigang 537100，China

[Abstract]Objective:To explore the neutrophil CD64 and sTREM-1 in elderly patients with community-acquired pneumonia (CAP) in the diagnosis of clinical value.Methods: 76 elderly CAP hospitalized patients were divided into severe pneumonia group (n=23) (live in 15 cases,8 deaths)and ordinary pneumonia group(n=53) according to severity;45 patients in the control group compared with healthy older persons.Peripheral blood neutrophil CD64 was measured by automatic flow cytometry，sTREM-1 levels was measured by double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay.The receiver operating characteristic curve (ROC curve) was used to check diagnostic value of the detection.Results: Median concentrations of CD64 and sTREM-1 in the severe pneumonia group,general pneumonia group and control group were 37.49,18.82 and 10.63 MFI,and 75.39，65.31 and 43.96 pg/ml， respectively.Although there was significant differences among the three groups (P<0.05)； CD64 and sTREM-1 in Severe pneumonia survival group reduced to a normal level as his condition improved gradually,death group continued to rise as the disease,and peaked at the time of death;the area under the ROC curve of CD64，sTREM-1were respectively 0.876,0.843,which was 0.917 by combination of CD64 and sTREM-1.Conclusion: Both CD64 and sTREM-1 are good markers in the diagnosis value of CAP, the dynamic changes of two may reflect the condition and prognosis of CAP.

[Key words]Neutrophil CD64;Soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1;Elderly;Community-acquired pneumonia

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.06.022

作者简介：农贤刚(1971年-)，男，主管检验师，主要从事临床生化和免疫检验研究，E-mail：Nongxiangang2014@163.com。

中图分类号R446.1

文献标志码A

文章编号1000-484X(2016)06-0871-04