八正颗粒的质量标准提高研究

史亚柱，刘皈阳，李　翔，黎春彤，冯春景

1.解放军第203医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000；2.解放军总医院第一附属医院，北京 100048



·药学研究·

八正颗粒的质量标准提高研究

史亚柱1，刘皈阳2*，李翔2，黎春彤2，冯春景2

1.解放军第203医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000；2.解放军总医院第一附属医院，北京 100048

[摘要]目的建立八正颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对八正颗粒中的大黄、栀子、车前子、灯心草、甘草进行定性鉴别；采用HPLC法对制剂中的栀子进行含量测定。结果大黄、栀子、车前子、灯心草、甘草的薄层色谱斑点清晰，重现性好，专属性强，阴性对照无干扰。含量测定中，栀子苷在2.32～46.4 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为99.41%，RSD=1.46% (n=6)。结论所建立的定性、定量方法简便易行，重现性好，为八正颗粒提供了有效的质量控制方法。

[关键词]八正颗粒；质量标准；薄层鉴别；高效液相色谱法

0引言

八正颗粒是解放军第二〇三医院的医院制剂，由八正合剂演变而来，由瞿麦、木通、大黄、栀子、车前子、灯心草、甘草、萹蓄、滑石共9味药材组成，清热泻火、利水通淋[1]。常用于膀胱炎、尿道炎、急性前列腺炎、泌尿道结石及急性肾炎、急性肾盂肾炎。在临床中长期使用，疗效确切，获得患者的广泛认可[2]。八正颗粒并未收入药典，有文献对其薄层鉴别、含量测定进行报道，但对其质量控制尚无统一标准[3-5]。为提高产品质量标准，保证药效一致，本研究采用薄层色谱分别对八正颗粒中的大黄、栀子、车前子、灯心草、甘草进行定性鉴别，采用HPLC法测定制剂中栀子苷的含量，对八正颗粒进行全面的质量标准研究，建立和完善八正颗粒质量标准，为控制药品质量、保证药品安全有效提供依据。

1仪器与材料

Agilent 1200型高效液相色谱仪，Agilent 1200系列四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站(美国安捷伦公司)；瑞士卡玛Linomat 5半自动点样仪；梅特勒-托利多AE200电子天平；80-2离心沉淀机(金坛市金南仪器厂)；ZF-90暗箱式紫外透射仪(上海顾村电光仪器厂)；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

德国默克硅胶60高效薄层板(德国Merck)；对照药材、对照品均购自中国食品药品检定研究院：栀子苷对照品(批号：110749-201316)、大黄素对照品(批号：110756-200110)、大黄酚对照品(批号：110796-201308)、芦荟大黄素对照品(批号：110795-201308)、大黄素甲醚对照品(批号：758-9803)、甘草苷对照品(批号：111610-201106)、毛蕊花糖苷对照品(批号：111530-201411)为含量测定用；大黄对照药材(批号：121249-201304)、栀子对照药材(批号：120986-201309)、车前子对照药材(批号：121628-201001)、灯心草对照药材(批号：121463-201002)、川木通对照药材(批号：121409-201402)、瞿麦对照药材(批号：121685-201301)、萹蓄对照药材(批号：121673-201201)、甘草对照药材(批号：120904-201318)为薄层鉴别用。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1大黄的薄层色谱鉴别取本品2 g，加二氯甲烷20 mL，超声处理30 min，滤过蒸干，1 mL甲醇复溶为供试品溶液。另取大黄对照药材0.2 g，参照2015版《中国药典》[1](以下统称《药典》)大黄药材薄层鉴别项下方法处理。再取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。上述溶液按照《药典》大黄药材薄层鉴别项下色谱条件展开并观察，结果见图1。

图1　大黄的TLC图谱

4.大黄对照药材，5.芦荟大黄素对照品，6.大黄素对照品，7.大黄素甲醚对照品，8.大黄酚对照品，9.缺大黄阴性样品；a.365 nm下观察，b.置氨蒸气中熏后，条斑变为红色结果

2.1.2栀子的薄层色谱鉴别取本品2 g、栀子对照药材0.2 g，参照《药典》栀子药材薄层鉴别项下方法，以甲醇超声法制备供试品和对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。上述溶液以二氯甲烷-甲醇(5∶1)展开并观察，在10%硫酸乙醇溶液中，105 ℃加热显色，结果见图2。

2.1.3车前子的薄层色谱鉴别取“2.1.2”项下供试品溶液。另取车前子对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。再取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。上述溶液分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸-水(2∶1∶7)展开并观察，置紫外光灯(365 nm)下检视，结果见图3。

2.1.4甘草的薄层色谱鉴别取“2.1.2”项下供试品溶液。另取甘草对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。再取甘草苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(7∶0.5∶1)展开，喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热显色，见图4。

图2　栀子TLC图谱

4.栀子对照药材，5.栀子苷对照品，6.缺栀子阴性样品

图3　车前子TLC图谱

4.车前子对照药材，5.毛蕊花糖苷对照品，6.缺车前子阴性样品

图4　甘草TLC图谱

4.甘草对照药材，5.甘草苷对照品，6.缺甘草阴性样品；b.365 nm下检视

2.1.5灯心草的薄层色谱鉴别取“2.1.2”项下供试品溶液。另取灯心草对照药材0.2 g同法制成对照药材溶液。参照《药典》灯心草药材薄层鉴别项下色谱条件展开，见图5。

图5　灯心草TLC图谱

4.灯心草对照药材，5.缺灯心草阴性样品

2.2含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(30∶70)；柱温：25 ℃；检测波长：238 nm；进样量：

10 μL，运行时间：12 min。

2.2.2溶液制备①供试品溶液的制备：精密称量同一批号八正颗粒0.3 g，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，取续滤液，即得。②对照品溶液的制备：取在60 ℃减压干燥4 h的栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含232 μg的溶液，即得。③阴性溶液的制备：按照八正颗粒的处方比例和制法，制备缺栀子的阴性对照样品，按照供试品溶液的制备项下方法制备成阴性对照溶液。

2.2.3系统适应性试验分别取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，在“2.2”项下色谱条件，各进样10 μL，记录HPLC图谱。见图6。结果显示，栀子苷保留时间为9.22 min，与其他成分分离良好，不受其他成分干扰，理论塔板数按栀子苷计，不低于5 000。

图6　栀子苷的HPLC图谱

2.2.4线性关系精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。上述溶液依次进样，进样量10 μL，记录峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标、栀子苷浓度(X)为横坐标进行线性回归，栀子苷在2.32～46.4 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为Y=14.49 X-1.390，r=0.999 9，线性范围2.32～46.4 μg/mL。

2.2.5精密度试验精密吸取上述对照品溶液10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录栀子苷峰面积，其RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

2.2.6稳定性试验取上述同一供试品溶液(批号：20140901)，分别在0、2、4、8、12、24 h，按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，其RSD为0.78%，结果表明，供试品溶液放置24 h内稳定性良好。

2.2.7重复性试验取同一批次供试品(批号：20140901) 6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，重复进样6次，记录峰面积，栀子苷的平均含量为1.871 μg/mg，RSD为1.95%，表明方法的重复性良好。

2.2.8加样回收率试验称取已知含量(含栀子苷1.871 μg/mg)的同一批八正颗粒约0.15 g，精密称定，分别加入栀子苷对照品储备液1.1 mL，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液，测定栀子苷的含量，计算回收率。栀子苷平均加样回收率为99.41%，RSD为1.46%。结果见表1。

2.2.9样品的含量测定取3批八正颗粒(批号：20140501、20140901、20141101)，按“2.2.1”项下方法，制备供试品溶液，“2.2.2”项下色谱条件进样，记录峰面积，计算栀子苷的含量，结果见表2。

3讨论

3.1薄层鉴别在鉴别试验中，对原标准中大黄和栀子的鉴别进行了修订。考察了《药典》大黄和栀子药材鉴别项下的提取方法，考虑到栀子和大黄在八正颗粒制法中分别为50%乙醇提取和水提取，本试验又考察了文献中超声提取的方法，提取溶剂分别对比了二氯甲烷、甲醇和水，最终确定大黄鉴别采用二氯甲烷超声提取，栀子采用甲醇提取的方法，节省了操作时间，简化了操作步骤，保证了检验工作的有效性和高效率[4]。

表1　栀子苷加样回收率试验

表2　三批样品的含量测定结果(μg/mg)

本试验在原有标准基础上，增加了车前子、甘草和灯心草的薄层鉴别。车前子鉴别试验：考察了文献中车前子药材的薄层鉴别方法，发现采用《药典》法，毛蕊花糖苷和栀子苷有明显的干扰，二者化学位移非常接近，因此本试验采用了聚酰胺薄膜为固定相，甲醇-冰醋酸-水为展开剂，365 nm紫外光下观察，阴性样品无干扰[6]。甘草鉴别试验，考察了《药典》成方制剂百合固金口服液(含有水提取甘草成分)中甘草鉴别项下展开剂系统，比较了四相展开剂系统乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)和三项展开剂系统乙酸乙酯-甲酸-水(7∶0.5∶1)，二者差别不大，最终采用了相对简单的三项系统。灯心草在原处方制法中为药材粉末直接入药，因此本试验采用了《药典》中灯心草药材的鉴别条件，以超声提取代替回流提取，简化了提取条件。

本试验对大黄、栀子、车前子、甘草的鉴别，均采用对照药材和对照品同时对照。采用对照品为对照，能保证检出被测组分的有效性；采用对照药材为对照，可保证药材鉴别的全面性，避免被鉴别药材因在制剂中添加指标性成分而不能检出未添加的假阳性现象。

3.2栀子苷含量测定本试验对原标准中栀子苷的含量测定进行了修订。采用文献中50%甲醇超声提取的方法，提取效率优于原标准中稀乙醇溶解的方法[4]。分别对比了《药典》和文献方法，对流动相比例、检测波长和色谱柱均进行了考察，最终确定了“2.2.1”项下的色谱条件[4,7-8]。栀子苷含量限度的拟定，根据八正颗粒中栀子苷处方量为118 g，《药典》栀子药材含量测定项下规定，含栀子不低于1.8%，按其提取转移率不低于70%计，1 000 g成品中含有栀子苷应不低于1.49 g。每袋10 g计，每袋含栀子以栀子苷计不低于14.9 mg。以此标准计算，本试验考察的3批八正颗粒的含量均符合标准。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015.

[2]金灿,姜宁华.八正颗粒的制备及临床应用[J].中国医院药学杂志,2001,11:53-54.

[3]李耿,温良明,侯少贞,等.RP-HPLC测定八正颗粒中大黄素、大黄酚的含量[J].中成药,2007,9:1415-1417.

[4]盛望鹏.八正颗粒质量标准的改善研究[J].中国生化药物杂志,2014,4:164-168.

[5]黄顺旺.八正颗粒质量标准的初步研究[J].中国实验方剂学杂志,2009,11:20-22.

[6]钟瑞建,俞燕,丁剑虹,等.车前子中车前素的TLC鉴别及HPLC含量测定[J].药物分析杂志,2015,4:715-718.

[7]李翔,刘皈阳,马建丽,等.HPLC法同时测定清热解毒软胶囊中绿原酸栀子苷和黄芩苷的含量[J].解放军药学学报,2013,3:239-241.

[8]贺康洪,侯佳宁,张紫东,等.HPLC法测定肝血管瘤活血胶囊中栀子苷的含量[J].解放军药学学报,2014,6:530-531,534.

Improvement in quality standard for bazheng granules

SHI Ya-zhu1,LIU Gui-yan2*,LI Xian2,LI Chun-ton2,FENG Chun-jin2

(1.NO.203 Hospital of PLA,Qiqihaer 161000,China;2.Department of Pharmacy,First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

[Abstract]ObjectiveTo establish the quality standard for Bazheng granules.MethodsFive major components (including rheum officinale,fructus gardenia,semen plantaginis,medulla junci and radix glycyrrhiza) were identified by TLC.The content of geniposide was determined by HPLC.ResultsThe spots of TLC of all varieties were distinctive with good reproducibility,and there was no interference with the negative references.Geniposide had good linear relation during 2.32～46.4 μg/mL (r=0.9999).The average recovery was 99.41% with RSD 1.46% (n=6).ConclusionTLC and HPLC methods are rapid and accurate with good reproducibility,so it is effective for the quality control of Bazheng granules.

Key words：Bazheng granules;Quality standard;TLC;HPLC

收稿日期：2015-09-14

基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题(14ZJ-Z20-3)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201604024

*通信作者