参芪通脉颗粒对慢性充血性心力衰竭模型大鼠血浆BNP、ET水平影响

汶医宁，史凡凡，罗文平，李 瑞，王永刚（.陕西中医药大学附属医院心病科，陕西 咸阳 7000；.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳 7000）



参芪通脉颗粒对慢性充血性心力衰竭模型大鼠血浆BNP、ET水平影响

汶医宁1，史凡凡1，罗文平1，李 瑞1，王永刚2
（1.陕西中医药大学附属医院心病科，陕西 咸阳 712000；2.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳 712000）

［摘 要］目的：观察参芪通脉颗粒对慢性充血性心力衰竭模型大鼠血浆脑钠肽 （BNP）、内皮素（ET）以及心肌细胞结构的影响。方法：用腹腔注射阿霉素（ADR）法复制慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠模型，采用组织切片、HE染色、光镜观察心肌组织病理变化；采用酶联免疫法测定血浆BNP和ET含量。结果：参芪通脉颗粒组心肌细胞水肿、肥厚较模型组明显减轻，心肌细胞横（纵）纹存在；与模型组比较，卡托普利组、参芪通脉颗粒小剂量组、参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平明显降低（P＜0．01或P＜0．05）；与卡托普利组比较，参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平无显著性差异（P＞0．05）。结论：参芪通脉颗粒能抑制CHF大鼠的神经内分泌激活，降低CHF大鼠血浆BNP和ET水平，减少心肌纤维化，修复已损伤的心肌细胞，从而改善心功能，保护衰竭的心脏。

［关键词］参芪通脉颗粒；脑钠肽（BNP）；内皮素（ET）；实验研究

2　结 果

心肌组织病理学检查：光镜下正常组未见明显的组织学改变，心肌纤维排列整齐，横纹清晰，细胞之间连接紧密，细胞核无明显异型性。但心衰模型组可见肥大的心肌细胞群，细胞排列紊乱﹑断裂﹑溶解以及不同程度的炎症细胞浸润和间质水肿病变表现。卡托普利组和参芪通脉颗粒组心肌细胞水肿﹑肥厚较模型组明显减轻，心肌细胞横（纵）纹存在，其中E组优于C组，C组优于D组，表明参芪通脉颗粒可以修复已损伤的心肌细胞，保护衰竭的心脏。

各组大鼠血浆BNP和ET含量测定见表1。模型组血浆BNP和ET水平明显高于正常对照组（P＜0.01），造模成功；与模型组比较，卡托普利组﹑参芪通脉颗粒小剂量组﹑参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平明显降低（P＜0.01或P＜0.05）；与卡托普利组比较，参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平无显著性差异（P＞0.05）。

表1　各组大鼠血浆BNP﹑ET含量测定 （pg/mL，±s）

表1　各组大鼠血浆BNP﹑ET含量测定 （pg/mL，±s）

注：与A组比较，*P＜0.01；与B组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别　n　BNP　ET A组　10　 554.30±27.61　36.88±4.14 B组　10　 1554.89±327.45*　52.14±6.74*C组　10　 654.76±45.43△△　38.67±5.62△△D组　10　 862.76±67.54△　44.05±7.57△E组　10　 614.82±50.22△△　35.65±6.91△△

3　讨 论

CHF是各种病因所致心脏疾病的终末阶段，随着基础和临床研究的深入，CHF已不再被认为是单纯的血流动力学障碍，更重要在于心室重构和神经内分泌细胞因子系统的激活，促使CHF持续发展。

BNP是近年来发现的一种新的利钠多肽，由心室肌合成与分泌，具有强大的利尿﹑利钠﹑舒张血管﹑抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统和交感神经系统的作用［3］。心功能障碍能够激活利钠肽系统，导致BNP释放，其增高的程度与心衰的严重程度呈正相关［4］。BNP与左心室功能密切相关，其含量与心室体积和心室舒张末期的压力呈正比，是临床评价心力衰竭﹑反映心功能级别的一项重要临床生化指标，对心力衰竭的诊断和治疗具有重要意义［5］。

ET是一种极强的缩血管介质，不但直接刺激或激活多种激素和细胞因子，而且参与心血管疾病的病理生理过程；临床和实验研究显示它在诱发和加重心力衰竭的进程中起着重要作用［6］。血浆ET水平升高和心肌ET合成与释放增加对CHF有重要的致病介质作用，并与CHF病变严重程度密切相关。人体CHF研究表明，PET水平显著升高，直接引起病理生理性血管收缩和心脏增生与肥大。

阿霉素大鼠CHF模型与人的心肌病CHF相似，是临床研究心肌病型心力衰竭较理想的模型，适合研究衰竭心脏心肌超微结构改变﹑神经内分泌异常及血流动力血变化［7］。

参芪通脉颗粒是多年临床总结的经验方，由人参﹑黄芪﹑附子﹑丹参等组成，具有益气温阳﹑活血利水功效。研究表明以人参﹑附子﹑丹参等为代表的益气﹑温阳﹑活血中药长期应用均具有明显抑制神经内分泌的作用［8］。药理研究证明人参皂苷对心血管的作用与强心甙相似，可强心，增强心肌收缩力，增加心输出量，减少心肌损伤，促进心肌细胞修复，提高心肌耐缺氧能力，同时可降低血黏度改善血流动力学［9-10］。人参皂苷还能增加底物水平磷酸化，促进三磷酸腺苷磷酸肌酸合成［11］。附子中去甲乌头碱也有显著强心作用，同时还具有增加冠状动脉血流和扩张外周血管的作用。黄芪可以使CHF患者的血管紧张素Ⅱ﹑内皮素等下降［12］。

实验结果表明参芪通脉颗粒能抑制CHF大鼠的神经内分泌激活，降低CHF大鼠血浆BNP和ET水平，减少心肌纤维化，修复已损伤的心肌细胞，从而改善心功能，保护衰竭的心脏。

［参考文献］

［1］ 何峰．脑钠肽与心力衰竭的诊治［J］．中国心血管杂志，2006，11（3）：229．

［2］ 范启霞，陆文云，黄启福，等．心复康口服液对实验性心衰模型大鼠心肌细胞自由基代谢和膜通透性的影响［J］．中国中医基础医学杂志，2000，6 （2）：16-19．

［3］ Hasenfuss G，Herman HP，Pieske B．Dyspnea and norm al systolic function［J］．Herz，2004，29 （6）：602-608．

［4］ Parekh N，Maisel AS．Utility of B-natriuretic peptide in the evaluation of left ventricular diastolic function and diastolic heart failure［J］．CURR OPIN CARDIOL，2009，24（2）：155-160．

［5］ 葛咏梅，张立江．血浆BNP检测在慢性心衰诊断与治疗中的应用［J］．中国实验诊断学，2009，13 （11）：1572-1573．

［6］ 唐文恒，王友桂．血浆内皮素和降钙素基因相关肽浓度与心力衰竭的相关性［J］．山西医科大学学报，2000，31（1）：44-45．

［7］ 郭豫涛，谭毅．充血性心力衰竭的动物模型［J］．上海实验动物科学，2001，21：122-126．

［8］ 曾垂义，王振涛．温阳、益气、活血中药对心力衰竭大鼠神经内分泌的远期疗效［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：158-159．

［9］ 贺运河，陈镜合，陈世伟，等．参附合香丹注射液治疗肺心病急性发作期合并心力衰竭的临床研究［J］．中国中医急症，2004，13（1）：21-22．

［10］ 魏群，周萍，徐轶，等．参附注射液治疗心力衰竭伴高粘血症50例［J］．医药导报，1999，18 （5）：35．

［11］ 郑曙云，徐建国，赵振中．参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响［J］．中国中西医结合杂志，2004，24 （6）：541-544，548．

［12］ 张子彬，CHENG To，张平传．充血性心力衰竭学［M］．北京：科学技术文献出版社，2002：568-569．

药物与试剂：参芪通脉颗粒（1g干浸膏粉相当于13.5g生药）由陕西省中药基础与新药研究重点实验室提供。使用时加蒸馏水配制成不同药物浓度供实验应用。盐酸阿霉素（ADR）（西山普德药业有限公司生产，批号20120603）﹑卡托普利（广东邦民制药有限公司生产，批号0901121），均用蒸馏水稀释成0.2mg/mL，灭菌后备用。脑钠肽（BNP）试剂盒由北京尚柏生物制剂公司提供，内皮素（ET）试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

实验动物：Wistar大鼠50只，体重250～300g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（陕）2012-003。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内，室温（22±4）℃，相对湿度60%～80%。自由饮水和喂标准颗粒饲料。

实验仪器：全自动生化分析仪（Olympus AU 600型，日本）；全自动血细胞分析仪（Sysmax XT-1800，日本）；全自动血凝分析仪（AMAX-200型，德国）；MSE-25型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；全自动图像分析系统（德国Leica公司）；LEICA DmLA显微镜（德国Leica公司）。

实验方法：参照模型制作［2］，将注射用ADR粉针用灭菌注射用水5mL溶解，9mL/L生理盐水稀释配成每lmL生理盐水含药0.8mg溶液，第1～3周按3mg/kg剂量给模型组和用药组大鼠进行腹腔注射，第4～6周按2mg/kg剂量进行腹腔注射，每周1次；正常对照组大鼠注射等量的生理盐水，每周1次。连续注射给药6周。

动物分组及给药：动物基础饲料适应性喂养1周后，随机分为对照组（A组） ，模型组（B组），卡托普利组（C组），参芪通脉颗粒小剂量组（D组），参芪通脉颗粒大剂量组（E组），每组10只，分笼饲养。C组给予卡托普利6.25mg/kg灌胃；D组和E组分别给予参芪通脉颗粒小剂量0.8g/kg﹑大剂量1.6g/kg灌胃，用药剂量分别按动物体表面积换算。A组给予等量的蒸馏水灌胃，日1次，自由饮食。连续治疗30天。

指标检测：末次给药24h后，用颈椎脱臼法处死大鼠，剖胸取出心脏，洗净后取部分左心室组织，10%甲醛固定，常规石蜡包埋，组织切片，HE染色，光镜观察心肌组织病理变化。取血，分离血浆，采用酶联免疫法测定BNP和ET含量（参照BALP试剂盒说明操作）。

［中图分类号］R255.214.161

［文献标识码］B

［文章编号］1004-2814（2016）05-0496-03

［基金项目］陕西省教育厅科学研究计划项目（编号2014JK1190）
充血性心力衰竭（CHF）是各种心血管疾病终末阶段，病死率高，存活率低［1］。近年来，大量的临床和实验研究表明中药治疗心衰不仅可以强心﹑利尿﹑扩血管以缓解症状而治标，还可以干预神经内分泌过度激活﹑抑制心室重构以治本。参芪通脉颗粒具有益气温阳﹑活血利水，是临床治疗CHF的经验方。本实验旨在制造CHF动物模型，从细胞因子水平探讨参芪通脉颗粒对实验性CHF大鼠的作用机制，为临床CHF的综合治疗提供理论和实验依据。
1材料与方法

［收稿日期］2016-01-20