FGFR-1、cyclinD1在乳腺癌中的表达及其临床意义

邓敏　解瑞飞　王惠.杭州市富阳区第一人民医院病理科，浙江杭州3400；.杭州市肿瘤医院信息科，浙江杭州3000



FGFR-1、cyclinD1在乳腺癌中的表达及其临床意义

邓敏1解瑞飞2王惠1
1.杭州市富阳区第一人民医院病理科，浙江杭州311400；2.杭州市肿瘤医院信息科，浙江杭州310002

[摘要]目的探讨成纤维生长因子受体（fibroblast growth factor receptor，FGFR-1）及细胞周期蛋白D1（cyclinD1）在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用原位杂交及免疫组织化学S-P法检测乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织中FGFR-1、cyclinD1 mRNA及蛋白水平的表达。结果在乳腺癌中，FGFR-1蛋白和FGFR-1基因的阳性率分别为70.0%（21/30）、70.0%（21/30），cyclinD1蛋白和cyclinD1基因的阳性率分别为66.7%（20/30）、76.7% （23/30），明显高于纤维腺瘤与正常乳腺组织（P<0.05），FGFR-1表达与cyclinD1表达一致。结论FGFR-1的过表达在人类乳腺癌的发生、发展中起重要作用，其机制可能通过上调cyclinD1的表达发挥作用，FGFR-1、cyclinD1的过度表达可作为判断乳腺癌预后的重要指标。

[关键词]FGFR-1；cyclin D1；乳腺癌；免疫组化；原位杂交

[Key woeds]FGFR-1;Cyclin D1;Breast carcinoma;Immunohistochemistry;In situ hybridization

成纤维细胞生长因子受体（FGFR）是由糖蛋白的胞外免疫球蛋白（Ig）样结构域、疏水跨膜区和含有酪氨酸激酶结构域的细胞质部分组成。研究发现FGFR-1、FGFR-2基因表达于许多肿瘤细胞，与患者的预后密切相关。在甲状腺癌、结直肠癌、胃癌等肿瘤中均可见FGFR-1的高表达[1，2]。

细胞周期蛋白（cyclin）对细胞周期进行正调控，与细胞生长、发育及肿瘤的发生关系极其密切。研究发现：在原发性乳腺肿瘤中，cyclinD1和FGFR-1的共同扩增与患者存活显著减少相关，表明这两种蛋白之间存在相互作用[3，4]。然而目前FGFR-1在乳腺癌中的表达及其高表达是如何促进肿瘤细胞增殖、与cyclinD1的关系如何，国内尚无报道。本文采用原位杂交及免疫组织化学技术，对30例乳腺癌组织中cyclinD1和FGFR-1的mRNA及蛋白表达进行研究。现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

收集我院2007年3月～2014年8月手术切除的乳腺纤维腺瘤患者15例、乳腺癌患者30例。所有标本术前均未进行放化疗，术后病理诊断为乳腺癌、纤维腺瘤。另取15例癌旁正常乳腺组织作对照。患者年龄35～63岁，平均（46.0±3.2）岁，乳腺癌组伴有淋巴结转移18例，无淋巴结转移者12例。30例乳腺癌标本中，获得满5年随访者24例，其中已死亡病例6例，尚生存病例18例。

1.2实验仪器和试剂

（1）主要仪器：莱卡DM-3000显微镜、莱卡切片机RM2235、莱卡脱水机ASP300S等。

（2）主要试剂：FGFR-1、cyclinD1免疫组化和mRNA原位杂交试剂盒，均购自武汉博士德。

1.3方法

分别采用免疫组化和原位杂交法检测FGFR-1、cyclinD1蛋白和mRNA的表达，免疫组化及原位杂交染色具体操作方法参照文献[5，6]并严格按照试剂盒说明进行。用己知阳性片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液分别代替一抗作阴性对照。

1.4结果判断

FGFR-1、cyclinD1 mRNA阳性表达定位于细胞膜或细胞质，cyclinD1免疫组化阳性表达定位于细胞核，综合染色强度和阳性肿瘤细胞的百分比进行分级[5]。将染色强度分为：无着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将阳性肿瘤细胞的百分比分为：<10%为0分，10%～50%为1分，51%～75%为2分，>75%为3分。两项相加后分阴性（-）和阳性（+）：0～1分为（-），2分以上为（+）。

1.5统计学分析

采用SPSS19.0统计学分析软件，计数资料采用χ2检验法和Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1cyclin D1、FGFR-1 mRNA在各组中的表达

2.1.1cyclin D1在各组中的表达cyclin D1 mRNA 在30例乳腺癌中有23例呈阳性表达（图1），正常对照组、纤维腺瘤组、乳腺癌组逐步增高，阳性率分别为20.0%（3/15）、33.3%（5/15）、76.7%（23/30），纤维腺瘤组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；乳腺癌组与纤维腺瘤组及对照组之间，差异均有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.1.2FGFR-1 mRNA在各组中的表达FGFR-1 mRNA在30例乳腺癌中有21例呈阳性表达（图2），正常对照组、纤维腺瘤组、乳腺癌组逐步增高，阳性率分别为13.3%（2/15）、20.0%（3/15）、70.0%（21/30），纤维腺瘤组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；乳腺癌组与纤维腺瘤组及对照组之间，差异均有统计学意义（P< 0.05）（表1）。

表1　FGFR-1和cyclinD1 mRNA的各组中的表达[n（%）]

2.2cyclin D1、FGFR-1蛋白在各组中的表达

2.2.1cyclin D1蛋白在各组中的表达cyclin D1蛋白在30例乳腺癌中有20例呈阳性表达（图3），正常对照组、纤维腺瘤组、乳腺癌组逐步增高，阳性率分别为26.7%（4/15）、33.3%（5/15）、66.7%（20/30），纤维腺瘤组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；乳腺癌组与纤维腺瘤组及对照组之间，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

2.2.2FGFR-1蛋白在各组中的表达FGFR-1蛋白在30例乳腺癌中有21例呈阳性表达（图4），正常对照组、纤维腺瘤组、乳腺癌组逐步增高，阳性率分别为6.7%（1/15）、26.7%（4/15）、70.0%（21/30），纤维腺瘤组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；乳腺癌组与纤维腺瘤组及对照组之间，差异有统计学意义（P<0.05）（见表2）。

表2　FGFR-1和cyclinD1蛋白在各组中的表达[n（%）]

3　讨论

乳腺癌在染色体8p11-8p12和11q12-11q14的共扩增时常发生，表明在肿瘤形成过程中这些区域的基因之间可能存在合作。FGFR-1所在的染色体区域8p11.2，在肾癌、肺癌、前列腺癌中均扩增[7]。多项研究已经证实FGFR-1在乳腺癌中扩增（8p11.2～p12扩增）[8，9]，FGFR-1和FGFR-2均为受体型酪氨酸激酶，主要分布于细胞膜表面。在细胞表面酪氨酸激酶受体呈单二聚体形式，在受体内的蛋白具有酪氨酸激酶活性。当FGFR与特异的酪氨酸激酶受体结合后，会导致形成稳定的二聚体，随后其下游信号通路的受体自身磷酸化和活化，导致细胞增殖调节发生紊乱，激活细胞内多种信号通路，从而导致癌的发生[10]，与本研究一致，乳腺癌组织中FGFR-1蛋白的表达明显增高[11]，显著高于正常乳腺组织和良性乳腺腺瘤组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

图1　（10x20）cyclin D1 mRNA在各组中的表达（A：对照组；B：纤维腺瘤组；C：乳腺癌组）

图2　（10x20）FGFR-1 mRNA在各组中的表达（A：对照组；B：纤维腺瘤组；C：乳腺癌组）

图3　（10x20）cyclin D1蛋白在各组中的表达（A：对照组；B：纤维腺瘤组；C：乳腺癌组）

图4　（10x20）FGFR-1蛋白在各组中的表达（A：对照组；B：纤维腺瘤组；C：乳腺癌组）

cyclinD1又名CCND1，定位于11q13区，即原癌基因，根据大量研究结果显示：多种人类肿瘤存在11q13区扩增现象[12]，而cyclinD1位于该区中间部位。cyclin D1转基因鼠引起乳腺增生和乳腺上皮肿瘤，乳腺癌组织中cyclin D1的高表达将使肿瘤细胞增殖，从而使得肿瘤持续生长[13]。本研究发现乳腺癌组织中cyclin D1蛋白的表达明显增高，显著高于正常乳腺组织和良性乳腺腺瘤组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Etsu等[14]体外实验研究中发现：FGFR-1表达增加通过cyclin D1过表达激活pRB/E2F通路而参与乳腺癌的发生，首次提出cyclin D1/pRB/E2F通路参与调节成纤维生长因子受体的表达。有学者指出cyclin D/cdk4复合物可使FGFR的795号丝氨酸pRB激活磷酸化，使用FGFR抑制剂后，位于795号染色体的丝氨酸pRB磷酸化减弱，cyclin D/cdk4复合物活性被抑制。异位cyclin D1表达能够拮抗FGFR-1抑制剂的抗增殖作用，与本实验结果一致，因此本实验指出：FGFR-1介导的信号可能通过细胞周期蛋白D的调节连接于细胞周期，调控pRB磷酸化参与肿瘤发生、发展。为了增加实验的科学性和严谨性，本实验还采用原位杂交方法，检测各组cyclin D、FGFR-1的mRNA表达水平，结果显示两种因子表达呈一致性，进一步说明FGFR-1在转录和翻译水平对cyclinD1进行调节。我们的研究结果提供证据表明：FGFR-1扩增是高度增生乳腺癌的驱动力之一，为乳腺癌新的治疗靶点提供了理论依据，FGFR-1抑制剂可能是有效的治疗药，不仅能抑制血管的生成，而且还抑制乳腺癌的生长[15-20]。

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Expression and clinical significance of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma

DENG Min1XIE Ruifei2WANG Hui1
1.Department of Pathology,the First People's Hospital of Fuyang District in Hangzhou City,Hangzhou311400,China;
2.Department of Information,Hangzhou Cancer Hospital,Hangzhou310002,China

[Abstract]Objective To study the expression and significance of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma.Methods In situ hybridization and immunohistochemistry S-P method were adopted to detect the expression of FGFR-1,cyclinD1 mRNA and protein level in cases of breast cancer,cases of breast fibroadenoma and cases of normal breast tissue.Results In breast carcinoma,the positive rates of FGFR-1 protein and FGFR-1 mRNA were 70.0%(21/30),70.0%(21/30), the positive rates of cyclinD1 protein and cyclinD1 mRNA were 66.7%(20/30),76.7%(23/30),respectively.It was found that the expression of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma was obviously higher than in fibroadenoma and normal tissue(P<0.05).The expression of FGFR-1 was coincidence with the cyclinD1.Conclusion The abnormal expression of FGFR-1 plays an important role in the carcinogenesis and progression of human breast carcinoma,the mechanism of which may be up-regulating the expression of cyclinD1.Abnormal expression of FGFR-1 and the overexpression of cyclinD1 could be considered as the useful makers for determining metastasis and prognosis of human breast carcinoma.

[中图分类号]R737.9

[文献标识码]A

[文章编号]1673-9701（2016）04-0001-04

[基金项目]浙江省公益性技术应用研究计划项目（2015C 33268）；浙江省富阳市科技项目（富科[2011]22号）

收稿日期：（2015-11-11）