苹果皮总黄酮的提取及含量测定

李玉红，赵　维，郭乃妮，柴红叶，乔丹丹

(咸阳师范学院化学与化工学院,陕西 咸阳 712000)



苹果皮总黄酮的提取及含量测定

李玉红，赵维，郭乃妮，柴红叶，乔丹丹

(咸阳师范学院化学与化工学院,陕西 咸阳 712000)

摘要：采用索氏提取法提取苹果皮总黄酮，研究了苹果皮总黄酮的最佳提取工艺及含量测定方法。正交实验确定了苹果皮总黄酮在300 W超声波辅助下的最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数 60%、料液比1∶20 (g∶mL)、提取时间 50 min、提取温度50 ℃。以AlCl3为显色剂、芦丁为标准品，采用紫外可见分光光度法在423 nm波长处测定所生成络合物的吸光度，绘制芦丁标准曲线，拟合线性回归方程为：A=27.78c+0.0004，相关系数R2=0.9980。按此方法分析苹果皮样品，测得苹果皮总黄酮含量为26.94 mg·g-1(n=6，RSD=0.92%)。该方法简单易操作，可为水果蔬菜中总黄酮含量的测定提供理论基础。

关键词：苹果皮；总黄酮；紫外可见分光光度法

苹果(Malus pumila)，属蔷薇科，其营养成分可溶性大，易被人体吸收，故有“活水”之称，是世界四大水果之冠。苹果富含锌、维生素和黄酮类化合物，具有降低胆固醇、保持血糖稳定、抗氧化及增强免疫等功能[1-2]。研究表明，苹果皮较果肉含有更多的黄酮类物质[3-4]。对苹果皮中黄酮类物质的提取和功能研究已成为国内外的热点[5-7]。作者运用索氏提取法提取苹果皮总黄酮、紫外可见分光光度法测定总黄酮含量，旨在为苹果皮的充分利用提供基础科学依据。

1实验

1.1材料、试剂与仪器

苹果(咸阳市场购买)洗净，削皮，取皮在55 ℃真空干燥箱中干燥48h，然后用粉碎机处理成粉末。

三氯化铝，天津耀华化学试剂有限责任公司；亚硝酸钠、硝酸铝，天津风船化学试剂有限公司；氢氧化钠，天津河东区红岩试剂厂；无水乙醇，天津天力化学试剂有限公司；芦丁标准品。

DZF-6020型真空干燥箱，上海琅玕实验设备有限公司；HB-YP202型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；KQ-300DB型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；HHS-1S型电子恒温不锈钢水浴锅，上海光地仪器设备有限公司；SPECORD50型紫外可见分光光度计，德国JENA公司；ZF-2型三用紫外仪，上海安亭电子仪器厂。

1.2总黄酮的提取

准确称取5.0g干燥的苹果皮粉末，用滤纸包好后置于索氏提取器中，加入体积分数为60%的乙醇，置于温度50 ℃、功率300W超声波水浴加热回流50min，即得到苹果皮提取液；经蒸馏除去提取剂，加95%乙醇配制成总黄酮提取液，定容至100mL，待用。

在单因素实验的基础上，进行正交实验优化提取工艺，正交实验的因素与水平见表1。

表1苹果皮总黄酮提取工艺正交实验的因素与水平

Tab.1　Factors and levels of orthogonal

1.3定性测试[8]

用玻璃棒蘸取少量提取液点在滤纸上，可见光下观察为浅黄色，紫外光下呈灰黄色；滴加0.01 kg·L-1AlCl3乙醇溶液，吹干，可见光下观察为浅黄色，紫外光下呈灰黄色。取提取液1 mL于试管中，加入镁粉，再一次性加入数滴浓盐酸，观察发现在泡沫处呈紫红色。以上现象表明，提取液中确实含有黄酮类物质。

1.4总黄酮含量的测定

1.4.1标准曲线的绘制

标准溶液的配制：准确称取经过120 ℃干燥的芦丁标准品14.2 mg，用少量95%乙醇溶解后转移到100 mL容量瓶中，定容，摇匀，即得到0.142 mg·mL-1芦丁标准溶液，待用。

准确移取芦丁标准溶液0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL、8.00 mL分别置于25 mL比色管中，加入1% AlCl3溶液1 mL，用95%乙醇定容，摇匀，放置15 min，以空白溶液作参比，测定423 nm处吸光度。绘制标准曲线(图1)，拟合线性方程为：A=27.78c+0.0004，相关系数R2=0.9980。

图1　芦丁标准曲线

1.4.2样品溶液总黄酮含量的测定

按1.4.1方法测定样品溶液的吸光度，根据标准曲线计算总黄酮含量。

2结果与讨论

2.1最佳提取工艺条件

正交实验的结果与分析见表2。

表2苹果皮总黄酮提取工艺正交实验的结果与分析

Tab.2Results and analysis of orthogonal experiment for

optimizing extraction process of total flavonoids from apple peels

由表2可知，各因素对总黄酮提取的影响大小顺序为：乙醇体积分数>料液比>提取温度>提取时间。确定最佳提取工艺为：A2B2C1D1，即乙醇体积分数60%、料液比1∶20(g∶mL)、提取时间50 min、提取温度50 ℃。

2.2苹果皮总黄酮含量的测定结果(表3)

表3苹果皮总黄酮含量的测定结果

Tab.3　The determination results of

由表3可知，苹果皮总黄酮平均含量为26.94 mg·g-1，RSD为0.92%(n=6)。

2.3回收率实验

精密量取已知含量样液0.1 mL，加入芦丁标准溶液0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL，按1.4.1方法测定吸光度，计算苹果皮总黄酮含量及回收率，结果见表4。

表4回收率实验

Tab.4　The recovery of the method

2.4精密度实验

准确移取2.00 mL芦丁标准溶液置于25 mL比色管中，按1.4.1方法测定吸光度，结果见表5。

表5精密度实验

Tab.5　The precision of the method

由表5可知，方法的RSD=1.09%，精密度良好。

2.5稳定性实验

准确移取提取液置于10 mL比色管中，按1.4.1方法测定吸光度，每隔5 min测一次，共测定6次，结果见表6。

表6稳定性实验

Tab.6　The stability of the method

由表6可知，方法的RSD=1.93%，提取液在30 min内可稳定存在。

3结论

采用索氏提取法提取苹果皮总黄酮，以AlCl3为显色剂，运用紫外可见分光光度法测定苹果皮总黄酮含量。正交实验确定了苹果皮总黄酮在300 W超声波辅助下的最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数 60%、料液比1∶20 (g∶mL)、提取时间 50 min，提取温度50 ℃。紫外可见分光光度法可用于苹果皮总黄酮的测定，测得苹果皮样品的总黄酮含量为26.94 mg·g-1(n=6，RSD=0.92%)。该苹果皮总黄酮提取工艺简单可行，含量测定稳定性和线性关系较好。

参考文献：

[1]陈健初,董邵华,叶兴乾,等.芹菜黄酮及其在主要制汁过程的变化[J].浙江农业大学学报,1998,24(3):279-282.

[2]梁大伟,江银枝.黄酮类化合物合成的研究进展[J].化学研究,2008,19(4)：102-106.

[3]聂继云,吕德国,李静,等.苹果果实中类黄酮化合物的研究进展[J].园艺学报,2009,36(9):1390-1397.

[4]李红,张元湖.苹果果实中总黄酮的提取方法优化研究[J].山东农业大学学报(自然科学版),2003,34(4):471-474.

[5]陈莉,屠康,王海,等.采用响应曲面法对采后红富士苹果热处理条件的优化[J].农业工程学报,2006,22(2):159-163.

[6]李锦运,郭玉蓉.超声辅助提取冷破碎苹果皮渣中多糖的工艺优化[J].农产品加工·学刊,2010,10(2):30-32.

[7]董彩文,梁少华,汤凤雨,等.苹果渣中总黄酮的提取及其抑菌活性研究[J].安徽农业科学,2008,36(27):11631，11662.

[8]吴立军.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社,2003：177-179.

Extraction and Content Determination of Total Flavonoids from Apple Peels

LI Yu-hong，ZHAO Wei，GUO Nai-ni，CHAI Hong-ye，QIAO Dan-dan

(SchoolofChemisitryandChemicalEngineering,XianyangNormalUniversity,Xianyang712000，China)

Abstract：Total flavonoids from apple peels were extracted with a Soxhlet extraction method.The extraction conditions were optimized by orthogonal experiment,and determination method of content of total flavonoids was studied.The optimal extraction conditions were as follows:60% ethanol,solid-liquid ratio 1∶20 (g∶mL),treating with ultrasonic power of 300 W for 50 min,and extraction temperature of 50 ℃.Using AlCl3 as a chormogenic reagent,rutin as standard,absorbance of the complex was measured at 423 nm by UV-Vis spectrophotometry.Calibration curve of rutin was drawed,and linear regression equation of A=27.78c+0.0004(R2=0.9980) was obtained.Applying the proposed method,the content of total flavonoids from apple peels was 26.94 mg·g-1(n=6,RSD=0.92%).The method is easy to operate,which provides a theoretical basis for the determination of total flavonoids from fruits and vegetables.

Keywords：apple peels;total flavonoids;UV-Vis spectrophotometry

基金项目：陕西省自然科学基金资助项目(2013JM2016)，陕西省教育厅专项科研项目(2013JKK0642)，国家大学生创新创业训练计划项目(201410722004)，咸阳师范学院科研基金项目(15XSYK042)

收稿日期：2016-01-19

作者简介：李玉红(1980-)，女，陕西咸阳人，高级工程师，主要从事分析方面研究，E-mail：309943006@qq.com。

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.05.018

中图分类号：O 657.32

文献标识码：A

文章编号：1672-5425(2016)05-0068-03