共振瑞利散射法测定硫酸卡那霉素

刘　红，徐　红，徐　科，蔡雪语

(1.贵州医科大学，贵州 贵阳 550000；2.贵州师范学院，贵州 贵阳 550004)



共振瑞利散射法测定硫酸卡那霉素

刘红1，徐红1，徐科2，蔡雪语1

(1.贵州医科大学，贵州 贵阳 550000；2.贵州师范学院，贵州 贵阳 550004)

摘要：基于在pH值3.78～6.59的B-R缓冲溶液中，四碘荧光素钠(ST)与硫酸卡那霉素(KANA)结合生成离子缔合物使溶液共振瑞利散射(RRS)增强的原理，建立了共振瑞利散射法测定KANA的新方法。在其最大共振散射波长576 nm处测定共振瑞利散射强度(IRRS)，并研究了表面活性剂和共存物质对KANA测定的影响。结果表明：KANA浓度在0.04～1.60 mg·L-1范围内与ΔIRRS(样品与空白溶液的IRRS值之差)呈线性关系，方法的检出限为0.018 mg·L-1。用于KANA注射液的测定，回收率为92.5%～96.5%。

关键词：共振瑞利散射法；硫酸卡那霉素(KANA)；四碘荧光素钠(ST)

硫酸卡那霉素(kanamycinsulfate，KANA)属氨基糖苷类抗生素，是临床上重要的抗感染药物[1]。但KANA有一定程度的耳毒性和肾毒性，这往往与使用剂量有关，临床使用时有时还需监测血药浓度，因此建立一种快速、准确的KANA定量测定方法一直是分析工作者研究的热点。KANA的测定方法有微生物法[2]、分光光度法[3]、荧光光度法[4]、电化学法[5]、化学发光法[6]、高效液相色谱法[7]、共振瑞利散射法[8-9]等。

共振瑞利散射(RRS)作为一种高灵敏和简便的光谱技术已用于蛋白质[10]、核酸[11]、药物[12]、金属离子[13]、表面活性剂[14]等的分析，但用四碘荧光素钠(ST)作探针检测KANA的共振瑞利散射法目前未见报道。在B-R缓冲溶液中，试验了氨基糖苷类抗生素(KANA、硫酸庆大霉素、链霉素)与ST反应，发现只有KANA-ST体系能产生明显的RRS增强效应，从而建立了一种测定KANA的新方法。

1实验

1.1试剂与仪器

ST，上海化学试剂厂；KANA标准品，生化试剂，Solarbio公司；其余试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

Caryeclipse型荧光分光光度计，美国瓦里安公司。

1.2方法

1.2.1KANA标准溶液的配制

称取0.1000gKANA，用二次蒸馏水溶解，转移至100mL容量瓶中定容，于冰箱中4 ℃保存，备用。

1.2.2KANA含量的测定

2结果与讨论

2.1KANA-ST体系的RRS光谱(图1)

图1　KANA-ST体系的RRS光谱

由图1可知，KANA、ST的RRS峰均较弱，但KANA与ST结合后，引起溶液在250～700 nm范围内RRS增强，并且在一定范围内，随着KANA加量的增大，576 nm、370 nm处散射峰的RRS强度也随之增强。最大散射峰位于576 nm处，故在576 nm处测定ΔIRRS，体系的灵敏度最高。

2.2反应条件的选择

2.2.1缓冲溶液pH值

2.2.2ST溶液用量

实验表明，在KANA浓度为1.2 mg·L-1、2.5×10-4mol·L-1ST溶液用量为0.80～2.00 mL时，ΔIRRS最大。故选择ST溶液用量为1.50 mL。

2.2.3稳定性实验

在反应体系温度分别为5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃下进行测定，ΔIRRS基本不变，但进一步升高温度，ΔIRRS降低。故实验选择在室温(20 ℃)下进行。

室温下按1.2.2方法加入溶液，计时测定，每间隔2 min记录一次RRS强度。结果表明，在10～82 min内，ΔIRRS基本不变。故实验选择在反应16 min时进行测定。

2.2.4电解质NaCl的影响

固定KANA浓度为1.2 mg·L-1，加入不同体积的0.50 mol·L-1NaCl溶液后进行测定。结果表明：ΔIRRS受NaCl的影响较小。当加入NaCl溶液0～2.0 mL时， ΔIRRS基本不变；加入NaCl溶液超过2.0 mL时，ΔIRRS降低。

2.3干扰实验

2.3.1表面活性剂对KANA测定的影响(图2)

图2　表面活性剂对KANA测定的影响

由图2可知，在KANA-ST体系加入不同浓度的聚乙烯醇、CTMAB、SDS后，均使ΔIRRS下降，表明表面活性剂对该体系无增敏作用。

2.3.2共存物质对KANA测定的影响

2.4工作曲线及检出限

按1.2.2方法，分别在576 nm、370 nm下测定ΔIRRS，以ΔIRRS对KANA浓度作图，绘制标准曲线，拟合回归方程，结果见表1。

表1KANA的标准曲线

Tab.1　Standard curves of KANA

2.5样品分析

取一定量的KANA注射液(规格：2 mL∶0.5 g，西南药业股份有限公司)稀释后，按1.2.2方法测定KANA含量，并进行加标回收实验，结果见表2。

表2样品中KANA的测定结果(n=7)

Tab.2Determination results of KANA in the samples(n=7)

样品含量/gRSD/%加入量/g检出量/g回收率/%0.4721.540.2000.66596.50.4641.320.2000.64992.5

3结论

基于在pH值3.78～6.59的B-R缓冲溶液中，四碘荧光素钠与硫酸卡那霉素结合生成离子缔合物使溶液共振瑞利散射增强的原理，建立了共振瑞利散射法测定硫酸卡那霉素的新方法。硫酸卡那霉素浓度在0.04～1.60 mg·L-1范围内与ΔIRRS(样品与空白溶液的IRRS值之差)呈线性关系，方法的检出限为0.018 mg·L-1。用于硫酸卡那霉素注射液的测定，回收率为92.5%～96.5%。

参考文献：

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Determination of Kanamycin Sulfate by Resonance Rayleigh Scattering Method

LIU Hong1,XU Hong1,XU Ke2,CAI Xue-yue1

(1.GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550000,China;2.GuizhouEducationUniversity,Guiyang550004,China)

Abstract：Based on sodium tetraiodofluorescein(ST) reacting with kanamycin sulfate(KANA) to form an ion association complex,which can enhance the intensity of resonance Rayleigh scattering(RRS),in a B-R buffer solution with pH value of 3.78～6.59,a new resonance Rayleigh scattering method for determination of KANA was developed.The intensity of resonance Rayleigh scattering(IRRS) was measured at the wavelength of 576 nm.The effects of surfactant and coexistent substances on determination of KANA were studied.Results showed that,there was a linear relationship between ΔIRRS(difference between IRRSvalues of sample and blank) and KANA concentration in the ranges of 0.04～1.60 mg·L-1,with limits of detection of 0.018 mg·L-1.The proposed method was applied to the determination of KANA in the sodium injection solution.The recoveries were 92.5%～96.5%.

Keywords：resonance Rayleigh scattering(RRS);kanamycin sulfate(KANA);sodium tetraiodofluorescein(ST)

基金项目：贵州省科技厅联合基金资助项目(黔科合LG[2012]032号)

收稿日期：2016-01-13

作者简介：刘红(1961-)，女，高级实验师，从事化学实验教学，E-mail:san.san.liu@163.com。

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.05.017

中图分类号：O 657.31

文献标识码：A

文章编号：1672-5425(2016)05-0065-03