RBM 3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

曾丹 华金仁 安云婷

RBM 3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

曾丹 华金仁 安云婷

目的 对RBM 3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义进行分析探讨，为今后的临床诊治工作提供有价值的参考信息。方法 选择手术切除的卵巢上皮性癌石蜡组织标本50例为实验组，选择同期良性卵巢上皮肿瘤20例、正常卵巢组织20例作为对照组，采取免疫组化法对RBM 3的表达水平进行检测，并对检测结果进行统计分析。结果 对比发现，在实验组中RBM 3表达阳性率较良性卵巢上皮肿瘤、正常卵巢组织检测结果发生显著升高（P＜0.05）；在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表达阳性率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）；低分化阳性率高于高、中分化（P＜0.05）；有腹水者表达阳性率高于无腹水组（P＜0.05）。结论 RBM 3对卵巢癌的发生以及发展产生了促进作用，在今后的临床工作中，应对其给予足够的重视。

RBM 3；卵巢上皮性癌；免疫组成；临床意义

本次研究中，出于对RBM 3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义进行分析探讨，为今后的临床诊治工作提供有价值的参考信息的目的，对卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮肿瘤以及正常卵巢组织采取免疫组化法进行了RBM 3表达水平检测，并对检测结果进行了统计分析，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年1月～2013年12月在江西省妇幼保健院收治的手术切除的卵巢上皮性癌石蜡组织标本50例为实验组。所有石蜡组织标本均经病理学确诊[1]。所有对象均未接受过放、化疗及手术处理。对照组分别为同期良性卵巢上皮肿瘤20例、正常卵巢组织20例（子宫肌瘤同时行附件切除的卵巢组织，术后病理证实为正常卵巢组织）。卵巢癌患者年龄32～76岁，平均（51.1±13.2）岁，FIGO分期情况：Ⅰ～Ⅱ期者18例，Ⅲ～Ⅳ期者32例。病理分级情况：高、中分化者16例，低分化者34例。有腹水者19例，无腹水者31例。有淋巴转移者21例，无淋巴转移者29例。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 选择手术切除的卵巢上皮性癌石蜡组织标本50例为实验组，选择同期良性卵巢上皮肿瘤20例、正常卵巢组织20例作为对照组，采取免疫组化法对RBM 3的表达水平进行检测，并对检测结果进行统计分析。

1.2.2 检测方法

（1）蜡块筛选的步骤：从资料库中，选取合适的病例，登记每例病例所有玻片号。从玻片库中，找到每例病例的所有玻片，在显微镜下筛选出最适合做免疫组化的玻片，并登记所选玻片号。根据所登记的玻片号，从蜡块库中，找到相应的蜡块，用于制作组织切片。

（2）高压抗原修复操作方法：常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液（800～1 500 mL）于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷气，从喷气开始计时，1～2 min后，压力锅离开热源，冷却至室温（稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却），取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS（pH=7.2～7.4）冲洗2次，每次3 min。

（3）免疫组化染色步骤：将切片脱蜡后冲洗干净，放入塑料栏装好，并用蒸馏水冲洗一遍。在塑料栏中倒入柠檬酸液后放入微波炉中进行抗原修复。从微波炉中取出冷却15 min后，把柠檬酸液倒掉，然后用蒸馏水冲洗1遍，将玻片堆放在试剂盒中画圈，画圈后再用PBS冲洗1遍。冲洗后滴加过氧化氢（即去离子水），室温下孵育10 min。PBS冲洗3×3’遍。甩去PBS液，每张切片分别加一抗，室温下孵育一中午。PBS冲洗3×3’遍。加增强剂A（1 Polymer Helper），室温下孵育20 min。PBS冲洗3×3’遍。加二抗（2 Polymer HRPGOat antl-mouse & Rabblt lgG），室温下孵育30 min。PBS冲洗3×3’遍。甩去PBS液，每张切片加2滴或100 μL新鲜配制的DAB。PBS冲洗1×3’遍。蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗，PBS冲洗返蓝。蒸馏水或自来水冲洗，切片经过梯度酒精脱水干燥后用（二甲苯透明）中性树胶封片。

1.3 结果评价 RBM 3染色为细胞核阳性, 故以胞核出现棕黄色颗粒作为阳性细胞。参照Toula Bouras评分标准: 在

20倍物镜下计数500～1 000个肿瘤细胞，阳性细胞≤10%为1分、＞10%～50%为2分、＞50%～75%为3分、＞75%为4分。染色强度评分标准:无色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。两种得分相加后得1分为阴性、2～3分为阳性(+)、4～5分为较强阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)[2]。

1.4 统计学方法 所有数据经SPSS 17.0统计软件包进行处理。各组间样本率的差异采用四格表资料的Fisher确切概率法处理,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试者中RBM 3表达情况比较 对比发现，在实验组中RBM 3表达阳性率为76.00%，在良性卵巢上皮肿瘤中

RBM 3表达阳性率为40.00%，在正常卵巢组织中RBM 3表达阳性率为25.00%，显然，在卵巢上皮性癌中RBM 3表达阳性率较良性卵巢肿瘤、正常卵巢组织发生显著升高（P＜0.05）。见表1。

表1 3组受试者中RBM 3表达情况比较(n)

2.2 卵巢癌患者不同FIGO分期者中RBM 3的表达情况比较 FIGOⅠ～Ⅱ期者RBM 3表达阳性率为66.67%（12/18），FIGOⅢ～Ⅳ期者RBM 3表达阳性率为81.25%（26/32）。显然在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表达阳性率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）。

2.3 卵巢癌患者不同病理分级者中RBM 3的表达情况比较 病理分级为低分化者RBM 3表达阳性率为82.35%（28/ 34），高、中分化者RBM 3表达阳性率为62.50%（10/16），显然病理分级低分化阳性率高于高、中分化（P＜0.05）。

2.4 卵巢癌患者有无腹水者RBM 3的表达情况比较 有腹水者RBM 3表达阳性率为84.21%（16/19），无腹水者RBM 3表达阳性率为70.96%（22/31），显然有腹水者表达阳性率高于无腹水组（P＜0.05）。

3 讨论

研究证实[3-4]，RBM 3可能通过改变细胞微小RNA水平控制球蛋白的表达水平来影响肿瘤的进展。此外，RBM 3被认为是一种潜在的原癌基因，有下以几个原因：（1）RBM 3的表达水平与肿瘤的分期有关，表明其可能与肿瘤的发生有关；（2）RBM 3沉默增加了G2/M期细胞的数量，并最终导致细胞凋亡；（3）RBM 3可以提高环氧化酶-2、IL-8和血管内皮生长因子的

mRNA的稳定与翻译。众所周知，mRNA的翻译水平的改变在细胞转化与肿瘤发生中起重要作用，RBM 3直接与mRNA结合，可能改变mRNA的二级结构，影响起始因子和核糖体亚基的访问，并调节他们的激酶的潜在活性。探讨冷诱导RNA结合蛋白的分子调控机制非常重要，因为它们的可能与更广泛的生理功能和多种人类疾病的生物学进程有关，包括肿瘤的发生。

本次研究中，出于对RBM 3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义进行分析探讨，为今后的临床诊治工作提供有价值的参考信息的目的，对卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮肿瘤以及正常卵巢组织采取免疫组化法进行了RBM 3表达水平检测，并对检测结果进行了统计分析，结果发现，在实验组中RBM 3表达阳性率较良性卵巢上皮肿瘤、正常卵巢组织检测结果发生显著升高，在

FIGOⅢ-Ⅳ期中的表达阳性率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期，低分化阳性率高于高、中分化，有腹水者表达阳性率高于无腹水组。这一结果与相关文献[5-6]报道结果相似，由此证实，RBM 3在卵巢癌组织中呈现出异常表达，证实其可能参与到卵巢癌血管生成，对卵巢癌的发生以及发展产生了促进作用，在今后的临床工作中，应对其给予足够的重视。

[1] Jogi A,Brennan DJ,Ryden L,et al.Nuclear expression of the RNA-binding protein RBM3 is associated with an improved clinical outcome in breast cancer[J].Mod Pathol,2009,22(12):1564-1574.

[2] Ehlén A,Brennan DJ,Nodin B,et al.Expression of the RNA-binding protein RBM 3 is associated with a favourable prognosis and cisplatin sensitivity in epithelial ovarian cancer[J].Transl Med,2010,20（8）:78.

[3] Jonsson L,Bergman J,Nodin B,et al.Low RBM 3 protein expression correlates with tumour progression and poor prognosis in malignant melanoma:an analysis of 215 cases from the Malmö Diet and Cancer Study[J].J Transl Med,2011(9):114.

[4] Boman K,Segersten U,Ahlgren G,et al.Decreased expression of RNA-binding motif protein 3 correlates with tumour progression and poor prognosis in urothelial bladder cancer[J].BMC Urol,2013(13):17

[5] Jonsson L,Gaber A,Ulmert D,et al.High RBM 3 expression in prostate cancer independently predicts a reduced risk of biochemical recurrence and disease progression[J].Diagn Pathol,2011(6):91.

[6] Zhang HT,Zhang ZW,Xue JH,et al.Differential expression of the RNA-binding motif protein 3 in human astrocytoma[J].Chin Med J (Engl),2013,126(10):1948-1952.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.31.009

江西 330006 江西省妇幼保健院 （曾丹 华金仁 安云婷）