种公牛口蹄疫三价灭活疫苗免疫抗体水平消长测定

卢旺银

甘肃省家畜繁育中心，甘肃 武威 733000

种公牛口蹄疫三价灭活疫苗免疫抗体水平消长测定

卢旺银

甘肃省家畜繁育中心，甘肃 武威 733000

为降低口蹄疫病毒对种公牛健康造成威胁，影响正常生产，提高种公牛有效利用率，我站对国内已检测和局部发生过的三种口蹄疫疫病，用三价灭活疫苗免疫注射，并检测种公牛免疫抗体效价的消长，测定该疫苗对种公牛的保护周期；对全群,60头种公牛颈部深层肌肉注射口蹄疫三价灭活疫苗，分别在免疫后21 d、60 d、120 d、172 d随机选取15头种公牛采血分离血清，检测免疫抗体水平，疫苗注射后检测分析22头种公牛精液理化指标变化；结果注射疫苗后21 d后抗体水平开始升高，达到有效保护水平，60 d达到高峰，120 d高峰持续，到150 d后逐渐下降，172 d免疫抗体仍处在保护区间内，注射该疫苗对种公牛未造成过敏反应，对精液理化指标和数量影响差异不显著；注射疫苗后检测对精液理化指标和数量影响差异不显著,免疫保护期的延长，为下一次免疫注射争取了安全期，经过临界期检测免疫抗体水平，能减少免疫注射次数，降低种公牛免疫应激反应。

种公牛；口蹄疫；灭活疫苗；抗体水平

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为烈性动物传染病，我国规定为一类动物疫病。近年流行的O/ME-SA/Pan Asia、O/SEA/Mya-98和A/ASIA/Sea-97病毒均是传入的。从周边流行的病毒、流行的频率和循环的区域位置判断,O/Pan Asia-2、A/Iran-05、Asia1/Sindh-08和O/Ind-2001病毒未来威胁依然较大。口蹄疫疫情时有发生，对畜牧业生产构成了严重威胁，对种公牛的安全生产影响更大，为了有效预防口蹄疫的发生和传播，保证种公牛的安全生产，进行全覆盖强制免疫的口蹄疫免疫程序。但在具体操作过程中，存在免疫间隔期长，部分种公牛免疫后期抗体效价达不到抵御外界病毒侵袭的水平，不能使畜群得到有效的免疫保护。为使种公牛免疫抗体水平能始终保持在有效保护的状态，同时又不影响种公牛的安全生产，选择最佳的疫苗和免疫时间，是非常重要的。应用口蹄疫O型、亚洲I型、A型三价灭活疫苗进行免疫注射，检测种公牛体内免疫抗体水平消长规律，免疫后种公牛精液理化指标的变化，观察是否过敏等，为制定适合种公牛站实际的最佳免疫方案提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 将种公牛站全群60头牛全部进行免疫，任意选择15头作为试验对象。

1.1.2 试验用疫苗 试验全部采用金宇保灵生物药品有限公司生产的口蹄疫O型、亚洲I型、A型三价灭活疫苗，2～8℃保存，有效期内使用。

1.1.3 抗体检测 仪器酶标分析仪，全自动酶标洗板机，台式高速离心机，KH系列智能型电热恒温器；96孔ELISA板、U型96孔抗原抗体反应板、封板膜、集精器、精子密度仪、相差显微镜、平衡柜、数控冷冻仪、细管分装机等。

1.1.4 检测用试剂中国农业科学院兰州兽医研究所生产提供的O型、亚洲I型、A型口蹄疫抗体检测液相阻断(LB-ELISA)试剂盒，均在有效期内使用。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 O型口蹄疫抗体检测方法用LB-ELISA:GB/T18935-2003；亚洲I型口蹄疫抗体检测方法用LB-ELISA:GB/T18935-2003； A型口蹄疫抗体检测方法用LB-ELISA:GB/T18935-2003。

1.2.2 免疫注射 2015年1月20日对60头种公牛全部注射口蹄疫O型、亚洲I型、A型三价灭活疫苗，每头1.50 ml。

1.2.3 采精量的统计分析 对其中的22头肉用种公牛分别于注射前一周和注射后一周统计采精量数据，分析免疫注射后对种公牛生产的影响。

1.2.4 采样时间 分别在免疫注射后21 d、60 d、120 d、172 d(即2月12日、3月23日、5月23日、7月15日)随机选择15头种公牛采血分离血清，检测免疫抗体。

2 试验结果

2.1 口蹄疫O型、亚洲I型、A型三价灭活疫苗注射前后种公牛生产EXCEL统计结果。

统计结果见表1、表2。

表1 注射口蹄疫三价疫苗前后种公牛生产情况统计表

表2 疫苗注射对牛冻精生产量的影响

注：同列标有相同小写字母表示差异不显著(\%p\%>0.05)

经数据分析，注射前一周和注射后三周种公牛冻精生产量差异不显著。

2.2 口蹄疫A型-O型-亚I三价苗免疫抗体跟踪监测结果检测结果见表3。

免疫后21 d抗体水平开始升高，60 d达到高峰，高峰持续60～120 d，到172 d后逐渐下降，但仍处在有效保护区间。

表3 口蹄疫A型-O型-亚I三价苗免疫抗体跟踪监测结果表

3 结果分析与结论

3.1 结果分析

从种公牛免疫前后冻精生产情况统计结果看，口蹄疫A型、O型、亚I型三价苗免疫注射对生产影响不大，差异不显著。从检测结果来看，种公牛在2015年1月20日注射口蹄疫A型、O型、亚I三价疫苗后的21 d后，抗体水平开始升高，达到有效保护水平，60 d达到高峰，120 d高峰持续，到172d后逐渐下降，但仍处在保护区间内。给种公牛注射口蹄疫O型、亚洲I型、A型三价灭活疫苗，同时能达到较高的保护率。统计数据显示，注射疫苗后检测对精液理化指标和数量影响差异不显著，本试验结果与张淑二,朱茹萌2011，试验显示的青年种公牛(2岁以内)免疫注射后60日内，精液理化指标有一定影响的结果相反，出现不同结果可能与种公牛个体差异，疫苗批次使用的佐剂等有一定关系，还需要对该疫苗注射后的免疫效果，种公牛精液理化指标方面的影响做进一步探讨和研究。

3.2 结论

根据试验结果分析，种公牛1次免疫后，在6个月内，免疫抗体效价保持在一个相对均衡的水平上，起到了预防疫病保护种公牛的目的。抗体效价≥1∶128，保护率达99%以上；效价在1∶22～1∶90之间，保护率达50%；效价≤1∶16就失去对种公牛的保护。免疫抗体水平数据分析与种公牛年龄间没有明显差异，肉牛与奶牛之间免疫应激反应和精液理化肉牛比奶牛明显。因此，我们提出种公牛用口蹄疫三价苗免疫后6个月再继续免疫的免疫程序的免疫方案，这样既科学又省时。也防止了两次免疫接种期间野毒的侵扰，一次注射同时完成三种型口蹄疫病毒的免疫，大大节省了劳动强度，降低了种公牛免疫应激反应，该疫苗注射后2h内留舍观察全群未出现过敏反应，保障种公牛健康安全生产。

[1] 吴清民．兽医传染病学 [M]．北京：中国农业大学出版社， 2000：68-79.

[2] 刘在新.全球口蹄疫防控技术及病原特性研究概观[J].中国农业科学，2015(17):3547-3564.

[3] 张淑二,朱茹萌,等.注射口蹄疫疫苗对三个品种公牛精液品质的影响[J].家畜生态学报，2011(4):75-78.

[4] 孔伟，马志远.注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响[J].中国农业科学，2013(5):43-46.

Fluctuation Determination of Immune Antibody Level in a Trivalent Inactivated Vaccine against Foot-and-Mouth Disease in Cattle

LU Wang-yin

(LivestockBreedingCenterofGansuProvince,WuweiGansu733000China)

In order to reduce the threat of foot-and-mouth disease virus to the health of bulls and normal production, and improve the effective utilization rate of the bull. The breeding center injected with trivalent inactivated vaccine immunization against three foot-and-mouth diseases, and to detect the fluctuation of bull immune antibody titer and protection cycle of the vaccine on bull. The whole group of 60 bulls were used neck deep intramuscular injection of FMD inactivated vaccine. In 21d, 60d, 120d and 172d after immunization, 15 bulls were randomly selected to isolate serum, detect immune antibody level. Changes in the physicochemical analysis index of semen of 22 bulls after vaccination. The results showed that antibody level of the vaccine after 21d began to increase and achieve effective protection level. Antibody level peaked at 60d, then continue to peak at 120d and gradually drop at 150d, and immune antibody was still in the protection interval at 172d. Injection of the vaccine didn't cause allergic reactions on bulls and have no significant effect in physical index and the number of semen. The extension of immune protection period provided safety period for a second immunization. The detection of immune antibody levels can reduce the number of immune injection and bull immune stress response after the critical period.

Bull; foot-and-mouth disease; inactivated vaccine; antibody level

2016-09-08

卢旺银(1963-)，男，甘肃武山人，推广研究员，主要从事动物疫病防治、科技管理和技术推广等工作。

S 852.4+1

A

1004-6704(2016)06-0036-03