高效液相色谱法测定复方咪康唑洗剂中硝酸咪康唑含量

杨　瑾，莫国栋，曾维国，林　丽

（广东省中山市第二人民医院，广东中山　528447）



高效液相色谱法测定复方咪康唑洗剂中硝酸咪康唑含量

杨瑾，莫国栋，曾维国，林丽

（广东省中山市第二人民医院，广东中山528447）

摘要：目的建立测定复方咪康唑洗剂中硝酸咪康唑含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%乙酸铵溶液（20∶80），流速为1.0 mL/min，检测波长为235 nm，柱温为30℃。结果硝酸咪康唑质量浓度在0～2.106 0 g/L范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 3），平均回收率为98.98%，RSD=1.91%（n=9）。结论该法简便快速、准确、重复性好，可用于该制剂中硝酸咪康唑的含量测定。

关键词：高效液相色谱法；复方咪康唑洗剂；硝酸咪康唑；含量测定

复方咪康唑洗剂为我院皮肤科临床应用多年的自制制剂。其主要有效成分硝酸咪康唑属于咪唑类抗真菌药物，对真菌、念珠菌、酵母菌及藻类等具有抑制和杀灭作用，同时对革兰阳性球菌和杆菌也有较强的抗菌作用［1-4］。其具有广谱、高效、安全的特点，常以霜剂、乳膏剂、搽剂等外用剂型广泛应用于临床，用于治疗多种真菌感染引起的手、足、体股癣等的皮肤病［5-7］。复方咪康唑洗剂的原质量标准仅有性状和鉴别等控制项目，而无含量测定项。为进一步控制该制剂质量，确保其疗效，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中硝酸咪康唑的含量。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

安捷伦1260型高效液相色谱仪（安捷伦科技＜中国>有限公司）；十万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；超声机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），移液枪（赛默飞世尔上海仪器有限公司）。

1.2试药

甲醇为色谱纯，乙酸铵为分析纯，水为超纯水；硝酸咪康唑对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100213-200705，含量为99.7%）；复方咪康唑洗剂（中山市第二人民医院自制，批号分别为20150125，20150126，20150127）。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%乙酸铵（20∶80）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：235 nm。

2.2溶液制备

供试品溶液：取样品，用力振摇后，用移液枪快速精密移取本品0.5 mL，置10 mL容量瓶中，用适量甲醇稀释，超声处理5 min，取出放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

阴性对照品溶液：按处方制备不含硝酸咪康唑的阴性样品，精密量取，按供试品溶液制备方法制备，即得。

对照品溶液：取硝酸咪康唑对照品65 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。取对照品贮备液适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 mL中约含1 mg硝酸咪康唑的溶液，即得。

2.3方法学考察

阴性干扰试验：取2.2项下3种溶液进样测定，记录色谱图。在此色谱条件下，供试品中其他成分对硝酸咪康唑的测定无干扰，色谱图见图1。

线性关系考察：精密量取对照品贮备液1，2，3，4，3，4 mL，置10，10，10，10，5，5 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为系列对照品溶液，按拟订色谱条件，分别进样10 μL，记录色谱图。以对照品溶液的质量浓度（X，g/L）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得硝酸咪康唑的回归方程Y=3.863 4×102X + 11.599 4，r=0.999 3（n=6）。结果表明，硝酸咪康唑质量浓度在0～2.106 0 g/L范围与峰面积线性关系良好。

图1　高效液相色谱图

精密度试验：取同一硝酸咪康唑对照品溶液，按拟订色谱条件，连续测定6次。结果峰面积的RSD为0.08%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为20150126），依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件连续测定6次。结果的RSD为1.04%（n=6），表明方法重复性好。

稳定性试验：取样品（批号为20150126），依法制备供试品溶液，于0，2，4，6，12，24 h时进行测定。结果的RSD为1.14%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取不含硝酸咪康唑的阴性样品9份，取硝酸咪康唑对照品，按80%，100%，120%水平加样，平行测定3次，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1　硝酸咪康唑回收试验结果（n=9）

2.4样品含量测定

取本品3批，依法测定，按外标法计算含量。结果3批样品的硝酸咪康唑标示百分含量分别为98.65%，98.24%，97.59%，符合标准要求（硝酸咪康唑含量应为标示量的90.0%～110.0%）。

3　讨论

3.1检测波长选择

参考2010年版《中国药典（二部）》硝酸咪康唑搽剂含量测定项下的检测波长［8］，并将硝酸咪康唑对照品溶液用甲醇稀释至适宜质量浓度，以流动相为空白，采用紫外分光光度计于200～500 nm波长扫描，其最大吸收波长为235 nm，故检测波长为235 nm。

3.2流动相选择

参考文献［9-12］，考察了甲醇、乙腈、水、磷酸等试剂的不同比例作为流动相，但峰形及分离度效果均不理想，最终确定了以甲醇、0.5%乙酸铵为基础的流动相系统。结果以甲醇-0.5%乙酸铵（20∶80）为流动相时，硝酸咪康唑的峰形对称，分离度符合要求，各峰之间无干扰。

3.3样品前处理

复方咪康唑洗剂为混悬剂，含有较多的氧化锌、升华硫不溶性成分，对主药硝酸咪康唑具吸附作用，影响制剂取样均匀性及含量测定准确性［13］。考察同一批号的复方咪康唑洗剂，分别经5 min，10 min，15 min超声处理制备的样品，5 min超声处理测得的硝酸咪康唑含量较低，10 min与15 min超声处理的供试品溶液中硝酸咪康唑含量相近，最终确定采用10 min超声处理。

参考文献：

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［3］林跃红，李惠民，张晓民，等.硝酸咪康唑溶液对白色念珠菌的体外抗菌作用研究［J］.实用临床医药杂志，2008，12（4）：46-48.

［4］张青叶.香莲栓联合咪康唑栓治疗阴道念珠菌感染38例［J］.中国药业，2014，23（20）：105-106.

［5］罗宏丽，肖顺林，冯碧.HPLC测定复方地米水杨酸酊中硝酸咪康唑的含量［J］.中国现代应用药学，2011，28（8）：765-767.

［6］张莹.硝酸咪康唑栓治疗外阴道念珠菌病的临床疗效［J］.中国医药指南，2012，10（12）：113-114.

［7］赖东梅，张丹霞，陈惠英，等.咪康唑莫米松皮肤成膜凝胶皮肤用药安全性试验［J］.中国药业，2013，22（24）：22-23.

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：953.

［9］卢劲涛.HPLC法测定硝酸咪康唑乳膏的含量［J］.中国药师，2010，13（5）：691-692.

［10］王一淞，杨松涛，吕佳，等.高效液相色谱法测定硝酸咪康唑栓的含量［J］.实用药物与临床，2013，16（9）：833-835.

［11］唐永红，宋愿智，李秋菲.HPLC法测定硝酸咪康唑栓中硝酸咪康唑的含量［J］.西北药学杂志，2012，27（5）：433-435.

［12］贾旭玲，施芬，王帅，等.复方硝酸咪康唑乳膏中硝酸咪康唑的含量测定［J］.中国药业，2007，16（10）：37.

［13］倪晓霞，黄艺蓉，黄元成，等.HPLC法测定复方咪康唑散中硝酸咪康唑含量［J］.中国药师，2013，16（1）：82-84.

Content Determination of Miconazole Nitrate in Compound Miconazole Nitrate Lotion by HPLC

Yang Jin，Mo Guodong，Zeng Weiguo，Lin Li
（Zhongshan Second People′s Hospital，Zhongshan，Guangdong，China 528447）

Abstract：Objective To establish an HPLC method to determine miconazole nitrate in compound miconazole nitrate lotion.Methods The analysis was carried out at 30℃on a Eclipse C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase consisted of methanol-0.5%ammonium acetate solution（20∶80）with the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 235 nm.The column temperature was 30℃.Results The calibration curve of miconazole nitrate was linear over the range of 0-2.106 0 g/L（r=0.999 3）.The average recovery was 98.98%（RSD=1.91%，n=9）.Conclusion This method is simple，accurate，reproducible and applicable for the content determination of miconazole nitrate in Compound Miconazole Nitrate Lotion.

Key words：HPLC；compound miconazole nitrate lotion；miconazole nitrate；content determination

中图分类号：R927.2；R986.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0046-03

作者简介：杨瑾（1981-），女，硕士研究生，副主任药师，研究方向为药物制剂，（电子信箱）yangjin1209@163.com。

收稿日期：（2015-12-02；修回日期：2016-01-17）