射干提取物对慢性咽炎家兔血清中白细胞介素-4和免疫球蛋白E表达的影响*

尤献民，邹桂欣，赵金明，王光函，李国信

（辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳　110034）



射干提取物对慢性咽炎家兔血清中白细胞介素-4和免疫球蛋白E表达的影响*

尤献民，邹桂欣，赵金明，王光函，李国信

（辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳110034）

摘要：目的观察射干提取物用于慢性咽炎家兔血清中白细胞介素-4（IL-4）和免疫球蛋白E（IgE）指标的变化，以进一步探讨其治疗作用机制。方法应用氨水和松节油直接作用于大耳白家兔咽部黏膜制备慢性咽炎病理模型，以射干提取物进行治疗，观察药物对模型动物血清IL-4和IgE表达的影响。结果模型组动物血清中的IL-4和IgE含量显著高于空白组（P＜0.05），经射干提取物治疗后血清中IL-4和IgE水平均较模型组降低。结论射干治疗慢性咽炎药理活性作用可能是通过调节细胞因子的表达而实现的。

关键词：射干提取物；慢性咽炎；细胞因子；作用机制

*国家“十二五”重大新药创制项目“中药新药临床技术平台评价研究技术平台”，项目编号：2012zx09303-017；国家自然基金资助项目，项目编号：81273927；国家临床重点专科建设项目经费资助；国家中医药管理局临床中药学重点学科；辽宁中医药大学杏林学者青蓝工程。

慢性咽炎是指咽喉干燥、咽痛不适、咽内异物感，经久不愈的一种慢性咽部疾病，属中医“慢喉痹”范畴［1］，可能由病毒、细菌及变态反应因素引起。射干作为治疗喉痹咽痛的要药，始载于《神农本草经》［2］，具有清热解毒、消痰、利咽的作用，临床有良好的治疗效果。现代研究表明，射干中的异黄酮类成分具有明显抗炎、抑菌、止咳的药理作用［3-5］。笔者通过动物试验，以白细胞介素-4（IL-4）和免疫球蛋白E（IgE）为检测指标，从细胞因子的角度对射干治疗咽炎的作用机制进行了初步探讨。

1　材料与方法

1.1材料

仪器：美国Elx800TM型酶标仪；高速冷冻离心机（日立工机株式会社）；喉头喷雾器（泰兴市辉春医疗器械有限公司）。

动物：选取清洁级3月龄大耳白家兔60只，雌雄各半，体重1.8～2.3 kg。随机分成6组，即空白组，模型组，射干提取物低、中、高剂量组和阳性对照组（予慢严舒柠），每组10只。饲养环境，温度（20±2）℃，自由饮水，适应性饲养1周。

试剂与试药：慢严舒柠（桂龙药业＜安徽>有限公司，国药准字Z20053117，规格为每袋5 g）；氨水（国药集团），松节油（长沙化学试剂厂，分析纯）；IgE和IL-4 ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所有限公司）。

射干提取物：射干药材1 kg，加70%乙醇提取2次，合并提取液，浓缩至无醇味，用乙醇调整至含醇量为30%，上于D101大孔吸附柱上，用2倍量30%乙醇除杂，继用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥至干，即得。每1 g提取物含20.7 g射干药材。

1.2试验方法

用喉头喷雾器内装氨水（体积分数为2.5%），对模型组、对照组、射干提取物剂量组共50只家兔喷咽，每日2次，上、下午各1次，每次喷3揿，连续喷17 d。其中在造模的第8～17天用扁桃体注射针将松节油注射于兔咽部黏膜下，每次0.2 mL，正常对照组动物用生理盐水喷咽及注射，操作方法与造模组完全相同。于造模第20天开始给药，每天1次，阳性对照组给予慢严舒柠（50 mg/kg），射干提取物高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予射干提取物400，200，100 mg/kg，空白组及模型组给予等量蒸馏水。连续给药7 d后，处死动物，取血清标本，用ELISA试剂盒检测，按试剂盒说明书操作，测定各组动物血清标本中IL-4和IgE含量。

1.3统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件处理，数据以均数±标准差表示，采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

结果见表1。可见，模型组中IL-4的含量显著高于空白组（P＜0.01），提示造模成功；射干高、中、低剂量组及阳性对照组血清中IL-4含量均降低，射干低剂量组与模型组比较无显著性差异，高剂量组（P＜0.01）、中剂量组及阳性对照组与模型组比较差异显著（P＜0.05）。模型组中IgE的含量显著高于空白组（P＜0.05），提示造模成功；射干高、中、低剂量组及阳性对照组血清中IgE含量均降低，但只有射干高剂量组及阳性对照组与模型组比较有显著性差异（P＜0.05），射干中、低剂量组与模型组无显著性差异（P>0.05）。

表1　各组兔血清中IL-4和IgE含量比较（±s，pg/mL）

表1　各组兔血清中IL-4和IgE含量比较（±s，pg/mL）

注：与空白组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，#P＜0.01。

空白组模型组射干低剂量组射干中剂量组射干高剂量组阳性对照组组别　动物数（只）IL-4IgE 10 10 10 10 10 10 25.6±3.0 32.1±6.3▲29.7±4.2 27.0±3.1*25.1±3.0#26.5±1.8*19.6±3.1 24.4±5.2△22.9±4.1 21.7±2.6 20.1±2.5*19.3±2.6*

3　讨论

现代医学认为，慢性咽炎是咽黏膜、黏膜下及淋巴组织的弥漫性炎症。细胞因子在慢性炎症的发生发展中起重要作用，IL-4是其中一种重要的炎症因子，在IgE介导的经典Ⅰ型变态反应炎症中发挥重要作用。因为变应原被黏膜表面的抗原提呈细胞吸收后，被传给Th0淋巴细胞，Th0细胞转化成Th2细胞而开始分泌IL-4，IL-4又刺激合成IgM的浆细胞转化成合成的IgE的浆细胞，IgM结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，当变应原再次接触机体后，与IgE结合引起变态炎症反应［6］。

射干是治疗咽炎的要药，提取物中主要含射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素等黄酮类化合物，这些天然的药物活性成分可能在体内形成一个多途径、多靶点系统而发挥作用。本试验结果提示，射干提取物对慢性咽炎的治疗作用可能是通过降低血清中IgE水平，并抑制血清中IL-4的表达等来实现的，完整的作用机制还有待于进一步深入研究。

参考文献：

［1］彭顺林，张岳，陈娟.咽灵口服液对实验性慢性咽炎IL-13和EGF表达的影响［J］.中国中西医结合耳鼻喉科杂志，2008，16（3）：168-170.

［2］孙星衍.神农本草经［M］.北京：中国古籍出版社，1982：275.

［3］李国信，秦文艳，齐越，等.射干提取物抗炎及镇痛药理实验研究［J］.实用中医内科杂志，2008，22（1）：3-4.

［4］秦文艳，赵金明，齐越，等.射干提取物体内体外抑菌作用的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（4）：147-150.

［5］赵金明，孟莉，陈贺，等.射干有效成分抗病毒主要药效学实验研究［J］.实验动物科学，2011，17（6）：9-12.

［6］叶京英，韩德民.慢性咽炎研究进展［J］.中国医学文摘（耳鼻咽喉科学），2004，19（5）：268-271.

Effects of Rhizoma Belamcandae Extracts on the Expression of IL-4 and IgE in Rabbits with Experimentally Induced Chronic Pharyngitis

You Xianmin，Zou Guixin，Zhao Jinming，Wang Guanghan，Li Guoxin
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang，Liaoning，China 110034）

Abstract：Objective To study the expression of interleukin-4 and IgE in the pharyngitis rabbit model with the Rhizoma Belamcandae extracts to explore its treatment mechanism.Methods White rabbits were used in this study to prepare the model of chronic pharyngitis，induced by directly applied into the pharyngeal mucosa with ammonia water and turpentine oil at first.Then，these modeling animals were divided into several groups，with the Rhizoma Belamcandae extracts taken to treat this kind of lesion.The changes in the expression of IL-4 and IgE of these animal models were determined to evaluate the pharmacological effects of this solution on the lesion.Results It was shown that the level of IL-4 and IgE were reduced among the animals in treating group（P＜0.05）.Conclusion The therapeutic mechanisms of Rhizoma Belamcandae extracts or the treatment of chronic pharyngitis may be achieved by regulating the expression of cytokines.

Key words：Rhizoma Belamcandae extracts；chronic pharyngitis；cytokines；mechanism

中图分类号：R285.5；R282.71

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0003-02

作者简介：尤献民（1964-），男，硕士研究生，研究员，研究方向为中药新药开发，（电子信箱）yying _65@126.com；李国信（1963-），男，博士研究生，研究员，研究方向为临床药学，本文通讯作者，（电子信箱）youxianminw1120@126.com。

收稿日期：（2015-10-14）