反相高效液相色谱法测定香菊胶囊中迷迭香酸含量

孙　菲，孙　欣，金　荣

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西　158100）



反相高效液相色谱法测定香菊胶囊中迷迭香酸含量

孙菲，孙欣，金荣

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西158100）

摘要：目的建立测定香菊胶囊中迷迭香酸含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法。方法色谱柱采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液（线性梯度洗脱），检测波长330 nm，柱温30℃，进样量10 μL，流速1.0 mL/min。结果迷迭香酸进样量在5.019×10-2～7.679×10-1μg范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 9（n=7）；平均加样回收率为99.20%，RSD为0.35%（n=6）。结论该法操作快速、简便、准确、结果可靠，可用于香菊胶囊的质量控制。

关键词：香菊胶囊；含量测定；迷迭香酸；高效液相色谱法

香菊胶囊由化香树果序（除去种子）、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、白芷、甘草、川芎9味中药组方，具有辛散祛风、清热通窍之功效［1］，用于急、慢性鼻窦炎及鼻炎，疗效显著［2-3］。迷迭香酸为夏枯草中的有效成分［4］，现行质量标准无对处方中主药夏枯草的质量控制，2010年版《中国药典（一部）》［5］规定夏枯草中迷迭香酸的含量不能低于0.20%，故迷迭香酸含量可以作为香菊胶囊中夏枯草质量评价的依据。目前，尚无相关文献报道香菊胶囊中迷迭香酸的含量测定方法。因此，笔者建立了香菊胶囊中迷迭香酸的含量测定方法，专属性强、准确、可靠，可为完善该制剂的质量控制提供参考。

1　仪器与试药

1.1仪器

HP1100型高效液相色谱仪（包括四元泵，紫外检测器，自动进样器），HP1100工作站；CP225D型电子天平（Sartorius公司）；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器（功率为400 W，频率为40 kHz）；UV-2550型紫外-可见分光光度计（苏州岛津公司）。

1.2试药

迷迭香酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111871-201203，含量为98.8%）；香菊胶囊（山东步长制药有限公司，批号为140416，140418，140312）；水为娃哈哈纯化水；其他试剂均为色谱纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.5%磷酸溶液（B），线性梯度洗脱，见表1；检测波长：330 nm；进样量：10 μL；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min。迷迭香酸峰与相邻色谱峰间的分离度均大于1.5，理论板数以迷迭香酸峰计不低于9 000。在此条件下，色谱图见图1。

表1　线性梯度洗脱程序

图1　高效液相色谱图

2.2溶液制备

称取五氧化二磷干燥24 h以上的迷迭香酸对照品10.16 mg（含量98.8%），精密称定，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇适量，超声使完全溶解，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液。称取样品适量（相当于1粒重），精密称定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇35 mL，超声处理，提取30 min，放至室温，加50%甲醇至稀释刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，备用，得供试品溶液。按香菊胶囊的处方，不加夏枯草，依法制备阴性样品，按供试品溶液制备的方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

阴性干扰试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样，色谱图见图1。结果表明，阴性对照品溶液对测定无干扰。

线性关系考察：精密量取对照品贮备液1mL，置20mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，得对照品溶液（质量浓度为50.19 μg/mL），按拟订色谱条件，分别进样1，2，4，6，8，10，15 μL，记录色谱图，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行回归分析，得迷迭香酸回归方程Y=2.199×103X-2.412，r=0.999 9（n=7）。结果表明，迷迭香酸进样量在5.019×10-2～7.679×10-1μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液适量，稀释20倍，得质量浓度为50.19 μg/mL的对照品溶液，按拟订色谱条件，连续重复进样5次，记录色谱图。结果的RSD为0.4%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密称取样品适量，依法制备供试品溶液，设定自动进样器，分别于0，1，2，4，10，16，24 h时重复进样，记录色谱图。结果的RSD为0.6%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批香菊胶囊（批号为140416），依法制备供试品溶液5份，按拟订色谱条件分别进样，记录色谱峰面积。结果迷迭香酸的平均含量为每粒1.356 mg，RSD为0.8%（n=5），表明方法重复性较好。

加样回收试验：称取已知含量的香菊胶囊（批号140416）约0.16 g，称取6份，精密称定，分别置50 mL容量瓶中，分别精密加入对照品溶液（质量浓度为339.1 μg/mL）各2.0 mL，加50%甲醇适量，超声提取30 min，静置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，按拟订色谱条件分别进样，记录色谱图，测定含量，计算回收率。结果见表2。

表2　迷迭香酸加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取本品10粒，取出内容物，去除胶囊壳，精密称定，研细，精密称取本品（相当于1粒），依法制备供试品溶液，平行制备3份，按拟订色谱条件，用外标法计算市售3批样品中迷迭香酸的含量。结果见表3。

表3　样品含量测定结果（n=3）

3　讨论

3.1测定波长选择

文献［6］报道迷迭香酸检测波长为330 nm，本试验中采用紫外分光光度法，于200～700 nm波长范围内对迷迭香酸对照品溶液全波长扫描，结果迷迭香酸的最大吸收波长为330 nm。

3.2流动相选择

曾考察乙腈-1.0%醋酸水溶液［7］、乙腈-0.1%磷酸溶液［8］和甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，结果表明3种流动相均能分离出迷迭香酸。综合比较，采用甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相，分离效果最好，且流动相成本、毒性相对较低。另外，流动相加入低浓度酸溶液，能有效抑制迷迭香酸解离，同时能减少拖尾现象，提高了分离效率。

3.3提取方法考察

曾考察以乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇、75%甲醇作溶剂超声提取20，30，35，40 min，结果表明50%甲醇作溶剂提取效率最高，超声30 min提取完全。

3.4操作避光

迷迭香酸属多酚羟基化合物，温度和pH对迷迭香酸的稳定性影响较小，但光照和金属离子对迷迭香酸稳定性影响较大［8］，故试验操作中尽量避光，全部采用棕色容量瓶。

3.5研究价值

迷迭香酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗抑郁等药理作用［9-10］，迷迭香酸是香菊胶囊处方中夏枯草中的有效活性成分，含量直接影响香菊胶囊药效，因此本法的建立是对现行标准的有效补充和提高。

参考文献：

［1］WS3-161（Z-151）-2001（Z），国家药品标准（新药转正标准）［S］.

［2］王桂安，李歌，杜蕾.香菊胶囊治疗慢性鼻-鼻窦炎的临床疗效分析［J］.中国医药指南，2013，11（1）：598-600.

［3］许加军.内窥镜鼻窦术后加用香菊胶囊治疗慢性鼻窦炎的临床观察［J］.中国药房，2013，24（48）：4 552-4 554.

［4］许招懂，王智民，刘菊妍，等.夏枯草中异迷迭香酸苷TLC鉴别和HPLC含量测定［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（21）：106-108.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：263.

［6］张峻颖，付瑛，朱孝云，等.香蜂花中迷迭香酸的提取工艺优选［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（23）：7-10.

［7］林丽美，夏伯候，刘菊妍，等.RP-HPLC法同时测定夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸、迷迭香酸和蒙花苷［J］.中成药，2013，35（11）：2 411-2 414.

［8］侯建春，吕晓玲，周平，等.迷迭香酸的稳定性研究［J］.食品研究与开发，2009，30（3）：44-48.

［9］周丹，刘艾林，杜冠华，等.迷迭香酸的药理学研究进展［C］.第二届中国医院药学论坛论文集，2011：42-46.

［10］陈立亚.迷迭香酸的研究概况［J］.中国药事，2007，21（11）：923-926.

Content Determination of Rosmarinicacid in Xiangju Capsules By HPLC

Sun Fei，Sun Xin，Jin Rong
（Jixi Food and Drug Testing Center，Jixi，Heilongjiang，China 158100）

Abstract：Objective To establish a RP-HPLC method for determination of Rosmarinicacid in xiangju capsules.Methods Using a column packed with Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；The mobile phase was methanol-0.5%H3PO4by gradient elution and the detection wavelength was 330 nm；the flow rate was 1.0 mL/min，the injection volume was 10 μL，the column temperature was 30℃.Results The Linear response of rosmarinicacid ranged from 5.019×10-2-7.679×10-1μg（r=0.999 9，n=7）；the average recovery rate was 99.20%，RSD=0.35%（n=6）.Conclusion The method is convenient，quick and accurate，and can be used for the quality controL of Xiangju Capsules.

Key words：Xiangju Capsules；content determination；rosmarinicacid；HPLC

中图分类号：R284.1；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0043-03

作者简介：孙菲（1981-），女，副主任药师，研究方向为药品检验，（电话）0467-6103277（电子信箱）chenlizhu1980@163.com。

收稿日期：（2015-12-10；修回日期：2016-01-19）