多巴胺受体在食管反流患者括约肌中的表达及对迷走神经通路的影响分析

刘健鹏， 方 爽， 昌国华， 朱宝宇

1.吉林省吉林市65331部队,吉林 132002； 2.解放军二二二医院； 3.吉林大学中日联谊医院

其他论著

多巴胺受体在食管反流患者括约肌中的表达及对迷走神经通路的影响分析

刘健鹏1， 方 爽2， 昌国华2， 朱宝宇3

1.吉林省吉林市65331部队,吉林 132002； 2.解放军二二二医院； 3.吉林大学中日联谊医院

目的 探讨多巴胺受体在食管反流患者括约肌中的表达及对迷走神经通路的影响。方法 选择吉林大学中日联谊医院2014年1月-2015年3月接诊的进行食管大部切除术的30例患者为观察组，观察多巴胺受体亚型的mRNA和蛋白在人食管下括约肌的表达，并选择同期来吉林大学中日联谊医院进行体检的30名健康者为对照组，比较两组人员胃肌电活动水平。结果 观察组3种多巴胺受体亚型mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)，其中D1R水平最高，钩状纤维(0.73±0.04)、套索纤维(0.76±0.05)、食管(0.74±0.05)、胃底环形肌(0.77±0.04)，同一个多巴胺受体亚型mRNA在不同肌条之间差异无统计学意义(P>0.05)；3种多巴胺受体亚型蛋白表达在人食管下括约肌中的差异有统计学意义(P<0.05)，同一多巴胺受体亚型蛋白在不同肌条之间差异无统计学意义(P>0.05)；观察组胃电主频(4.43±0.15)cpm/min明显低于对照组(4.82±0.10)cpm/min，正常胃电百分率(68.00±3.50)%也低于对照组(90.00±2.00)%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 多巴胺受体在食管反流患者括约肌中发挥着重要的作用，并对迷走神经通路有一定影响，为临床治疗提供了理论依据。

多巴胺受体；食管下括约肌；迷走神经通路

食管反流是一种常见的消化道疾病，这类疾病会引起患者持久、反复、大量的反食情况，还会产生食管炎等并发症，极大地危害着人们的生活。近年来关于这类疾病发病机制的研究有较大的进展，其中人食管下括约肌是连接食管和胃之间的一条环形肌，研究[1]表示，在食管反流患者中，多巴胺受体会在括约肌中有所表达，且与迷走神经通路有一定关联。人食管下括约肌由钩状纤维及套索纤维构成，这两种纤维可以维系一种收缩状态，防止食物在胃中反流入食管，在我们进行吞咽食物的过程中，食管扩张，迷走神经通路对这种行为也会产生一定的作用。我们将研究多巴胺受体在食管反流患者括约肌中的表达及对神经通路的影响，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年1月-2015年3月吉林大学中日联谊医院接诊的进行食管大部切除术的30例患者作为观察组，男24例，女6例，平均年龄(60.06±12.55)岁，纳入标准[2]：(1)术后有食管反流症状的患者；(2)迷走神经被切断的患者。排除标准：(1)无食管下括约肌功能障碍病史；(2)术前有反酸、烧心等症状的患者。并随机选取同期来吉林大学中日联谊医院进行体检的30名健康者作为对照组，男23例，女7例，平均年龄(58.07±11.56)岁。本次研究均在患者知情同意下进行，且通过我院伦理委员会批准，两组人员一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法首先采集观察组食管和胃底的胃食管交界部(esophagogastric junction，EGJ)标本，置于4 ℃TBS的烧杯里，锐性剥掉胃底部的黏膜和食管下段，制取钩状纤维、套索纤维、食管以及胃底环形肌的肌条，肌条大小为(2～4)mm×(8～12)mm，制取时注意不能有食管纵行肌。再提取核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)组织，测定其浓度和完整性，之后再检测信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)在4种肌条中的表达，检测软件采用Gel Pro，计算多巴胺受体亚型在mRNA中的相对含量。再提取组织蛋白，使用考马斯亮蓝G-250制取，并将组织蛋白调整到相同的浓度，分离出多巴胺受体各亚型中相应的组织蛋白含量。然后比较观察组和对照组胃肌电活动，两组人员分别在清晨空腹的情况下连接胃肠电记录仪和浆膜电极。

1.3 仪器DYY-2C型1%琼脂糖凝胶电泳，北京六一仪器厂；U-2000型紫外分光光度计，日本日立公司；考马斯亮蓝G-250，南京建成生物研究所；胃肠电图检测仪，上海馨迪环保科技有限公司提供。

1.4 观察指标观察观察组患者多巴胺受体亚型mRNA在人食管下括约肌的表达、多巴胺受体亚型蛋白在人食管下括约肌的表达以及两组人员胃肌电的活动水平比较。

1.5 统计学处理数据用SPSS 18.0软件包进行处理，计量资料用均数±标准差表示，并采用t检验，计数资料的比较采用χ2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 多巴胺受体亚型mRNA及蛋白在人食管下括约肌的表达三种多巴胺受体亚型mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)，同一个多巴胺受体亚型mRNA及蛋白表达在不同肌条之间的差异无统计学意义(P>0.05，见表1)。

表1 多巴胺受体亚型mRNA及蛋白在人食管下括约肌的表达±s)

注：D1R，D2R，D5R三组间相比，P<0.05；不同肌条间相比，P>0.05。

2.2 两组间胃肌电活动水平比较观察组胃电主频明显低于对照组，正常胃电百分率也低于对照组，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05，见表2)。

表2 两组间胃肌电活动水平比较±s)

注：与对照组相比，*P<0.05。

3 讨论

食管反流是一种典型的消化道疾病，临床上表现出咽部发紧、胸闷痛及反食等症状，并可导致食管外组织损伤或食管炎等并发症。位于胃食管交界上方的食管下括约肌是一种生理性括约肌，由胃小弯侧半环形的钩状纤维和大弯侧呈斜状分布的套索纤维共同构成，这两种纤维联通神经源性及肌源性的多种因素保持持续性的收缩状态，从而在人体的胃部中形成了高压带，构成一种反流屏障。在我们吞咽食物的过程中，食管会进行原发性蠕动，因此食管下括约肌对食管有保护作用。食管下括约肌在一般情况下保持收缩的状态，维持高压带的运作，防止食物反流。有研究[3-4]显示食管反流和食管下括约肌的异常运动有关。如胡桃夹食管、弥漫性食管痉挛等食管运动功能的障碍都是由于食管下括约肌的异常运动产生的。食管括约肌舒张和收缩之间的调节机制十分复杂，国外的研究主要是将胃泌素、一氧化氮、胆囊收缩等神经递质和其间的相关受体进行研究[5]。而食管下括约肌的运作涉及了身体机能中包括各种受体间的影响及神经递质等。而此次我们研究了多巴胺受体在食管反流患者括约肌中的表达及对迷走神经通路的影响。

多巴胺在调节人体内的认知、自动运动、胃肠运动、情感及激素等功能中起重要作用，还参与了外周神经系统的免疫功能、血管功能、交感神经等机能的调节。多巴胺受体在体内的运动可使胃内压降低，进一步使胃体平滑肌变得松弛。这种受体在哺乳动物的中枢神经和外周神经系统内有广泛分布，而近年来有研究[6-7]证明在人类的胃肠道中也有分布。多巴胺受体有5种受体亚型，为D1R～D5R。按照分子的药理学性质和分子之间的结构情况可以分为D1样受体和D2样受体，D1样受体为D1R和D5R，D2样受体为D2R、D3R和D4R。现有研究[8-9]中，目前主要是集中在心血管系统和中枢神经系统方面，在人食管下括约肌中的研究还较匮乏。有人通过试验证明多巴胺受体对人体的消化道发挥着重要作用，且广泛分布在消化道各处。本研究更加深入地研究人下食管括约肌中多巴胺受体的分布情况。研究证明多巴胺受体有3种亚型分布在人食管下括约肌中，分别为D1R、D2R、D5R。之前有研究也提出了人食管下括约肌中有D1R和D5R的存在，与本研究结果一致[11]。我们还深入研究了各种亚型的分布情况，为以后的临床奠定理论基础。D1R在肌条中的水平最高，在多巴胺的5种受体亚型中，D1R的分布主要体现在嗅球、丘脑以及纹状体部位，都是在脑组织中，所以得到的表达结果最高。过往研究显示D3R的分布主要在嗅球、伏核等的边缘部位，而D4R则分布在下丘脑、海马体、额前皮质等部位，位置相对较局限[12-13]。

随着对食管功能障碍方面疾病的研究，我们发现发病机制与食管下括约肌的舒张和收缩有很大关系，例如括约肌不能良好地进行松弛或持续性的收缩等异常行为[14]。括约肌的舒张和伸缩主要由中枢神经系统的调节和支配，并与神经递质、多种激素及自身的肌源性因素共同完成。一般我们认识括约肌肌肠层肠道运动神经元和迷走神经输入神经末梢相互形成了一种明显的突触联系，共同构成了抑制性迷走神经通路和调节括约肌舒张和伸缩的兴奋性迷走神经通路。迷走神经中含有传入和传出两种纤维，传出纤维可以将中枢神经系统中的信息传入胃里，从而对胃的分泌和运动等功能产生影响。胃肌电活动是胃功能最基础的电活动，这种活动决定着胃运动的方向、节奏、律动。进行过食管大部切除术的患者中，迷走神经通路会出现紊乱的情况，使患者胃体不能进行良好的收缩，胃功能下降，从而引起了胃排空的延迟以及食管反流等情况的产生。之前有研究证明，在某些患有恶性肿瘤或者经历过胃功能方面手术的患者中，由于迷走神经通路紊乱，不能良好地控制自身胃功能的松弛情况，出现一定程度的适应性松弛障碍，导致进食后胃扩张，即便是少量的食物，也会感到有饱涨的感觉，因此会出现反食的情况[15-16]。本研究显示，在患有食管反流的患者中胃肌电的频率明显低于健康者，进一步证明在食管反流患者中，迷走神经通路对患者有一定程度的影响。

笔者认为在食管反流患者中加重对多巴胺受体的研究有重要作用，由于迷走神经通路对此类型的患者有影响，在手术过程中应对迷走神经通路进行良好的保护，以免发生紊乱，降低对胃功能的伤害，加强患者术后的恢复情况。综上所述，多巴胺受体的mRNA及相应的蛋白在食管反流患者括约肌中有着明显的表达，也对迷走神经通路有一定的影响，此研究为食管运动功能障碍类型的疾病提供了良好的理论依据，对今后的临床治疗有所帮助。

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(责任编辑：马 军)

Expression of dopamine receptor in mousculi sphincter in patients with esophageal reflux and effect on vagus nerve pathway

LIU Jianpeng1, FANG Shuang2, CHANG Guohua2, ZHU Baoyu3

1. Jilin 5331 Troops, Jilin 132002； 2. No.222 Hospital of PLA; 3. The Fellowship Hospital of Jilin University, China

Objective To investigate the expression of dopamine receptor in musculi sphincter in patients with esophageal reflux and effect on vagus nerve pathway.Methods Thirty cases of esophageal resection patients in the Fellowship Hospital of Jilin University from Jan. 2014 to Mar. 2015 were as observation group. The expression of dopamine receptor subtypes mRNA and protein in the lower esophageal sphincter were detected. In the same period, 30 healthy persons were as the control group. The level of gastric myoelectrical activity was compared between two groups. Results There was significant difference in the expression of 3 kinds of dopamine receptor subtypes mRNA (P<0.05), the level of D1R was the highest, clasp fibers was (0.73±0.04), sling fibers was (0.76±0.05), esophagus was (0.74±0.05), gastric circular muscle was (0.77±0.04), there was no significant difference in the mRNA of the same dopamine receptor subtypes among different muscle strips (P>0.05); three types of dopamine receptor subtypes in human esophageal sphincter had statistically significant difference (P<0.05), there was no statistical significance in a dopamine receptor subtype protein among different muscle strips (P>0.05); the main frequency of stomach in observation group was significantly lower than that in control group, the percentage of normal gastric electric was lower in observation than that in the control group, there was statistically significant (P<0.05). Conclusion Dopamine receptors play an important role in musculi sphincter in patients with esophageal reflux, and have certain effect on the vagus nerve pathway, it provides a theoretical basis for clinical treatment.

Dopamine receptor; Lower esophageal sphincter; Vagus nerve pathway

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.06.020

刘健鹏，本科，研究方向：胃肠病学。E-mail： 410512985@qq.com

朱宝宁，硕士，主治医师，研究方向：胃肠病学。E-mail：1185357051@qq.com

R571

A

1006-5709(2016)06-0672-04

2015-09-17