胃癌患者血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白水平及临床意义

林建姣， 刘 艳， 胡红松， 万彦彬， 陈春林

深圳市龙岗区人民医院消化内科，广东 深圳 518172

胃癌患者血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白水平及临床意义

林建姣， 刘 艳， 胡红松， 万彦彬， 陈春林

深圳市龙岗区人民医院消化内科，广东 深圳 518172

目的 探讨胃癌患者外周血中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)与其侵袭、转移及预后的关系。方法 收集深圳市龙岗区人民医院2011年1月-2012年6月40例胃癌患者和28名健康体检者的血清标本，通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清NGAL水平。分析血清NGAL水平与胃癌临床病理参数的关系；通过受试者ROC曲线分析确定血清NGAL与癌胚抗原(CEA)诊断胃癌的诊断性能。通过多因素分析，明确血清NGAL水平与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌患者血清NGAL水平明显高于健康对照者。血清NGAL水平与Lauren’s分型、淋巴结转移、浸润深度、远处转移及TNM分期有关(P<0.05)。NGAL取12.51 ng/ml作为血清诊断胃癌的最佳截点值，其灵敏度为84%，特异度为90%。NGAL阳性和阴性患者生存期中位数分别为12个月和27个月，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血清NGAL水平与胃癌的发生、浸润和转移相关,用于胃癌早期筛查、预后评估有重要的临床应用价值。

胃癌；中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白；诊断；预后

胃癌是全球高发的恶性肿瘤之一,近年来，探索新的胃癌相关血清学指标和肿瘤标记物，反映胃癌的生物学特点，提高胃癌的诊断率和生存率成为研究的热点。中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)又名Lipocalin-2，24p3。它在多种恶性肿瘤中表达异常，在肿瘤的增殖、侵袭及转移过程中起着重要的作用[1]。在胃癌的早期诊断、病情监测及预后评价方面均有潜在的临床价值，但NGAL作为一种无创的临床生物学指标，在胃癌临床研究中仍需进一步探讨及明确。本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血NGAL水平，旨在探讨其对胃癌的诊断及预后的临床价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2011年1月-2012年6月在深圳市龙岗区人民医院胃镜及术后病理均证实的胃癌标本40例作为试验组(包括乳头状腺癌、管状腺癌、印戒细胞癌、黏液腺癌)，入选标本术前均未进行放化疗及其他抗肿瘤治疗，术后行常规放化疗，其中男21例，女19例，年龄25～78岁，平均年龄(55.6±1.31)岁，另选取同期健康体检者28名作为对照组，无心、肺、肝、肾等重要脏器疾病，无系统性炎症性疾病，无全身急慢性感染性疾病，肝肾功能正常且行胃镜检查阴性。其中男18名，女10名，年龄28～70岁，平均年龄(52.2±1.35)岁，两组受试者性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。随访时间截至2015年5月。研究方案经医院伦理委员会批准。本研究所有患者均知情同意。

1.2 方法抽取受试者清晨空腹外周静脉血3～5 ml置于抗凝管中，室温静置30 min，4 min，3 000 r/min离心后取血(离心半径13.5 cm)，-80 ℃保存。按照NGAL ELISA试剂盒(上海依科赛生物制品有限公司)说明书所述步骤操作，读取吸光度值，绘制标准曲线，计算血清NGAL 浓度。

2 结果

2.1 试验组与对照组血清NGAL水平胃癌和健康对照组血清NGAL水平分别为(16.32±3.17)ng/ml、(8.34±4.13)ng/ml，两组比较差异有统计学意义(t=8.157，P<0.01)。

2.2 胃癌患者血清NGAL水平与临床病理特征的关系胃癌患者NGAL水平与Lauren’s分型、淋巴结转移、浸润深度、远处转移及TNM分期均具有相关性(P<0.05)，而与肿瘤大小、年龄、性别及分化程度无相关性(P<0.05，见表1)。

表1 血清NGAL水平与胃癌患者临床病理特征的关系

2.3 血清NGAL、CEA对胃癌的诊断价值血清NGAL、CEA水平曲线下面积(AUC)分别为0.916 和0.749。12.51 ng/ml为血清NGAL 截点值时，Yonden指数(灵敏度+特异度-1)最大，为0.74，其筛查胃癌的灵敏度为84%，特异度为90%；而CEA筛选胃癌的灵敏度为68%，特异度为67.5%(见图1)。根据TNM分期进一步分层分析，结果显示，对于Ⅰ期胃癌患者， 血清NGAL的灵敏度明显高于CEA(P<0.05)，但对于Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者，血清NGAL的灵敏度与CEA 的差异无统计学意义(P>0.05，见表2)。

图1 NGAL和CEA筛查胃癌的ROC曲线

表2 不同分期胃癌患者NGAL 阳性率与CEA阳性率 [n(%)]

2.4 血清NGAL与胃癌患者预后的关系NGAL阳性和阴性患者中位生存时间分别为12个月和27个月，差异有统计学意义(P=0.02，见图2)。单因素生存分析结果显示，NGAL是胃癌患者的独立预后因素(P=0.004)。

注：1：NGAL阳性组；2：NGAL阴性组。

3 讨论

近年来，恶性肿瘤发病率已逐年上升，并成为威胁生存的第二大死亡原因。恶性肿瘤的早期发现与其预后密切相关，因此寻求无创、敏感度高及特异性高的理想肿瘤标志物意义重大。研究表明，NGAL不仅在感染性疾病、肾脏疾病及皮肤病等多种良性疾病中发挥重要作用，它在甲状腺癌、乳腺癌[2]、卵巢癌[3]、子宫内膜癌、结直肠癌[4]、肺癌、肝癌、胆管癌、食管癌、胃癌[5]及胰腺癌中均表达异常。

NGAL在肿瘤侵袭、转移中的作用机制尚不完全明确，NGAL作用于MMPs(基质金属蛋白酶)/TIMPs(组织金属蛋白酶抑制因子)，通过NGAL/MMP9结合体延长MMP的蛋白水解活性，促进其降解细胞基底膜，进而介导肿瘤细胞浸润和转移[6-7]，还通过促进上皮-间质转化(epithelio-mesenchymal transition，EMT)改变肿瘤微环境，从而在肿瘤的侵袭和转移中发挥作用[8-9]。NGAL在胃癌中的高表达与H.pylori感染密切相关，有研究[10]表明，NGAL阳性的胃黏膜上皮细胞附近，H.pylori呈簇状分布，H.pylori的某些亚型可以诱导产生NGAL，并能与Fe3+高亲和力结合，介导Fe3+的转运，从而上调铁易感基因的表达，促进肿瘤细胞的增殖和活化，为H.pylori及NGAL共同促进胃癌发生这一观点提供了良好的支持[11]。本研究发现，胃癌患者血清中NGAL水平高于健康对照者，对胃癌的诊断具有较高的灵敏度；另外，胃癌患者NGAL水平与Lauren’s分型、淋巴结转移、浸润深度、远处转移及TNM分期相关。这与Wang等[5]结论一致，提示NGAL水平增高与胃癌的恶性程度及病情严重程度呈正比，提示胃癌生物学恶性程度高、侵袭性强、预后不良，可以作为胃癌患者评估病情严重程度的新指标。

本研究通过ROC工作曲线分析示，血清NGAL检测诊断胃癌的最佳切点值为12.51 ng/ml，具有较高的灵敏度(84%)和特异度(90%)，且在Ⅰ期胃癌患者阳性率更高，比CEA明显有优势。生存分析显示，NGAL阴性患者生存情况优于阳性患者(P<0.05)；胃癌患者血清中NGAL的高水平表达提示其在早期诊断及预后判断中有较重要的价值。

综上所述，血清NGAL检测作为胃癌患者早期筛查和疗效评估的方法，具有广阔的应用前景，为胃癌的诊治提供更积极、合理的治疗方案。鉴于我院相当部分胃癌患者在发现及诊断胃癌时已错过治疗的黄金时期，且部分患者为外来流动人口，加上本研究样本量相对小，时间跨度小，尚需扩大样本量、延长随访时间及多中心研究等进一步验证。

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[11]Krewulak KD, Vogel HJ. Structural biology of bacterial iron uptake [J]. Biochim Biophys Acta, 2008, 17(78): 1781-1804.

(责任编辑：马 军)

The clinical significance and level of serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin in human gastric cancer

LIN Jianjiao, LIU Yan, HU Hongsong, WAN Yanbin, CHEN Chunlin

Department of Gastroenterology, Longgang District People’s Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518172, China

Objective To explore the clinical significance of serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) levels in human gastric cancer.Methods Serum NGAL level was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 40 gastric cancer patients and 28 healthy controls who were collected from the Longgang District People’s Hospital of Shenzhen from Jan.2011 to Jun. 2012. The relationship of serum NGAL level and clinical pathological features in gastric cancer patients was examined, and then its diagnostic performance for screening gastric cancer was evaluated byROCcurve between NGAL and CEA. Otherwise, Cox survival analysis was performed to examine the relationship between serum NGAL level and prognosis in human gastric cancer.Results Serum NGAL level in patients with human gastric cancer was significantly higher than that in healthy controls (P<0.01), and it was correlated with Lauren’s classification, lymph node metastasis, vascular invasion, distant metastasis and the TNM stage of gastric cancer. Furthermore, when the optimal cut-off point of serum NGAL level for diagnosing gastric cancer was 12.51 ng/ml, the sensitivity and specificity were 84% and 90%.Conclusion The potential of serum NGAL level as an early marker and its ability to predict the prognosis of patients with gastric cancer are estimated.

Gastric cancer; Neutrophil gelatinase-associated lipocalin; Diagnosis; Prognosis

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.06.012

林建姣，硕士，主治医师，研究方向：胃肠肿瘤。E-mail: linjeana@126.com

刘艳，硕士，副主任医师，研究方向：胰腺疾病及胃肠肿瘤。E-mail: 793467870@qq.com

R735.2

A

1006-5709(2016)06-0642-04

2015-07-16